山西道地药材连翘组织培养快速繁育技术研究

吴 潇，刘阳，张咪咪，师慧丽，杨忠义(山西农业大学园艺学院，山西晋中030801)

连翘［Forsythia suspensa(Thunb.)Vahl］，木犀科连翘属植物，园林中常应用于公园绿地、庭院和街道，可丛植、孤植，病虫害较少，易于管理［1－2］。同时连翘具有清热止吐、清肝利胆、除湿退黄、通调三焦、畅达血脉、保肝护心等作用［3］，含有金丝桃素类等重要药用价值和具有抗病毒、抗癌和治疗AIDS 的应用前景［4］。

随着人们对连翘药用价值研究的不断深入和园林绿化建设事业的快速发展，连翘传统的繁殖方式越来越不能满足市场的需求，再加上培育出了许多观赏价值更高的新品种，有些新品种用传统的繁殖方法繁殖比较困难。山西省凭借在道地药材党参、黄芪和苦参3个品种药材的研究利用，获得国家中药材GAP基地认证。目前全国近年来已公布共有63家企业48个品种得到GAP认证，山西在48个品种中占有三席位置，这为山西从事中药材工作的同仁提供了坚定道地药材品种选育的信心，加快了培育道地资源品种，提升了山西道地药材品种繁育及推广进程，也为山西道地药材连翘进一步开发利用提供方向。该研究利用组织培养的无性繁殖技术拟筛选出一种高效的连翘快繁方法，通过正交试验法利用不同激素种类和浓度水平进行比较，最终通过方差分析筛选出最适宜连翘的组织培养体系，从而为连翘的大规模发展提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 试验材料及处理 从春季品种纯正、生长健壮、无病虫害的连翘采集所萌发抽生的一年生嫩枝，将剪取的嫩枝蘸取适量洗衣粉仔细清洗2遍，再用流水冲洗后，放入无菌水中浸泡备用。在超净台上将枝条切成3～4 cm的含有2个腋芽的嫩茎茎段，放置在70%的酒精中消毒30 s，用无菌水冲洗3次，每次3 min。转入0.1% 氯化汞溶液中消毒7 min［5］，用无菌水漂洗3次，每次3 min，然后接种到培养基上。

1.2 培养条件 温度为22～26℃，培养基pH为5.8，光照度为1 500～2 000 lx，光照周期为10～12 h/d。

1.3 试验方法

1.3.1 初代培养。采用四因素三水平L9(34)正交试验设计［6］。每个处理接种20瓶，重复3次。接种21 d后，开始统计结果。

1.3.2 增殖培养。以MS为基本培养基，加入不同浓度水平的6-BA、IBA和蔗糖，将经过初代培养筛选出来的最佳培养基的植物材料转接，采用三因素三水平L9(34)进行增殖培养。每个处理接种20瓶，重复3次。接种23 d后，统计试验结果。

1.3.3 生根培养。由于激素水平对连翘生根起着主要作用［7－8］，所以生根培养以 MS、25 g/L 的蔗糖为基本培养基，加入不同浓度的6-BA和IBA作为生根培养基。将增殖培养筛选出来的最适培养基生长良好的芽转接到生根培养基中进行生根培养。每个处理接种20瓶，重复3次。接种27 d后，统计生根率，对生长出的根进行长度测定。

2 结果与分析

2.1 初代培养 接种7 d，培养基上茎段开始萌芽生长。在接种21 d后，统计成活率，结果表明(表1)，以MS为基本培养基(试验序号a4、a5、a6号培养基)的植株在初代培养成活率较高，均超过了70%，其中a5号培养基的成活率最高，达80.0%。

将初代培养的统计结果通过SAS软件进行方差分析［9－10］，方差分析结果(表2)显示，1MS培养基对连翘初代培养成活率的影响极显著高于3/2MS、1/2 MS培养基;1.0 mg/L 6-BA对连翘初代培养成活率的影响极显著高于1.5、0.5 mg/L 6-BA;0.3 mg/L IBA对连翘初代培养成活率的影响极显著高于0.2、0.1 mg/L IBA;25 g/L蔗糖对连翘初代培养成活率的影响极显著高于35、30 g/L蔗糖。

表1 初代培养正交试验结果

表2 各因素各水平之间初代培养成活率的多重比较

2.2 增殖培养 接种23 d后，统计试验结果(表3)显示，加入1.0 mg/L 6-BA的MS基本培养基(试验序号b4、b5、b6号培养基)的植株在增殖培养成活率较高，均超过了70%，试验序号b4培养基的成活率最高，达88.3%。

表3 增殖培养正交试验结果

增殖培养方差分析结果(表4)显示，1.0 mg/L 6-BA对连翘增殖培养成活率的影响极显著高于0.5、1.5 mg/L 6-BA;0.1 mg/L IBA对连翘增殖培养成活率的影响极显著高于0.2 mg/L IBA;35、25 g/L蔗糖对连翘增殖培养成活率的影响极显著高于30 g/L蔗糖。

表4 各因素各水平之间增殖培养成活率的多重比较

2.3 生根培养 接种7 d后，部分培养基芽基部开始出现白色小突起。接种27 d后，统计生根率，然后对部分根进行长度测定。结果表明(表5)，试验序号c1、c4、c5和c6号培养基的植株生根率较高，均超过了80%，试验序号c4培养基的成活率和平均根长均是最高的，分别达93.3%、9.7 mm。

表5 生根培养试验结果

各因素各水平之间诱导生根率和平均根长的多重比较结果(表6)显示，1.5 mg/L的6-BA对连翘组织诱导根形成的影响极显著高于 1.0和 2.0 mg/L的 6-BA，0.1 mg/L 的IBA对连翘组织诱导根形成的影响极显著高于0.2和0.3 mg/L的IBA。1.5 mg/L的6-BA对连翘组织平均根长形成的影响极显著高于 1.0和2.0 mg/L的6-BA，0.1 mg/L的IBA对连翘组织平均根长形成的影响极显著高于0.2和0.3 mg/L的IBA。

表6 各因素各水平之间诱导生根率和平均根长的多重比较

3 结论

通过不同激素种类及浓度水平配比，经过正交试验法以及方差分析筛选出连翘的最佳组织培养体系为初代培养基(MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.3 mg/L+ 蔗糖 25 g/L)、增殖培养基(MS+6-BA 1.0 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖 35 g/L)、生根培养基(MS+6-BA 1.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖25 g/L)，生根率可达90%以上，生根根数较多，适合大规模栽植。张红梅等研究表明MS+6-BA 1 mg/L+IBA 0.1 mg/L+3%蔗糖的培养基是最适合花叶连翘的增殖培养基，能够诱导出大量丛生苗［11］，该研究与其在激素浓度配比以及在基本培养基选择上的结果均相同。孙海龙研究认为6-BA的浓度对连翘分化影响很大，浓度过低会使分化效果差，而浓度过高则会导致玻璃化现象严重［12］。该研究筛选出来三类培养基的6-BA的浓度均在其研究的适宜范围内，能够与其保持一致。

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