鲍曼不动杆菌多位点序列分型与抗生素耐药表型的关系分析

鲍曼不动杆菌多位点序列分型与抗生素耐药表型的关系分析

金 瓯

目的分析鲍曼不动杆菌多位点序列分型及其与抗生素耐药表型之间的关系。方法选取我院2013年11月～到2014年10月收集到的非重复性鲍曼不动杆菌101株进行分子流行病学分型分析。结果101株鲍曼不动杆菌共分为10个ST型，以CC92为最大的克隆复合体，多黏菌素B的敏感率达到100.0%。优势克隆CC92与非CC92的XDR菌株比例均高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92与非CC92各自的MDR菌株、XDR菌株比例比较无差异（P＞0.05）。结论鲍曼不动杆菌中，这可能与其对医院环境的高度适应性有关；但在耐药性上，其与非CC92菌株并无差异，医院环境的适应性等与CC92的流行可能存在密切的关系。

鲍曼不动杆菌；多位点序列分型；抗生素耐药表型

鲍曼不动杆菌是革兰氏阴性菌的一种，属于非发酵菌，不仅在自然界中有着十分广泛的分布，而且是造成医院感染的重要原因之一［1］。为控制鲍曼不动杆菌，要对流行菌株和与流行病学无关菌株进行分析，因此，要比较菌株的亚种水平。多位点序列分型是一种高分辨率分型方法，可以有效的认识鲍曼不动杆菌的毒力、耐药性等情况，还可以监控其传播情况。CC92是目前最大的克隆群，在我国多地区流行，但是其高耐药性导致其难以被抗生素清除。为探究鲍曼不动杆菌多位点序列分型及其与抗生素耐药表型之间的关系，本文就我院2013年11月～2014年10月收集到的非重复性鲍曼不动杆菌101株作为研究对象，现将鲍曼不动杆菌多位点序列分型及其与抗生素耐药表型之间的关系具体报告如下，为今后的临床提供必要的指导意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取我院2013年11月～2014年10月收集到的非重复性鲍曼不动杆菌101株作为研究对象，共涉及男性患者59例，女性患者42例，患者年龄13～81岁，平均年龄为（56.8±3.1）岁。所有患者经过临床检查均符合按卫生部颁布的《医院感染诊断标准》［1］，所有患者均知晓本次研究的目的，自愿参见本次实验。

1.2 方法

1.2.1 菌株 所有101株鲍曼不动杆菌均经法国生物梅里埃公司生产的VITEK‐2 Compact全自动微生物分析仪及API20试纸条鉴定。

通过多位点序列分型方法（MLST）对不同菌株进行分子流行病学分型，采用PCR扩增法对7个管家基因（包括gltA、gdhB、gyrB、recA、rpoD、cpn60、gpi）上的保守区域（长度在305-513 bp）进行扩增和测序，并将测序结果提交到鲍曼不动杆菌MLST数据库中，做常规BLAsT比对，得到不同管家基因对应的等位基因编号及序列型（STs）。同时通过eBURST软件对菌株的亲缘性进行分析，将序列型（STs）归类为克隆复合体（CC）。以7个位点中有6个及以上相同位点为遗传相关克隆。

1.2.2 抗生素纸片 采用纸片扩散法对15种抗生素的耐药情况进行药敏试验，判断其耐药表型。抗生素纸片包括：哌拉西林/他唑巴坦（TZP）、头孢吡肟（FEP）、头孢哌酮/舒巴坦（SCF）、头孢曲松（CRO）、头孢他啶（CAZ）、妥布霉素（TOB）、氨曲南（ATM）、左氧氟沙星（LEV）、环丙沙星（CIP）、替加环素（TGC）、多西环素（DO）、多黏菌素B（PB）、阿米卡星（AK）、亚胺培南（IPM）、美罗培南（MEM），上述抗生素纸片均由Oxoid公司提供。

1.3 评价标准

参照美国临床实验室标准化委员会于2007年制定的相关标准（M100-S17规定的折点）［2］对不同病原菌对临床常用抗生素的耐药性和敏感性做判断。参照《中国鲍曼不动杆菌感染诊治与防控专家共识》［3］对耐药表型进行定义：多重耐药（MDR）指的是病原菌对3个及以上不同种类抗生素不敏感的情况；广泛耐药（XDR）则指的是对大多数种类的抗生素不敏感，只对一种或两种药物敏感的情况。

1.4 统计学方法

本次实验数据采用SPSS 12.0软件进行统计学分析，其中计数资料以“n，%”表示，对比采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 鲍曼不动杆菌多位点序列分型

本文101株鲍曼不动杆菌共分为10个ST型，分别包括ST195型、ST208型、ST254型、ST457型、STn1型、STn2型、STn3型、STn4型、STn5型、STn6型，其中，前4种为数据库里已有基因型，共占到77.22%，而后6种为新发现的ST型，详见表1。

表1 鲍曼不动杆菌MLST分型与耐药表型的关系

采用eBURST软件对101株菌株进行分析，可见ST195型、ST208型、ST457型及STn1型、STn2型属于主要克隆群CC92，而ST195型又属于预测的祖先型，共77株，占76.23%；其余ST254型、STn3型、STn4型、STn5型及STn6型均为独特型。将本文的101株菌株与125株中国菌株进行比对eBURST分析，则226株菌株中共分CC92、CC2和CC3等3个主要克隆群，以CC92为最大的克隆复合体。

2.2 鲍曼不动杆菌的药敏试验结果

对15种抗生素的耐药情况进行药敏试验，结果可见，除了多黏菌素B（100.0%）、替加环素（31.9%）、亚胺培南（10.1%）、阿米卡星（9.2%）、妥布霉素（8.6%）、美罗培南（6.8%）、哌拉西林/他唑巴坦（2.2%）、头孢哌酮/舒巴坦（2.2%）外，其余临床常见抗生素的敏感菌均为0，且在敏感性不为0的抗生素中，只有多黏菌素B的敏感率达到100.0%，替加环素为31.9%，其余均在30%以下。

2.3 鲍曼不动杆菌多位点序列分型及其与抗生素耐药表型之间的关系

优势克隆CC92中，共77株，包括ST195 43株（MDR菌株：12；XDR菌株：31）、ST208 22株（MDR菌株：6；XDR菌株：14）、ST457 6株（MDR菌株：0；XDR菌株：6）、STn1 3株（MDR菌株：0；XDR菌株：3）、STn2 3株（MDR菌株：0；XDR菌株：3），其MDR菌株数共20株，占25.97%，XDR菌株数共57株，占74.03%；非CC92共24株，包括ST254 8株（MDR菌株：0；XDR菌株：8）、STn3 4株（MDR菌株：4；XDR菌株：0）、STn4 5株（MDR菌株：0；XDR菌株：5）、STn5 4株（MDR菌株0：；XDR菌株：4）、STn6 3株（MDR菌株：3；XDR菌株：0），其MDR菌株数共7株，占29.17%，XDR菌株数共17株，占70.83%；优势克隆CC92与非CC92的菌株中的XDR菌株比例均显著高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92与非CC92各自的MDR菌株比例、XDR菌株比例，比较均无统计学意义（P＞0.05）。

3 讨论

目前，鲍曼不动杆菌呈世界性流行，是我国重要的病原菌之一，相关研究报道显示，其耐药率呈现上升的趋势，而可以选则的药物越来越少，因此研发新的药物是临床治疗鲍曼不动杆菌的焦点问题。鲍曼不动杆菌是临床分离率仅次于铜绿假单胞菌的革兰阴性杆菌，很容易造成暴发流行［4-5］。而随着广谱抗生素类药物的快速更新与大量应用，鲍曼不动杆菌对多种抗生素的耐药性也相应增加，甚至出现多重耐药的情况［6-9］。鲍曼不动杆菌有23个流行克隆，要想对其院内传播进行有效控制，就要做到对爆发流行菌株、流行病学无关菌株进行有效的区分。这也需要研究人员从菌株亚种水平上进行分析和比较。多位点序列分型（MLST）是目前广泛应用的一种高分辨率的分型方法［10-12］，是认识鲍曼不动杆菌的流行性、多重耐药性、毒性、监控鲍曼不动杆菌传播的重要手段。CC92如何可以广泛流行以及其对抗生素的耐药性等问题是目前存在争议的问题［13］。本文对我院各科室收集的101株非重复性鲍曼不动杆菌菌株进行多位点序列分型和耐药分型，发现CC92克隆复合体是最大的克隆复合体，ST型（ST92、CC92）为其祖先包含了224株菌株，为我院的主要流行克隆，特别是ST195型和ST208型，分别占到试验菌株的42.57%和21.78%，在我院广泛流行，这可能与其对医院环境的高度适应性有关。第二大克隆群为CC113，共有54株菌株，包括18个ST型，第三大克隆群为CC109，共包括45株菌株，包括20个ST型。对其耐药表型进行分析，则无论是CC92还是非CC92克隆复合体，均表现出高耐药的XDR菌株更多的情况，但两者无太大差别。

本次研究结果说明，101株鲍曼不动杆菌共分为10个ST型，以CC92为最大的克隆复合体，多黏菌素B的敏感率达到100.0%。优势克隆CC92与非CC92的XDR菌株比例均显著高于MDR菌株（P＜0.05），但CC92与非CC92各自的MDR菌株、XDR菌株比例比较无差异（P＞0.05）。

综上所述，鲍曼不动杆菌中，CC92菌株的流行性最为广泛，但在耐药性上，其与非CC92菌株并无差异。但本文的样本量总体比较小，且除了对抗生素的耐药性有一定的关系外，还可能与医院的环境的适应性等有关系，因此为了使研究更加精密准确，可以通过进一步扩大样本量，限制研究环境等多种因素，分析鲍曼不动杆菌多位点序列分型及其与抗生素耐药表型之间的关系，从而为临床合理用药提供指导依据。

参考文献

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Relationship Between Multiple Point Sequence Typing of Acinetobacter Bauman and the Phenotype of Antibiotic Resistance

JIN Ou Clinical Laboratory，People's Hospital of Wenjiang District，Chengdu 611130，China

ObjectiveTo analyze the relationship between the multiple point sequence typing of acinetobacter bauman and the phenotype of antibiotic resistance.MethodsThe molecular epidemiological analysis of 101 strains of non repetitive bauman was collected from November 2013 to October 2014 in our hospital.Results101 strains of acinetobacter baumannii were divided into 10 types of ST，to CC92 for maximum clonal complex，polymyxin B susceptibility rate reached 100%. The proportion of CC92 and non XDR CC92 was significantly higher than that of MDR（P＜0.05），but there was no significant difference between CC92 and non MDR（CC92）and XDR（P＞0.05）.ConclusionThis may be related to the high adaptability of the hospital environment，but there is no significant difference between and non CC92 strains.

Bauman acinetobacter，Multiple point sequence typing，Antibiotic resistance phenotypes

R446

B

1674-9316（2015）28-0185-03

10.3969/j.issn.1674-9316.2015.28.139

611130 四川省成都市温江区人民医院检验科