HPLC测定茶多酚与葡萄柚提取物混合前后主要成分含量的变化

卢国英 周荣汇 雷丽珊

HPLC测定茶多酚与葡萄柚提取物混合前后主要成分含量的变化

卢国英 周荣汇 雷丽珊

茶多酚、葡萄柚提取物的主要成分分别是儿茶素、柚皮苷，通过HPLC测定两者主要成分儿茶素及柚皮苷混合前后峰面积的比值，进一步推测混合前后儿茶素及柚皮苷含量的变化情况。结果显示儿茶素中单体与混合后峰面积比值≈1.07，柚皮苷中单体与混合后峰面积比值≈1.06，混合物中单体峰面积总和与混合后总峰面积比值≈1.07。茶多酚与葡萄柚提取物混合前后主要成分含量没有发生明显变化，从药理学角度进一步显示两者没有发生化学反应。

茶多酚；葡萄柚提取物；HPLC；主要成分

茶多酚是一种组成复杂、分子量及其结构差异很大的多酚类及其衍生物混合物，主要由儿茶素、黄酮醇、花色素、酚酸及其缩酚酸等组成的有机化合物，以儿茶素为主的黄烷醇类化合物占茶多酚总量60％～80％[1]。茶多酚具有抗菌性、抗氧化能力强、预防心血管疾病、糖尿病等疾病的生物学作用[2-4]。葡萄柚提取物是一种从葡萄柚的种籽、果肉及排色的皮膜部分中提取的物质。研究发现葡萄柚提取物对细菌（如金黄色葡萄球菌、大肠杆菌等）[5]及真菌[6]均有较高的抑菌活性。

本课题组前期研究发现茶多酚、葡萄柚提取物配伍后具有相加作用，推测主要是因混合物同时茶素及柚皮苷的抑菌效果[7-8]。由于中药的配伍使用较为复杂，需从药理学角度进一步证实两者是否发生化学反应。因此，从临床药学的角度通过HPLC检测两者混合前后主要成分含量变化情况。

1 材料与方法

1.1 材料

Agilent 1260高效液相色谱仪；色谱级乙腈（Merck）；醋酸（国药集团化学试剂有限公司）；其他试剂均为分析纯。水为双蒸水并经0.45 μm微孔滤膜过滤。

茶多酚（湖南金农开发有限公司，总儿茶素含量98％）；葡萄柚提取物（西安旭煌生物技术有限公司，柚皮苷含量99％）。

1.2 方法

1.2.1 溶液的制备：（1）对照品溶液：分别精密称取对照品单体儿茶素10 mg、单体柚皮苷10 mg，混合物10 mg（儿茶素5 mg、单体柚皮苷5 mg）置5 ml量瓶中，加80％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀。（2）供试品溶液：分别精密称取单体茶多酚10 mg、单体葡萄柚提取物10 mg，混合物10 mg（茶多酚5 mg、葡萄柚提取物5 mg）置5 ml量瓶中，加80％乙醇超声溶解并稀释至刻度，摇匀，进样分析前使用0.45 μm微孔滤膜过滤，取其滤液为供试品溶液。1.2.2 色谱条件的选择：流动相：乙腈-水（0.5％HAc），梯度洗脱：16％-16％-95％ -95％（0.01-10-10.1-20 min）；色谱柱：Agilent COD C-18（100×4.6 mm，5 μm）。检测波长270 nm，流速1.0 ml/min，柱温30℃，进样量20 μl。

2 结果

单体儿茶素、单体柚皮苷及两者混合后的HPLC图结果示图1，图2，图3。可以得出以下结果：儿茶素：单体与混合物峰面积比值=7 036 112/6 546 926≈1.07；柚皮苷：单体和混合后柚皮苷峰面积比值=9 586 837/9 008 870≈1.06；混合物：单体峰面积总和和混合后总峰面积比值=16 622 949/15 555 803≈1.07。根据峰面积与浓度成正比关系，两者在混合后主要成分儿茶素及柚皮苷的量没有显著变化。

3 讨论

近年来茶多酚、葡萄柚提取物在临床上作为天然防龋物备受关注。茶多酚及其主要成分儿茶素能够抑制变异链球菌、牙周致病菌的生长[9-10]。柚皮苷在口腔方面的应用也有报道[11]。然而，两者作为漱口液在单组分别使用时存在着各自的不足：由于唾液中含有富含脯氨酸的蛋白质，这种蛋白质能与多酚类物质交联形成不溶于水的络合物，从而引起口腔细胞的收缩，产生涩味，且浓度越高的茶多酚苦涩味越明显，为达到有效抑菌浓度的茶多酚溶液具有一定的苦涩感；临床研究发现葡萄柚提取物GSE漱口液无着色现象、对黏膜刺激性小，大多数受试者乐于接受，但其抑制菌斑的能力弱于口泰漱口液[12]。

中药的配伍应用是临床上治疗疾病的一个重要手段，它既能克服单方的缺点又能增加使用疗效。不论单方还是配伍后的复方药都是通过方中的活性成分或主要成分来发挥作用，但中药的成分较为复杂，配伍不仅仅是简单的相加过程，甚至可能生成有毒物质或两者疗效抵消等相反的结果。前期实验结果得出茶多酚、葡萄柚提取物对变异链球菌具有相加疗效[6]，但仍需通过药理实验检测两者是否发生化学反应，为两者的配伍使用提供可靠依据。

HPLC作为中药指纹图谱最常用的技术之一，具有很高的分离度，可把复杂的化学成分进行分离而形成高低不同的峰，从而组成一张色谱图，这些色谱峰的高度和峰面积分别代表了各种不同化学成分和其含量，量的概念的引入、定性和定量的结合赋予中药指纹图谱更大的功效[13]。峰的高度（或峰面积）表示某个化学成分的含量，而各峰的峰高（或峰面积）的比值体现了各种化学成分间的相对含量，因此，峰面积与浓度成正比关系。前期国内研究通过HPLC测定复方药配伍后主要成分的含量变化，证实该法操作较简单、重现性好、结果可靠[14]。本实验选用HPLC检测茶多酚、葡萄柚提取物主要成分混合前后含量的变化情况，仅需得出主要成分儿茶素、柚皮苷两者在混合前后封面积的比值，从而推测两者混合后含量有无发生明显变化，即可证实两者是否发生反应。本研究结果证实两者在混合前后其浓度没有明显的变化，该法较为简单、直观、可靠。为将来临床上茶多酚、葡萄柚提取物的配伍应用提供了更加有利的药理依据。

图1 单体儿茶素HPLC图

图2 单体柚皮苷HPLC图

图3 儿茶素、柚皮苷混合后HPLC图

4 致谢

感谢福建医科大学药学院李少光博士的支持与合作。

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Determination of the Main Component Changes in Tea Polyphenol After Decoction With Grapefruit Seed Extract by HPLC

LU Guoying ZHOU Ronghui LEI Lishan, Department of stomatology, the Affiliated Hospital of Fujian Medical University , Fuzhou 350002, China

Catechins and naringin are the main components of tea polyphenols and grapefruit seed extract.To detect the main component changes in tea polyphenol after decoction with grapefruit seed extract by HPLC, further to speculation the changes of the contents in tea polyphenol after decoction with grapefruit seed extract.The results show the catechins group： the peak area ratio is about 1.07, the naringin group： the peak area ratio is about 1.06, the mixture group： the peak area ratio is about 1.07.It shows that there is no changes of the contents in tea polyphenol after decoction with grapefruit seed extract.

Tea polyphenols, Grapefruit extract, HPLC, Main component

R285

A

1674-9308（2015）22-0152-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.22.112

350002福州，福建医科大学附属口腔医院牙体牙髓科

卢国英，E-mail：270670912@qq.com

福建省教育厅B类课题资助项目（JB12126）