纯酰素激活免疫作用的研究

张荣轩陈文星陆大杰张 怡

（1 河南九福来科技股份有限公司，河南 郑州 450002；2 常州大学制药与生命科学学院，江苏 常州 213161；3 南京中医药大学，江苏 南京 210023）

纯酰素激活免疫作用的研究

张荣轩1，2陈文星3陆大杰1张 怡1

（1 河南九福来科技股份有限公司，河南 郑州 450002；2 常州大学制药与生命科学学院，江苏 常州 213161；3 南京中医药大学，江苏 南京 210023）

目的研究芦荟多糖成分纯酰素对免疫功能的影响。方法利用单核巨噬细胞实验考察纯酰素对巨噬细胞吞噬功能的影响；应用环磷酰胺造成小鼠免疫低下考察纯酰素对白细胞水平的影响；应用小鼠溶血素抗体生成实验考察纯酰素对抗体生成的影响。结果纯酰素100 mg/kg和200 mg/kg可明显促进单核巨噬细胞的吞噬能力，同时可增强由环磷酰胺引起的免疫低下，升高免疫低下小鼠的白细胞水平。纯酰素50、100、200 mg/kg可促进小鼠的溶血素抗体生成。结论纯酰素可明显增强单核巨噬细胞的吞噬能力，升高免疫低下小鼠的白细胞水平，促进小鼠的抗体生成，增强机体的体液免疫作用。

纯酰素；单核巨噬细胞；白细胞；溶血素抗体

芦荟，原产于地中海、非洲，为百合科多年生草本植物。具有杀菌，抗炎，免疫，解毒，消肿之功效。芦荟中的主要物质成分有蒽醌类、多糖类、维生素类、矿物质类、活性酶类、纤维类。其中芦荟多糖类物质被公认为是芦荟中活性最好的一类。芦荟多糖经过进一步分离纯化后，发现其组成主要为乙酰化甘露聚糖[1-3]。乙酰化甘露聚糖已经被世界公认在植物中最好的多糖类物质，它是芦荟中独有的活性物质。乙酰化甘露聚糖并不是都能为人体吸收，科学家在对比不同分子量的吸收率后，将最容易被吸收部分再次分离浓缩，所得即称之为纯酰素。纯酰素大约只占到乙酰化甘露聚糖总量的75%～80%。研究中发现，纯酰素也有很强的免疫促进作用。本文即对纯酰素展开免疫功能研究，考察其对特异性和非特异性免疫的影响。

1 材料与方法

1.1 动物：雌性ICR小鼠，体质量18～22 g，由南通大学实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（苏）2008～0010。

1.2 试剂：纯酰素，注射粉针形式，呈淡棕色，规格：每瓶含可溶性纯酰素成分0.75 g。给药时直接用注射用无菌生理盐水溶解，并稀释成所用浓度。环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司），台盼蓝，无水乙醇（A.R），EDTA-2Na盐（北京鼎国生物技术发展中心），RPMI-1640（GibcoBRL），小牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司），Trypsin（Amresco 2430B18）。

1.3 小鼠单核巨噬细胞吞噬功能：取ICR小鼠80只，雄性，随机分为8组，分别为对照组（ip等体积生理盐水）、纯酰素低剂量组（50 mg/kg）、纯酰素中剂量组（100 mg/kg）、纯酰素高剂量组（200 mg/kg）、灵芝多糖组，给药10 d后，小鼠每10 g体质量尾静脉注射（1/3）稀释的印度墨汁0.1 mL，立即计时，并分别于2、10 min眼眶取血25 μL，加入2 mL 0.1%碳酸钠，于核酸蛋白分析仪600 nm处测定OD值，并称取肝，脾重量，按公式计算吞噬指数（A）。

A=K1/3×体质量/（肝重+脾重）

K=（logOD1-logOD2）/（T2-T1）

小鼠免疫低下模型：取ICR小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，①正常组（ip生理盐水）；②模型组（ip生理盐水）；③④⑤纯酰素（50、100、200 mg/kg）；⑥灵芝多糖组，各组连续给药。第7天后，除正常组外，其余各组均腹腔注射环磷酰胺（10 mg/kg），连续3 d。给药第10天后，小鼠眼眶后静脉丛取血，EDTA抗凝，测定其RBC、WBC、HB、PLT等血液指标，分析结果并统计。

1.4 小鼠溶血素抗体生成

1.4.1 试剂配制：Alsever’s溶液：葡萄糖2.05 g，柠檬酸钠0.80 g，氯化钠0.42 g，蒸馏水100 mL，无菌过滤。都氏试剂：NaHCO3 1.0 g，KCN 0.05 g，K3Fe（CN）6 0.2 g，蒸馏水1000 mL。补体的制备：取300 g左右的豚鼠4只，颈动脉插管采血，3000 rpm/10 min离心分离血清，置-20 ℃保存，临用时以生理盐水稀释10倍。绵羊红细胞（SRBC）悬液的制备：2倍体积的Alsever溶液和1倍体积的绵羊红细胞混匀，置于4 ℃冰箱保存备用。临用时取上述保存的绵羊红细胞，用生理盐水洗涤3次，每次1000 rpm离心5 min，弃上清液，再用生理盐水以1∶10（V/V）稀释。

1.4.2 方法：取ICR小鼠60只，雌雄各半，随机分为6组，每组10只，分别为受试物纯酰素低、中、高剂量组（50、100、200 mg/kg）、灵芝多糖组（800 mg/kg）、模型组（NS）与对照组（NS），给药1次/天，共10 d。各组于给药4次后腹腔注射绵羊红细胞悬液0.2 mL/只进行免疫，继续给药3次后，除正常组外各组均腹腔注射环磷酰胺（10 mg/kg），每天1次，连续3 d。于给药10 d后，小鼠进行眼眶取血进行溶血素测定。

凝固血液3000 rpm/10 min离心取血清，生理盐水稀释100倍后进行实验，然后于37 ℃水浴中保温10 min，冰浴终止反应后，2000 rpm离心10 min，取上清液1 mL，都氏试剂3 mL于试管内，同时取绵羊红细胞稀释液0.25 mL，都氏试剂4 mL，于另一支试管内，充分摇匀，放置10 min后，于540 nm处以对照管作空白，分别测定各管吸收度值。按下列公式计算每只小鼠样品的半数溶血值HC50∶样品的HC50=（样品吸收度值/羊红血球半数溶血时吸收度值）×稀释倍数。

2 实验结果

2.1 纯酰素对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响：见表1。结果显示纯酰素中剂量（100 mg/kg）、高剂量（200 mg/kg）给药组小鼠的单核巨噬细胞的吞噬指数与对照组小鼠比较有显著提高，P值分别＜0.05和＜0.01，说明纯酰素中高剂量具有明显的增强单核巨噬细胞的吞噬能力作用。

表1 纯酰素对小鼠单核巨噬细胞吞噬功能的影响（M±SD，n＝10）

2.2 纯酰素对免疫低下小鼠白细胞水平的影响：见表2、3。小鼠腹腔注射给予环磷酰胺后导致其造血系统的造血干细胞增殖分化受到明显抑制，从而导致白细胞水平明显下降。纯酰素低、中、高剂量给药10 d后的免疫低下小鼠的白细胞（WBC）水平均高于模型组，经比较检验均有显著性差异（P＜0.05），说明纯酰素能升高免疫低下小鼠的白细胞水平，从而增强小鼠的抵抗能力。纯酰素对血红蛋白及血小板参数未见明显影响。

表2 纯酰素对免疫低下小鼠白细胞和红细胞水平的影响（M±SD，n=10）

2.3 纯酰素对小鼠溶血素抗体生成的影响：见表4。实验结果显示纯酰素各剂量对对小鼠的半数溶血值均有明显的提升，各组HC50值均明显高于模型组（P＜0.05和P＜0.01）。纯酰素表现出明显的对小鼠特异性免疫抗体的促生成作用。

表3 纯酰素对免疫低下小鼠血红蛋白和血小板水平的影响（M±SD，n=10）

表4 纯酰素对绵羊红细胞所致小鼠溶血素抗体生成的影响（M±SD，n=10）

3 讨 论

植物多糖的活性显著性已经引起了研究者的关注，其在临床的表现也充分证实多糖活性的特殊性。现在来源于植物的多糖众多，尤其是来源于传统中药的多糖更是广泛，如灵芝多糖、茯苓多糖等等，对其研究也是非常的深入[4]。芦荟多糖也是众多多糖中的一种，已有研究显示芦荟多糖具有多种活性，如调节免疫、保肝、降糖、抗肿瘤、抗氧化等作用[3，7]。而调节免疫被认为是芦荟多糖的最主要作用。芦荟多糖在体外可增强单核巨噬细胞的吞噬作用[5]，并对正常小鼠的免疫功能有全面的增强作用[8]，刺激小鼠脾淋巴细胞增殖，并促进IL-1的分泌[6]。那么芦荟多糖进一步纯化后所得纯酰素对免疫的作用是怎样的呢？实验结果显示，纯酰素表现出促进单核巨噬细胞的吞噬能力的作用，并升高免疫低下小鼠的白细胞水平，表明纯酰素在促进非特异性免疫功能方面作用明显。溶血素抗体实验也进一步确认了纯酰素对B淋巴细胞参与的抗体生成有显著的增强作用。从以上结果看，芦荟多糖进一步纯化后所得纯酰素在免疫方面的作用并没有因为纯化而消失，而是得到了保留，这就为纯酰素的实际应用提供了良好的保证。

[1]林雪,贾敬芬,黄琳娟,等.RP-HPLC用于芦荟多糖的单糖组成研究[J].食品科学,2006,27(4):192-195.

[2]闫吉昌,崔春月,张奕,等.芦荟多糖的分离纯化及结构分析[J].高等学校化学学报,2003,24(7):1189-1192.

[3]李天东,罗英,李俊刚.芦荟多糖生物活性研究进展[J].安徽农业科学,2009,37(5):2033-2035.

[4]丁保金,金丽琴,吕建新.多糖的生物活性研究进展[J].中国药学杂志,2004,39(8):561-564.

[5]陈伟,林新华,陈俊,等.库拉索芦荟多糖对小鼠腹腔巨噬细胞的体外激活作用[J].中国药学杂志,2005,40(1):34-37.

[6]贾敏,周玲玲,郭胜伟,等.芦荟多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖及产生IL-1的影响[J].南京中医药大学学报,2006,22(2):89-90.

[7]王勇,王宗伟,黄兆胜,等.芦荟多糖对肿瘤化疗的增效和减毒作用研究[J].中药新药与临床药理,2002,13(2):89-91.

[8]苗明三,常章富.芦荟多糖对正常小鼠免疫作用影响的研究[J].中医药学刊,2003,21(8):1242-1243.

R-33

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1671-8194（2015）04-0058-02