苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对家蚕的感染性分析

兰丽盼，朱伟，吴小锋，黄美红，朱建忠

（1.桐乡市蚕业管理站，浙江桐乡 314500；2.浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310058）

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒对家蚕的感染性分析

兰丽盼1，朱伟1，吴小锋2，黄美红1，朱建忠1

（1.桐乡市蚕业管理站，浙江桐乡 314500；2.浙江大学动物科学学院，浙江杭州 310058）

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒作为一种新型微生物源低毒杀虫剂，能够防治大多数鳞翅目昆虫并广泛应用于农业生产，它对同属于鳞翅目昆虫的家蚕是否具有感染性是该生物农药在桑保和蚕区植保上推广的关键。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒；家蚕；感染性

杆状病毒是一类特异感染节肢动物的病毒，呈杆状，在感染细胞的细胞核内复制，能够感染大部分鳞翅目、双翅目和膜翅目昆虫。苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒（AcMNPV）和家蚕核型多角体病毒（Bm-NPV）分别是杆状病毒科核型多角体病毒属多粒包埋型和单粒包埋型的两个代表种，两者除了应用于昆虫杆状病毒表达系统外，苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒还作为一种新型微生物源低毒杀虫剂，广泛应用于农业害虫防治［1～3］。

生物农药是当前农作物病虫害综合防治所提倡推广应用的安全防治方法，具有生态安全性和农产品质量安全等优点，是农业可持续发展的重要内容。虽然苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒能够防治大多数鳞翅目昆虫，但桐乡市桑保和植保上却没有推广应用，推测可能对同属于鳞翅目的家蚕具有感染性。Guo等的研究表明AcMNPV可以感染家蚕的某些品种，如54A、皓月和兰10等［3］。本文主要探讨Ac-MNPV能否在桐乡市桑保和植保上推广应用，因此本实验选用的是我市当家蚕品种秋丰×白玉。

1 材料和方法

1.1 材料

家蚕品种为秋丰×白玉，23～25℃条件下普通桑叶饲育，桐乡市蚕业有限公司繁育；家蚕细胞（BmN）和草地贪夜蛾细胞（Sf9）由浙江大学吴小锋教授实验室提供，分别于35 mm培养皿内贴壁生长，细胞密度9×105/皿，置于细胞培养箱，温度27～28℃；设立阴性对照，细胞内毒素检查用无菌水，厦门市鲎试剂实验厂有限公司；阳性对照，为野生型BmNPV，病毒滴度1×106pfu/ml，试验用样品，AcMN-PV，病毒滴度1×106pfu/ml，上述两种病毒均由浙江大学吴小锋教授实验室提供；无菌注射器，为圣贝诺医疗用品有限公司产品。

表1 AcMNPV病毒对家蚕细胞的感染试验Table 1Experiment on the infection of AcMNPV virus in silkworm cells

表2 AcMNPV病毒对家蚕的感染试验Table 2Experiment on the infection of AcMNPV virus in silkworm

1.2 病毒感染家蚕细胞

无菌条件下用无菌注射器分别吸取10 μl的阴性对照、阳性对照和AcMNPV三个种样品，感染家蚕（BmN）细胞；另增加一个阳性对照，即吸取10 μl AcMNPV感染Sf9细胞，感染后将细胞置于27～28℃培养箱继续培养5～7 d，显微镜下观察家蚕细胞和Sf9细胞的感染情况。

1.3 病毒经皮感染四龄起蚕

四龄起蚕放置在4℃冰箱数分钟，然后将不同处理用注射器从幼虫腹部节间膜处穿刺接种，穿刺时针头平行插入且轻推针筒，注意不伤其内部器官。每头幼虫注射量30 μl，接种30 min后再饲喂桑叶。不同处理重复三组，每组试验10头蚕。

2 结果

2.1 病毒感染家蚕细胞

杆状病毒是一类以昆虫细胞为天然宿主的双链DNA病毒，具有高度的种属特异性，不感染脊椎动物，对人、畜无害。AcMNPV的宿主主要是草地贪夜蛾，其细胞为Sf9；BmNPV的宿主是家蚕，其细胞为BmN，都可以用来包装扩增杆状病毒并表达蛋白。BmNPV感染家蚕细胞的典型症状与AcMNPV感染Sf9细胞的典型症状相似，肉眼可见细胞增殖明显变慢或不增殖，细胞开始变大，随后细胞脱落不贴壁，最后裂解。实验表明，BmNPV对家蚕细胞有明显的感染效果，AcMNPV对Sf9也有明显的感染效果，但对家蚕细胞的感染肉眼无法观察判断（表1）。

2.2 病毒经皮感染四龄起蚕

BmNPV是家蚕血液型脓病的病原，受BmNPV感染的家蚕发病后体躯肿胀，体色乳白，常爬至蚕座边缘，皮肤破裂流出脓汁后死亡，组织液化黑化。根据Guo等的报道，BmNPV感染的家蚕会出现造成宿主组织的液化和黑化，AcMNPV感染家蚕后不会造成家蚕宿主组织的液化和黑化［3］。

3 分析

BmN细胞来源于家蚕的卵巢细胞［4］，Sf9细胞来源于草地贪夜蛾卵巢细胞［5］。表1可知，AcMNPV感染Sf9细胞症状明显，然而感染BmN细胞肉眼没有观察到明显感染症状，原因可能是AcMNPV病毒在家蚕卵巢细胞内复制缓慢，导致家蚕卵巢细胞感染症状轻微以致肉眼难以观察［6］。

本文AcMNPV感染家蚕采用无菌穿刺方法。根据表2结果可知，用AcMNPV穿刺接种四龄起蚕，大部分实验家蚕未经大眠上蔟结茧，即从四眠品种变为三眠蚕。原因可能是AcMNPV基因组中有一编码蜕皮甾体尿苷二磷酸葡糖转移酶的基因egt，egt基因是杆状病毒非必需的早期基因。AcMNPV感染虫体后，egt的表达使昆虫体的蜕皮激素失活，干扰和阻碍了受染宿主的正常发育进程，抑制了幼虫的蜕皮与变态［7］。

苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒作为一种新型生物农药，也有着生物农药共有的弱点：①防治机理是通过感染害虫诱发患病，防治效果较为缓慢；②有效活性成分易受环境因素的制约和干扰，质量稳定性差；③生产成本高，农民难以接受［8］。另外市场上的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒农药一般都和其他化学农药配比以提高药效，目前中国农药信息网上登记的AcMNPV农药有四种，2015年春蚕期笔者购买其中一种AcMNPV农药进行对家蚕的毒性试验，添食第二天家蚕全部中毒死亡，原因是该农药其有效成分除AcMNPV外还添加了对家蚕剧毒的甲维盐。综上可见，市场上销售的苜蓿银纹夜蛾核型多角体病毒虽在植保上应用较广，防治效果较好，但在桑保和蚕区植保上尚难以推广应用。

通过实验，本文初步探讨了AcMNPV对桐乡市当家蚕品种秋丰×白玉的感染情况，为桐乡市桑保和植保中是否利用AcMNPV生物杀虫剂的决策提供了理论参考。

［1］薛贵收，肖娱玉，朱江，等.昆虫杆状病毒杀虫剂的研究与应用进展［J］.江苏农业科学，2009，（2）：8～11.

［2］齐江卫，王培丹，张珂，等.苜蓿银纹夜蛾病毒杀虫剂对橄榄甜菜夜恶的田间防效［J］.江苏农业科学，2014，42（6），143～144.

［3］彭伟，陈爱春，汪生鹏.重组AcMNPV感染家蚕后造成宿主组织液化的机制分析［J］.蚕业科学，2012，38（4）：680～687.

［4］普孝英，洪锡钧，陈敏，等.BmN细胞有丝分裂及其染色体的研究［J］.蚕业科学，2003，29（2），136～141.

［5］FU Yue-Jun，ZHAO Jie，LIANG Ai-Hua，et al.AcMNPV-mediatied expression of BmK IT protomtes the apoptosis of Sf9 cells and replication of AcMNPV［J］.Acta Physiologica Sinica，2015，67（3），305～311.

［6］庄兰芳，张翌，张惠展，等.重组AcMNPV载体携带的外源基因在家蚕中的动态表达［J］.药物生物技术，2008，15（5），331～336.

［7］彭建新，陈曲侯.杆状病毒egt基因的结构功能与表达［J］.病毒学报，1994，10（1），93～95.

［8］郭荣.我国生物农药的推广应用现状及发展策略［J］.中国生物防治学报，2011，27（1），124～127.

Infectivity Analysis of Autographa Californica Nuclear Polyhedrosis Virus in Silkworm

LAN Li-pan1,ZHU Wei1,WU Xiao-feng2,HUANG Mei-hong1,ZHU Jian-zhong1
（1.Tongxiang Sericulture Management Station,Jiaxing 314500 Zhejiang,China; 2.College of animal science,Zhejiang University,Hangzhou 310058,China）

Autographa californica nuclear polyhedrosis virus(AcMNPV)is a new type of microbial source of low toxicity pesticides that can control the majority of lepidopteran insects and is widely used in agricultural production.Whether it has infectivity in silkworm is the key to the promotion and protection of biological pesticides in mulberry silkworm area on plant protection.

AcMNPV;silkworm;infectivity

S884.5

A

0258-4069［2015］04-028-03

兰丽盼（1983-），女，山东青岛人，硕士，农艺师。主要从事蚕保和蚕桑技术推广。E-mail：lanlipan@126.com。