COBAS E411电化学发光分析仪检测高敏肌钙蛋白分析测量范围与临床可报告范围的验证

王一杉，金 铃，崔薇薇，梅燕萍

COBAS E411电化学发光分析仪检测高敏肌钙蛋白分析测量范围与临床可报告范围的验证

王一杉，金 铃，崔薇薇，梅燕萍

目的：对COBAS E411电化学发光分析仪检测高敏肌钙蛋白（hs-cTn）的分析测量范围（analytic measurement range，AMR）与临床可报告范围（clinical reportable range，CRR）进行验证。方法：采用临床送检标本的混合血浆，使用肝素钠进行抗凝。参考CLSI EP6-A2及相关文献，对COBAS E411电化学发光分析仪检测血浆中的hs-cTn进行AMR和CRR的验证实验。结果：COBAS E411电化学发光分析仪检测hs-cTn的功能灵敏度为3.12 ng/L，AMR在8.01～9 351 ng/L之间，CRR在3.12～112 212 ng/L之间，与厂商提供的范围一致。结论：对于采用COBAS E411电化学发光分析仪检测hs-cTn，仪器报告结果＞10 000 ng/L时，验证其最大稀释倍数并建立其临床可报告范围具有一定的指导意义。

电化学发光分析仪；hs-cTn；分析测量范围；临床可报告范围

0 引言

肌钙蛋白（cTn）是反映心肌损伤最敏感和特异的生物学标志物，目前已广泛用于急性心肌梗塞（AMI）的早期诊治[1-4]。在有心肌缺血临床表现的情况下，检测cTn的升高与降低是诊断AMI的基石。同时cTn增高的水平也与冠状动脉疾病的严重程度和不良预后密切相关。用高敏感的方法把以前传统方法不能检测到的cTn（＜10 ng/L水平）检测出来，检出者称为高敏肌钙蛋白（hs-cTn）。hs-cTn检测的临床应用，能及时对AMI进行诊断，提高诊断正确率。本单位参加了ISO 15189质量体系的认可工作，要求检验方法和程序在用于临床分析前需进行分析性能验证，内容至少应包括正确度、精密度和可报告范围。虽然试剂厂商提供了hs-cTn试剂的分析测量范围（analytic measurement range，AMR），但并未提供该试剂的临床可报告范围（clinical reportable range，CRR），而AMR参数是否适用于本实验室的COBAS E411电化学发光分析仪也需要通过验证。因此，我们采用美国临床和实验室标准协会（clinical and laboratory standards institute，NCCLS）提供的EP6-A方案对本实验室Roche公司的COBAS E411电化学发光分析仪测定hs-cTn进行功能灵敏度、AMR和CRR的验证实验[5-6]。

1 材料与方法

1.1 标本来源

本次实验所用混合血浆均取自临床送检标本，均使用肝素钠进行抗凝。标本的高值均接近此项目AMR的上限，标本的低值均接近此项目功能灵敏度。

1.2 仪器与试剂

分析仪器为Roche COBAS E411电化学发光分析仪，分析试剂为Roche肌钙蛋白T检测试剂（TroponinThsSTAT），稀释液为RocheDiluentMultiAssay。

1.3 方法

1.3.1 功能灵敏度试验

取Roche hs STAT专用质控品PCU1，参考靶值24 ng/L，进行1:7稀释，使其理论值接近厂商提供的功能灵敏度。将上述制备质控品分装12套，-20℃冷冻保存，每天上机检测一次，得到数据后分别计算其、s、变异系数（coeffcient of variation，CV），以用于功能灵敏度的评估。

1.3.2 AMR验证

取临床高浓度（H）和低浓度（L）混合血浆各一份，分别按照5H、4H+1L、3H+2L、2H+3L、1H+4L、5L的关系进行配制混合，形成系列验证血清共6份，并根据混合比例计算出理论值。将6份不同浓度的混合血清重复测定2次，取测定结果均值作为测定值。以X表示理论值，以Y表示测定值，判断所有实验点是否呈明显直线趋势。若所有实验点呈直线趋势，用直线回归分析对数据进行处理，得到Y＝bX＋a。以相关数据 r≥0.975、b=1.00±0.03为标准判断AMR在本实验涉及的浓度。

1.3.3 CRR验证

取高浓度混合血浆，用Roche专用的DiluentMultiAssay稀释液分别按照1∶6、1∶8、1∶10、1∶12、1∶14的比例进行稀释，每份样本测定2次，取测定结果均值作为测定值。将测定值与理论值进行比较，稀释回收率的计算公式为：（测定值/理论值）×100%。采用的判断标准为稀释回收率小于（100.0+20.0）%。

2 结果

2.1 功能灵敏度

根据连续检测12 d的结果，计算得出x、s、CV分别为3.12 ng/L、0.047 ng/L、15.1%，其CV值小于20%，故认为本实验室COBAS E411电化学发光分析仪检测hs-cTn的功能灵敏度可确认为3.12 ng/L。

2.2 AMR试验

取高浓度混合血浆标本H（9 351 ng/L）、低浓度混合血浆标本L（8.01 ng/L）各一份，按上述方法进行测定。测定均值与理论值见表1。测定值与理论值之间的直线方程为Y=0.998X-134.76，r=0.999，以r≥0.975、b=1.00±0.03为判定标准，表明本实验室COBAS E411电化学发光分析仪检测 hs-cTn的AMR为8.01～9 351 ng/L（如图1所示），与厂商提供的AMR 3～10 000 ng/L基本一致。

表1 AMR试验各浓度混合血浆理论值与实测值

图1 hs-cTn AMR验证结果

2.3 CRR验证

取高浓度混合血浆标本H（9 351 ng/L），按前述方法进行稀释，测定值、理论值及回收率见表2。

表2 CRR验证回收率计算

以回收率在（100.0+20.0）%范围内为标准，可确定hs-cTn的最大稀释倍数为1∶12。结合功能灵敏度为3.12 ng/L，可确认本实验室的COBAS E411电化学发光分析仪检测hs-cTn的CRR为3.12～112 212 ng/L。

3 讨论

cTn是心肌特有的调节蛋白，具有独特的抗原表位，心肌特异度较高。正常血清中cTn蛋白表达极低，在心肌损伤早期即可被释放进入血液，出现时间早于心肌酶谱指标，水平也高于心肌酶谱，可在血液中持续2周，且不受骨骼肌损伤的影响，临床诊断的特异度及灵敏度均高于心肌酶谱[7-8]。由于cTn相对于心肌酶谱具有更高的特异性和敏感性，目前已取代传统的心肌酶谱成为诊断急性冠状动脉综合征首选的心肌损伤标志物。在2007年推出的由美国临床生化学会提供的关于急性冠状动脉综合征生化标志物的诊断指南中，更是推荐cTn作为首选诊断心肌梗死的生化标志物。

cTn的传统检测方法敏感性较低，在早期出现心肌缺血症状或心电图未出现明显改变时，由于释放入血液中的cTn水平不高，若采用传统方法则可能无法检出，进而引起诊断延迟，且使用传统的检测方法其在参考范围上限的99%的精密度也无法满足临床要求。高敏肌钙蛋白T（hs-cTnT）检测有广泛的应用前景，特别在急性冠状动脉综合征的诊断中，具有高特异度、高灵敏度的特点，为疾病的早期诊断、危险分层和预后判断提供了更多的机会。急性冠状动脉综合征的主要病理机制是不稳定的冠状动脉粥样硬化斑块破裂或内膜损伤，促进血小板聚集和纤维蛋白堆积，血栓形成，产生心肌缺血，引发心肌细胞坏死，急性时便形成AMI[9]。关于hs-cTn的定义，主要是根据最低检出限和测定的不精密度2个方面在低cTn浓度范围的分析性能进行判定，一般认为，用高敏感的方法能够把目前传统方法不能检测到的cTn（＜10 ng/L水平），或能把全部健康人群中可以检测到的cTn，同时在参考范围第99百分位的CV≤10%的检出者称为hs-cTn。本次实验使用Roche生产的高敏肌钙蛋白T检测试剂盒为Rohce公司研发的最新高敏TnT试剂盒，采用三联吡啶钌标记技术、链霉亲和素-生物素技术、磁性微粒子技术、电启动的化学发光反应等技术，具有试剂稳定、准确性高、精密度好、测量范围宽、特异性优异的特点。我们通过功能灵敏度试验验证，可确认hs-cTn的功能灵敏度为3.12 ng/L，CV为15.1%。根据检测方法在参考范围上限第99百分位的CV水平，通常把CV≤10%称为指南可接受，CV≤20%称为临床可接受，CV＞20%称为不可接受。本次功能灵敏度试验CV为15.1%，处于临床可接受水平。厂商给出hs-cTn的功能灵敏度为3 ng/L，与试验结果基本一致。

临床工作中常发生CRR超出了AMR。当CRR超出AMR时，通过稀释样本或浓缩样本等处理方式可使样本待测物浓度处于分析检测范围内，再将检测结果乘以稀释或浓缩的倍数后，得出样本的CRR。而样本稀释后，处于分析物周围的非分析物浓度及成分的变化对分析物参与反应的强化或阻挠作用亦会有所变化，必然使样品测定结果引入误差，即基质效应[10]。基质效应在临床工作中是无法避免的，凡是经过处理的样本和原始样本的基体状态不相同，就必然会产生基质效应。临床工作中，如要克服基质效应对检测结果带来的误差，常用方法是使待测样本处于相同的基体环境中，即应使用与被测样本相同的基体进行稀释测定，以抵消基质效应的影响。厂商给出hs-cTn的AMR范围为3～10 000 ng/L，但在实际工作中，部分AMI患者的样本测定值常超过该范围。通过临床工作发现，在COBAS E411电化学发光分析仪上进行hs-cTn测定，当测定值超过厂商给出的AMR时，仪器均报告＞10 000 ng/L，如果不进行稀释就把结果报告给临床医生，则很难正确反映出患者体内的hs-cTn水平变化，所以根据自己的试验条件进行CRR验证，是每个实验室必须进行的工作。部分使用COBAS E411电化学发光分析仪的实验室在进行hs-cTn稀释测定时，使用生理盐水进行样本稀释，但对标本进行稀释后产生的基质效应所造成的误差是否满足临床可接受的要求，本次试验未加以验证。为了最大程度上减小基质效应对hs-cTn测定的影响，本次CRR试验选用Roche专用的Diluent MultiAssay稀释液进行样本稀释，其主要成分为缓冲后的马血清基质，其基质更接近人类血浆。试验结果表明采用其稀释高浓度样本至1∶12倍，测量偏差仍在可接受范围内。结合功能灵敏度试验的结果，可确认本实验室的COBAS E411电化学发光分析仪hs-cTn的可报告范围为3.12～112 212 ng/L。

临床工作中常会遇到检测样本的结果超过测试项目提供的线性范围，由于检测系统不同，厂商在说明书中提供的检测项目的AMR、CRR是否适合，各实验室都应结合自身条件加以验证方可采用。本次试验确定了采用COBAS E411电化学发光分析仪检测hs-cTn的功能灵敏度及所能达到的最大稀释倍数，对于临床工作有一定的指导意义。同时建议实验室应规范各自的样本稀释程序，为临床提供准确、可靠的检测结果。

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（收稿：2015-06-12 修回：2015-09-15）

Validation of analytic measurement range and clinical reportable range of COBAS E411 electrochemiluminescence analyzer for hs-cTn

WANG Yi-shan,JIN Ling,CUI Wei-wei,Mei Yan-ping
（Department of Clinical Laboratory,Nanjing First Hospital of Nanjing Medical University,Nanjing 210006,China）

Objective To validate the analytic measurement range(AMR)and clinical reportable range(CRR)of COBAS E411 electrochemiluminescence analyzer for hs-cTn.Methods Submitted plasma underwent anticoagulation with heparin sodium.Then the AMR and CRR of COBAS E411 electrochemiluminescence analyzer for hs-cTn were validated with references to CLSI EP6-A2 and related documents.Results The analyzer had the functional sensitivity as 3.12 ng/L, AMR between 8.01 and 9 351 ng/L and CRR between 3.12 and 112 212 ng/L.All the detection results accorded with those provided by the suppliers.Conclusion When used to detect hs-cTn,COBAS E411 electrochemiluminescence analyzer has to have its maximum dilution multiple validated and CRR established in case the detection result is more than 10 000 ng/L.[Chinese Medical Equipment Journal，2015，36（12）：97-99]

electrochemiluminescence analyzer;hs-cTn;analytic measurement range;clinical reportable range

R318.6；TH776

A

1003-8868（2015）12-0097-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2015.12.097

王一杉（1978—），男，主管检验师，主要从事临床检验及质量体系方面的研究工作，E-mail：9518313@qq.com。

210006南京，南京医科大学附属南京医院医学检验科（王一杉，金 铃，崔薇薇，梅燕萍）

梅燕萍，E-mail：4940556@qq.com