聚桂醇液在兔胃壁组织中硬化病理过程的观察研究

司徒光伟 周珞华 孙远昌 屈 兵 陈小路 高 翼

(1湖北省武汉第八医院武汉肛肠医院;2武汉钢铁总公司职工总医院肛肠外科;3武汉科技大学医学院，武汉市 430008)

硬化剂作为治疗痔的一种疗法已经使用多年，种类较多。乙氧硬化醇其商品名称为聚桂醇注射液，属于聚氧乙烯月桂醇醚类化合物，作为一种新型硬化剂，已批准上市并在血管科和消化科广泛应用，其在血管壁上可以瞬间产生硬化作用，从而闭塞血管;但其在黏膜组织中的硬化过程还需要进一步的经过动物实验验证。本实验将聚桂醇注射液注射在兔胃壁组织间，一定时间后切取胃壁组织，观察胃壁组织的病理变化，从而明确硬化剂在黏膜组织中的硬化病理过程，现将结果报告如下。

1 试验对象和材料

1．1 试验药品 聚桂醇注射液，化学名:聚氧乙烯月桂醇醚;分子式:C12H25(OCH2CH2)Noh(n=9);分子量:582．8。由陕西天宇制药有限公司提供原液为1%、3%两种浓度聚桂醇液。

1．2 实验动物 武汉生物制品研究所有限责任公司实验动物室提供的健康成年日本大耳白兔80只，普通级，雌雄随机，雌兔未孕，分别称重并编号，体重1．8 ～2．0 kg。

1．3 麻醉药品 依托咪酯注射液(恩华制药股份有限公司)，规格为20 mg:10 mL。枸橼酸芬太尼注射液(宜昌人福制药有限公司)，规格为0．1 mg:2 mL。

1．4 地点 武汉科技大学动物实验中心

2 试验设计思路及要求

根据不同原液浓度聚桂醇注射液，将试验组分成1%组为F组和3%组为H组。在规定时间内完成活体标本制作并记录标本制作时间，每组完成40例标本并作组别记号，同样剂量做两只标本以便死亡备用。制作完成后将活兔放入饲养笼饲养。设定在术后24 h取出已标记标本，并于每24 h取1只制作标本1个，直到取完为止。每一个被取标本，在取出后放置到已对应标记好的标本瓶中，用10%福尔马林液固定，送病理组取材制片。将病理切片在40倍、100倍和400倍镜下观察病理组织变化，并作定性定量分析。

3 试验步骤

3．1 麻醉管理 ①麻醉方式:静脉全身麻醉;②注药部位:耳缘静脉头皮针穿刺;③用药剂量和方法:依托咪酯0．5 mg/kg、20 ～30 s内注完，芬太尼5 μg/kg、20 s注完，8 min后如手术尚未结束则追加依托咪酯0．5 mg/kg;④苏醒时间:术毕1～8 min;⑤注意事项:依托咪酯呼吸、循环影响小，故可用于保留自主呼吸的麻醉，但无镇痛作用，故需追加一定剂量的阿片类镇痛药;芬太尼作用时间为20～40 min，适合短时间手术麻醉;目前尚无与依托咪酯混合注射的临床研究，故需分别用药。

3．2 标本制作方法 ①麻醉后，将兔上腹部毛发剃净，取正中切口，切开腹壁进入腹腔;②将兔胃壁提起，在前壁正中肌层组织与浆膜层间注射规定浓度原液0．5 mL，原液中每10 mL加入1 mL美蓝注射液;③每个注射原液的胃壁均可见1．0 cm×1．0 cm大小浸润灶，在注射灶两端约0．5 cm处分别用细丝线缝合打结标记;④全层缝合腹壁，在兔耳上作组别标记。

3．3 取材 ①在设定时间，将已制作完成的兔从饲养笼中取出，在心前区注射2 mL空气后标本兔死亡;②切开腹壁原切口，将胃组织提起，在前壁出，将已标记的部位胃壁组织全层完整切除;③将切除标本放入与之同标记号的10%福尔马林瓶中。

3．4 病理取材 取丝线标记组织，去除周围多余组织，于组织中央部位切片，常规石蜡包埋切片，HE染色。

3．5 观察指标 ①大体观察;②成纤维细胞数密度:400倍光镜下观察HE染色切片，每个标本随机选5个视野(0．005 2 mm2/视野)，目测计数并计数切片内单位面积成纤维细胞数量，结果取均数。

4 结果

4．1 病理及成纤维细胞 实验早期，因温度、湿度控制不当及饲料问题导致实验动物死亡5只，因术后切口感染死亡2只。除去预计的死亡因素及其他不可控因素外，将实验观察时间均确定在21 d。大体观察:标记处组织颜色稍深，呈淡蓝色，质地较硬，随时间推移，有较明显的丘状隆起，略高出于浆膜。每张标本的病理报告和成纤维细胞计数。详见表1。

表1 病理报告及成纤维细胞计数

4．2 成纤维细胞状态 成纤维细胞数密度分布见图1、 图2;两组数字统计学处理见表2。

图1 H组成纤维细胞密度

图2 F组成纤维细胞密度

表2 两组成纤维细胞密度均数

4．3 主要病理变化 出现反应的时间及病理变化:F组在第5天开始可见浆膜有炎症反应并有着色较深的成纤维细胞增生，成纤维细胞胞体较大，毛细血管生成较多，血管内皮细胞肥大;成纤维细胞数量第6天达高峰，以后逐渐减少，同时纤维细胞逐渐增多，胶原纤维也逐渐增多，第12天大量形成胶原纤维。F组典型时间病理图片见图3～图10。H组在第3天黏膜下见出血、水肿、有炎症细胞浸润，有少量成纤维细胞增生，毛细血管增多。成纤维细胞逐渐增多，到第4天达最高峰，以后逐渐减少;同时胶原纤维逐渐增多，第8天以后，成纤维细胞逐渐减少，变成纤维细胞，胶原纤维平稳增加。H组典型时间病理图片见图11～图17。

图3 F组第5天HE×40

图4 F组第5天，HE×100

图5 F组第5天，HE×400

图6 F组第17天HE×40

图7 F组第17天，HE×100

图8 F组第17天，HE×400

图9 F组第20天，HE×40

图10 F组第20天，HE×100

图10 F组第20天，HE×400

图12 H组第3天HE×40

图13 H组第3天，HE×100

图14 H组第3天HE×400

图15 H组第18天HE×40

图16 H组第18天HE×100

图17 H组第18天HE×400

5 讨论

聚桂醇原液被认为有致组织硬化作用。根据其硬化原理，其制剂已广泛应用于临床治疗，如治疗食管下端、胃底曲症或破裂急性出血、下肢静脉曲张症等，这些治疗效果已被充分地临床验证［1～3］。在这些临床治疗中一般是将聚桂醇液体注入到管腔内，其主要病理原理为:聚桂醇为一种两性分子，液态时聚集成胶体束，一旦与细胞表面膜脂相互作用即可发生细胞损伤［4］。血管内皮细胞损伤后迅速启动凝血反应，同时伴有大量胶原纤维形成，在局部形成团块状凝聚，致硬化形成［5］。

聚桂醇液注射在黏膜组织中是否会形成硬化现象与在腔内硬化过程是否一致?我们将兔分成两组，选取其胃壁组织作为观察载体，按照设计思路，在注射完成后，保证实验兔一定成活，并在规定的时间内按时去取出标本。

在取出的标本中首先观察组织中与聚桂醇集中的部位里组织结构的变化。两组中，注射第5天和第3天开始出现炎性反应和成纤维细胞出现，明显与药物浓度有相关性。出现成纤维细胞的第2天开始，都有成纤维细胞计数突然猛增的过程，其后1周左右出现成纤维细胞数逐渐减少，在10 d后细胞数保持平稳状态。随着成纤维细胞出现，开始有少量胶原纤维成分出现，与细胞数量多少无明显关系。约10 d后，在成纤维细胞增加不明显的时候，胶原纤维成分在逐渐增多。15 d后胶原纤维成分多量产生，并增粗呈紧密排列现象。炎性反应逐渐降低。在胶原纤维产生过程中，组织中的血管闭合及萎缩，无坏死现象发生。这组病理现象与在其他组织中发生的反应相一致［6］。

在注射过聚桂醇的组织中，20 d内完成了一次完整的炎性反应过程，在产生大量胶原纤维后，压迫局部血管，导致局部血液循环成分减少，组织机化，局部组织变硬却又不发生坏死。这个病理现象，说明聚桂醇液在黏膜组织中也可以产生明显机化的硬化反应。痔的治疗时，是将硬化剂注入到痔核组织中，有完整的黏膜层结构，因黏膜组织机化后可导致痔体萎缩。如果注射到食管下段黏膜组织中，同样因为组织机化压迫曲张的静脉达到止血目的。

实验过程中对两种不同浓度原液做对照观察。镜下所见整个硬化过程与药物浓度无关，有一定时间关系，浓度高者出现硬化时间稍早。在整个硬化过程中，在组织中出现的时间一般在注射后3～5 d开始，7～10 d组织开始硬化，15 d后硬化过程才完成。在组织中的硬化时间与血管腔内发生硬化的时间有明显差异。由于硬化发生时必须要有成纤维细胞增殖，组织中的成纤维细胞来自于组织中静止的纤维细胞和未分化间充质细胞，因而硬化时间一定慢于在血管中的时间。

［1］ 崔世军，张 建，谷涌泉，等．聚桂醇400治疗下肢静脉曲张疗效和安全性的临床研究［J］．药物不良反应杂志2010，12(4):234 －239．

［2］ 罗显克，王大东，谭建荣．内镜下注射聚桂醇硬化剂治疗食管静脉曲张28例分析［J］．微创医学2010，5(6):586－587．

［3］ 刘小平，杜 昕．泡沫硬化剂与其治疗下肢静脉曲张的临床应用进展［J］．中国血管外科杂志(电子版)，2010，2(1):67－68．

［4］ Zimmet SE．Sclerotherapy treatment of telangiectasias and varicose veins［J］．Tech Vase Interv Radiol，2003，6(3):116－120．

［5］ Coleridge Smith P．Foam and liquid sderoherapy for varicose veins［J］．Phlebology，2009，24(Suppl 1):62 －72．

［6］ 王延蜀，刘 宇，吴美娟，等．聚桂醇注射兔面部腮腺区组织的实验研究［J］．实用口腔医学杂志，2012，28(4):453－456．