一例猪流行性腹泻病的诊断与治疗

张文通，魏 凤，李 峰，苗立中，刘吉山，沈志强*，，

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

一例猪流行性腹泻病的诊断与治疗

张文通2，魏 凤1，李 峰1，苗立中1，刘吉山1，沈志强*1，2，

（1.山东省滨州畜牧兽医研究院，山东 滨州 256600；2.山东绿都生物科技有限公司，山东 滨州 256600）

山东省惠民县某规模养猪场发生一例疑似猪流行性腹泻病，根据发病情况调查、临床症状、病理剖检、病原分离、RT-PCR诊断，确诊病原为猪流行性腹泻病毒。根据确诊结果，按照猪流行性腹泻病防治措施操作，猪场发病情况立即得到好转。

猪流行性腹泻病；诊治

猪流行性腹泻（PED）是由猪流行性腹泻病毒（PEDV）引起的猪病毒性腹泻疫病，是严重危害养猪业的重要疫病之一，给世界各国的养猪业造成了巨大经济损失[1-2]。2014年2月，山东惠民县某养猪场发生了以哺乳仔猪水样腹泻、并伴有呕吐等特征的疑似猪流行性腹泻疾病，现将诊治过程报告如下。

1 发病情况

2014年2月初发现有哺乳仔猪（3～21日龄）呕吐、腹泻、脱水。同圈仔猪发病率达100%，不同圈发病仔猪死亡率在11.1%～30.0%。用抗生素治疗无效。

2 临床症状

发病哺乳仔猪普遍精神沉郁，食欲下降，水样腹泻、个别仔猪伴有呕吐，仔猪普遍偏瘦，但体温正常。

3 病理变化

剖检病死仔猪发现：小肠扩张、肠壁变薄，肠内充满黄色液体，肠系膜淋巴结水肿。

4 病毒分离鉴定

4.1 病料采集

取病死仔猪小肠黏膜、内容物及水样腹泻粪便作为分离病毒的样品，将样品冷冻保存。

4.2 病料处理

将采集的样品用灭菌PBS研磨，反复冻融，在4 ℃条件下3 000 r/min离心30 min、吸取上清，将上清液用0.22μm一次性滤器过滤除菌、分装保存于-80 ℃备用。

5 病毒的RT-PCR鉴定

5.1 引物设计

根据GenBank JN825712.1序列设计，扩增长度661 bp，用于鉴定猪流行性腹泻病毒。引物序列如下：

上游引物：CGGTTCTATTCCCGTT

下游引物：GAAGCACTTTCTCACTATC

图1 RT-PCR结果

5.2 病毒的RT-PCR RT-PCR扩增产物大小约660 bp，与预期一致（如图1所示）。回收RTPCR产物，送往上海生物工程有限公司测序。测序结果与GenBank上报道的猪流行性腹泻病毒序列同源性在96%～99%之间。

6 治疗措施

经上述诊断确认病原为猪流行性腹泻病毒。建议该养猪场采取如下措施：

6.1 保温及消毒措施

建议保持猪舍温度高于正常温度1～2 ℃；保持猪舍卫生整洁及全面、定期消毒。

6.2 补液，防止脱水措施

可以购买正规厂家的优质口服补液盐，让发病猪群普遍饮用。

6.3 防止继发细菌感染

提取病料的RNA，并同时提取PEDV阴性对照（细胞培养液）及PEDV阳性细胞毒的RNA。病毒RNA用宝生物工程(大连)有限公司提供的RNA提取试剂盒提取，一步法RTPCR反应成分及反应程序如下。

RT-PCR反 应 体 系 为：10×Buffer 5μL，MgCl2(25 mmol/ L) 10μL，dNTPs(10 mmol/L) 5μL，Rnase Inhibitor(40 U/μL) 1μL，AMV RTase XL(5u/μL) 1μL，AMV-Optimized Taq(5 U/μL) 1μL，上游引物P1（20μmol/L）1μL，下游引物P2（20μmol/L）1μL ，模板5μL，RNase Free ddH2O up to 50μL。

RT-PCR反应条件为：50 ℃反转录1 h；94 ℃ 5 min；进入PCR循环，94 ℃ 45 S，55 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，35个循环后，72 ℃延伸10 min。反应结束后，用0.8%琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。

可用痢菌净防止细菌感染。

6.4 高免血清疗法

5.3 病毒的RT-PCR鉴定结果

琼脂糖凝胶电泳检测显示，病毒的

对发病仔猪采用高免血清被动治疗方法。采集发病猪群中痊愈后老母猪血液，制备高免血清：分离血清（注意无菌操作），在血清中添加一定比例的阿莫西林抗生素。按照仔猪体重，肌肉注射高免血清（建议0.5 mL/kg，1次/d，连用2次）。

6.5 疫苗接种

建议对全场猪群紧急免疫猪传染性胃肠炎、猪流行性腹泻二联活疫苗。高免血清治愈的发病仔猪猪群1周后进行疫苗接种。

该养猪场按照上述治疗措施进行了操作，发病猪群死亡率及发病率大幅降低。实施2周后病情基本缓解，猪场进入稳定状态。

7 小结

自2011年以来，猪腹泻病成为严重危害养猪行业的重大传染病，给养猪业造成巨大经济损失。专家证实猪流行性腹泻病毒是猪腹泻病的主要病原之一。笔者在收到山东惠民某猪场暴发疑似猪流行性腹泻病的疫情后，通过发病情况调查、临床观察及病理剖检，初步判断疫情为猪流行性腹泻引起。收集病料进行病毒分离及RTPCR鉴定，证实病原为猪流行性腹泻病毒。并按照猪流行性腹泻疫情采取防治措施，经过保温、消毒、补液、防继发感染及紧急免疫接种，疫情得到有效控制。

[1] 殷震，刘景华.动物病毒学[M].2版.北京：科学出版社，1997：688-690.

[2] 蔡宝祥.动物传染病学[M].4版.北京：中国农业出版社，2001：300-301.

2015-07-06)

山东省农业科学院院地科技合作引导计划项目（214YDHZ32）；山东省现代农业产业技术体系生猪创新团队项目（ SDAIT-06-022-15）

张文通，男（1979-），河南荥阳人，硕士，助理研究员，主要从事基因工程疫苗研究。