高效液相色谱法测定消炎利胆冲剂中芍药苷的含量

（宝鸡文理学院化学化工学院，陕西宝鸡721013）

消炎利胆冲剂主要是由白芍、厚朴、金钱草、五味子等18味中药提取加工而成的复方制剂，具有消炎利胆、活血化瘀、行气止痛、排石等作用［1］。方中主药白芍的指标成分为芍药苷。用HPLC 法测定芍药苷含量［2－4］，操作简便、专属性强，适用于该制剂在生产中的质量控制。

1 实验

1.1 材料、试剂与仪器

芍药苷对照品（批号：112426－201011），中国药品生物制品检定所；消炎利胆冲剂（批准文号：陕药管制字［2001］第3674号），延安市中医医院制剂室。

甲醇、乙腈，均为色谱纯；自制二次蒸馏水。

Agilent 1200 型高效液相色谱仪；UV mini－1240型紫外可见分光光度计；离心机；超声清洗机。

1.2 色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB－C18（250mm×4.6 mm，5μm）；柱温：26 ℃；流动相：0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，体积比）；流速：1.0mL·min－1；进样量：20μL；检测波长：230nm。

1.3 方法

1.3.1 供试品和对照品溶液的制备

取消炎利胆冲剂一小袋置于研钵中研成粉末状，精密称定，混匀，取细粉1g置于50mL 量瓶中，加入适量甲醇，超声处理20 min，自然冷却至室温，用0.45μm的微孔膜过滤得供试品溶液。

另取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.336mg·mL－1的芍药苷对照品溶液。

按处方工艺制备不含白芍的供试品，加甲醇制成阴性对照品溶液。

1.3.2 芍药苷含量的测定

参照芍药苷国家标准中有关物质的测定方法，采用HPLC测定消炎利胆冲剂中芍药苷的含量。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 流动相的选择

分别选择水－甲醇、0.1%冰乙酸溶液－甲醇、0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，体积比）作为流动相，最终根据理论塔板数和峰形，确定0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42）作为流动相。

2.1.2 检测波长的选择

通过全波长扫描，发现芍药苷对照品的最大吸收波长为230nm，确定230nm 为检测波长。

2.2 药品提取方法的选择

分别考察了索氏提取、超声提取和加热回流提取3种方法，结果显示20 min超声提取效果最好，故确定提取方法为超声提取法。

2.3 HPLC测试

芍药苷对照品、供试品及阴性对照品的HPLC 图谱如图1所示。

图1 芍药苷对照品（a）、供试品（b）及阴性对照品（c）的HPLC图谱Fig.1 HPLC Chromatograms of paeoniflorin reference substance（a），the sample（b）and negative reference substance（c）

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系

精密量取芍药苷对照品溶液适量，配制成浓度（μg·mL－1）分别为2.016、10.08、33.6、168、336的系列对照品溶液，用进样针吸取20μL 进样。以对照品溶液浓度（x）为横坐标、色谱峰面积（y）为纵坐标绘制标准曲线，拟合得到回归方程为：y＝28142x－29.842，R＝0.9998（n＝5）。说明芍药苷在2.016～336μg·mL－1范围内线性关系良好。

2.4.2 稳定性

取同一批次供试品（20100326）粉末5份，制备供试品溶液，在相同色谱条件下于0h、2h、4h、8h、24h重复进样，结果测得芍药苷平均峰面积为564.24，RSD 为0.89%，表明24h内样品溶液稳定性较好。

2.4.3 重复性

取同一批次供试品（20100512）粉末6份，制备供试品溶液，精密量取20μL进样测定，结果测得芍药苷的平均含量为0.1124mg·g－1，RSD 为0.68%，表明重复性良好。

2.4.4 精密度

取同一批次供试品（20100914）粉末6份，制备供试品溶液，精密量取20μL，连续进样6次，平均峰面积为547.58，RSD 为0.82%，表明精密度良好。

2.4.5 阴性对照品

将方中白芍去除后组成的各味药，依据医院此方的制备工艺及处方比例制成空白样品，按1.3.1方法处理该样品制备阴性对照品溶液。精密量取20μL进样测定，结果表明基本无干扰。

2.4.6 回收率

取消炎利胆冲剂样品6 份，研细，每份称取约0.5g置于容量瓶中，用移液管加入3种不同浓度的芍药苷对照品贮备液，按照样品溶液制备方法操作，精密量取20μL溶液进样测定，结果见表1。

表1 芍药苷回收率实验结果Tab.1 Results of recovery experiment of paeoniflorin

由表1 可知，芍药苷的平均回收率为100.42%，RSD 为0.97%。

2.4.7 样品测定

按拟定的含量测定方法测定消炎利胆冲剂中芍药苷的含量，结果如表2所示。

表2 芍药苷含量测定结果Tab.2 Results of content determination of paeoniflorin

3 结论

采用超声法提取消炎利胆冲剂中的芍药苷，建立了高效液相色谱法测定芍药苷含量的方法。采用Agilent ZORBAX SB－C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），柱温26 ℃，流动相为0.2%磷酸溶液－甲醇（58∶42，体积比），流速1.0mL·min－1，检测波长230nm。结果表明：在2.016～336μg·mL－1的范围内芍药苷浓度与峰面积呈良好的线性关系，平均回收率为100.42%，RSD 为0.97%。该方法简便、准确、重复性好，可用于消炎利胆冲剂中有效成分芍药苷的含量测定。

［1］张红梅，艾秀娥.消炎利胆冲剂的制备及薄层鉴别［J］.延安大学学报（医学科学版），2004，2（3）：41.

［2］冯秋红.HPLC 法测定胃疡灵颗粒中芍药苷的含量［J］.甘肃中医，2006，19（3）：31－32.

［3］张黎娟，张雪梅，王蓉，等.HPLC 法检测脑心通片中芍药苷含量［J］.安徽医药，2011，15（8）：958－959.

［4］汪正宇，赵向阳.HPLC 法测定安胎益母丸中芍药苷的含量［J］.中国现代医生，2011，49（34）：90－91.