肉牛专用运输车降低运输应激效果试验

辛春艳，付 浩，魏 通，李晓波，王绿林，王付省，赫亚歌，王朝阳，邓立新

（1.河南农业大学牧医工程学院，河南 郑州450002；2.拜耳（四川）动物保健有限公司，四川 成都610225；3、汝州市畜牧局 汝州467500）

作为节粮型草食家畜，我国肉牛养殖正处于上升期。基于肉牛养殖的国情，“北繁南育”和“北牛南调”仍将频繁发生。频繁异地运输导致“肉牛运输应激综合征TSSBC”高发，造成较大经济损失［1］。目前国内使用的肉牛运输车多为普通货车改制而成，条件简陋，这是导致TSSBC的重要原因之一。目前国内关于肉牛专用运输车的研发很少。而外国的运输车价格较贵，亟需研发适合我国国情又实用的肉牛专用运输车。本团队研发的肉牛专用运输车，通过各项创新设施以期在运输工具环节降低运输应激。为验证肉牛专用运输车降低运输应激的效果，本试验通过比较专用车与普通车运输后肉牛血清中离子水平、外周血淋巴细胞中HSP90水平和运输后15天内发病率以及增重情况，来验证肉牛专用运输车对TSSBC的实际防控效果。

1 材料与方法

1.1 实验动物

从吉林一肉牛交易市场选取体重、月龄相近的健康西门塔尔杂交架子公牛（约300kg），在当地常规饲养并对牛群健康状况观察3天后，选取71头参加长途运输实验。

1.2 实验材料

1.2.1 主要试剂 离子试剂，由北京松上技术有限公司生产；

牛淋巴细胞分离液（No.LTS－1086），由天津灏洋生物制品科技有限责任公司生产；

牛热休克蛋白90（HSP90）ELISA检测试剂盒，武汉优尔科技股份有限公司。

1.2.2 主要仪器设备

1.2.2.1 运输车辆 肉牛专用运输车1辆（长13 m，宽2.5m，高4.3m）。普通敞篷双层肉牛运输车1辆（长13m，宽2.5m，高4m）。

1.2.2.2 仪器设备 IMS－972系列电解质分析仪，由深圳市希莱恒医用电子有限公司生产；

隔水式电热恒温培养箱（Q／BKYY10－2000），上海跃进医疗器械场；

分光光度计（1510－00473C），赛默飞世尔科技公司；

畜牧秤、离心机、注射器、抗凝采血管、体温计、耳号钳、牛用耳标等。

1.3 实验分组

从专用车和普通车中各随机选取6头，标记、编号后作为实验组和对照组。

1.4 试验方法

1.4.1 运输过程 在购牛前对所有牛观察3d，常规饲养，饮水中添加抗应激药物。专用车和普通车装牛后同时从吉林出发，经2200多公里的同样道路，历时49h长途运输后同时到达长沙，途中禁食禁水。到达目的地后将两车公牛饲养于同一个圈舍，饲养管理水平一致。运输后15天内两组饲料中添加等量抗应激药物。

1.4.2 采血 在运输前17h、运输后4h、20h、26h、45h、52h以及运输后7d、17d对实验牛只颈静脉采血，分离血清，用淋巴细胞分离液提取牛外周血淋巴细胞。血清保存在－20℃，淋巴细胞保存于液氮中。

1.4.3 实验室检测 用热休克蛋白HSP90ELISA检测试剂盒通过酶标仪检测牛外周血淋巴细胞中HSP90蛋白的含量［2］。

通过电解质分析仪检测血清中Na＋、Cl－、K＋、Ca2＋的含量。

1.4.4 称重 到场后当天及到场后第15d各称重一次，计算各组平均增重。

1.4.5 发病情况记录 观察并记录运到15d内全群牛的发病情况，包括呼吸道疾病、消化系统疾病（参考表1呼吸系统评分表，每天对每头牛进行打分）。及时治疗病牛。

表1 呼吸系统评分表

每天采食前1h对各观察项目评分，各项目取当日观察到的最高分，将各项目最高分相加得出该牛当天总分。每天9点、18点对全群测量体温。公牛呼吸系统评分总分≤1时只进行观察，呼吸系统评分总分≥2时给予治疗。15d后汇总，统计运到后15d各组各总分的频数及所占百分比。两组的总频数为6（头）×15（天）＝90。百分比＝（各频数÷总频数）×100%。

1.4.6 数据处理 用SPASS17.0软件处理得到的数据。

2 实验结果

2.1 离子检测结果

血清中离子检测结果见表2。

与运输前17h相比，专用车组血清K＋在运输后4h上升，接着开始下降，并在运输后17d恢复到正常水平，其中在运输后第26h显著降低。与运输前17h相比，普通车组血清K＋在运输后先降低，在运输后45h达到最小值，然后逐渐恢复到正常水平，其在运输后26h和7d都显著降低，并且在运输后45h极显著降低。在运输后17d，普通车组血清K＋水平显著低于专用车组。普通车组血清K＋水平显著降低的时间点多于专用车组。所以，普通车组血清钾离子降低程度显著高于专用车组。

与运输前17h相比，专用车组血清Na＋在运输后4h有下降趋势，接着开始上升并在运输后52h恢复到正常水平，Na＋水平运输后变化较小，无显著性差异。与运输前17h相比，普通车组Na＋水平在运输后4h极显著升高到峰值，然后开始下降，在运输后7d显著降至最低值，并在运输后17d恢复到正常水平。所以，运输后普通车组Na＋变化程度显著强于专用车组。

与运输前17h相比，专用车组血清Cl－运输后升降并不显著。与运输前17h相比，普通车组Cl－在运输后4h却显著升高到峰值，但接着开始下降并在运输后17d恢复到正常水平。所以运输后普通车组Cl－变化比专用车显著。

与运输前17h相比，专用车组血清Ca2＋在运输后4h和运输后20h显著降低，普通车组血清Ca2＋仅在运输后26h显著降低，其他时间点两组血清Ca2＋与运输前17h相比差异不显著。所以与运输前相比，专用车组血清Ca2＋显著降低的时间长于普通车组。

2.2 HSP90检测结果

牛外周血淋巴细胞中HSP90含量检测结果见图1。

如图1，普通车组运输后外周血淋巴细胞中HSP90含量的波动性明显强于专用车组。在运输前17h，普通车组HSP90含量显著低于专用车组，运输后4h，普通车组HSP90含量升高并超过专用车组。在运输后52h，普通车组外周血淋巴细胞中HSP90含量又降低至最低值，在运输后第7d恢复到正常水平，而专用车组在运输后26h已恢复至正常水平。

表2 血清中离子指标检测结果（平均值±标准差）

图1 两种运输车对牛外周血淋巴细胞中HSP90的影响

2.3 称重结果

两组称重结果见表3。

表3 两组称重结果（平均值±标准差，kg）

称重结果显示专用车组从到达时至到达第15平均增重1.8±11.1kg，增重不显著；普通车组到达时体重为298.0±17.1kg，到达第15天体重为291.5±18.0kg，15天平均减少6.5±8.8kg，体重损失显著（P＜0.05）。专用车组比普通车组公牛体重多增8.3kg。结果表明使用专用车运输对延缓公牛体重损失有显著作用。

2.4 发病情况

2.4.1 消化道发病情况 两组消化道发病情况见表4。

表4 到达后15d内消化道疾病发病头数及发病率

到达15d内专用车组33.3%发生消化道疾病，普通车组66.7%发生消化道疾病。该结果表明使用专用车运输有降低消化道发病率的趋势。

2.4.2 呼吸道发病情况 呼吸系统评分频数及百分比分别见表5、表6。

表5 15d各组呼吸系统评分频数汇总

表6 总分各范围频数及百分比

呼吸系统评分总分越高病情越重，设定总分≥2分为发病牛。专用车组和普通车组呼吸系统评分总分≥2分的比例均为30.0%，总分≥3的比例分别为13.3%和10.0% ，总分≥4的比例分别为5.6%和2.2%。两组各呼吸系统评分各总分范围百分比差异不显著（P＞0.05）。所以，本试验显示用专用运输车并不能降低公牛呼吸道疾病发病率。

3 讨论与分析

3.1 肉牛专用运输车简介

本团队研发的肉牛专用运输车，通过半封闭式的车厢结构、车厢设有百叶窗和排风扇，以及车顶自动伸缩篷布的人性化设计，以期有效控制肉牛在运输过程中车厢内的温度和湿度，遮风挡雨，防雪防晒；车厢双层中间设有两个穿插孔，可根据肉牛大小适当调整位置，做到灵活装运［3］；车厢底部垫有防滑性橡胶垫，可有效防止肉牛滑倒和保护肉牛蹄部；车尾垂直升降尾板［4］，可以随时随地装卸肉牛，有效解决不同地区由于装卸条件差异导致的装卸困难，从而减小肉牛应激。

3.2 两种运输车对血清离子的影响

韩瑾瑾等人报道与运输前相比，夏南牛血液离子指标在运输后 Na＋和Cl－极显著升高（P＜0.01），K＋显著降低（P＜0.05），血清 Ca2＋变化不大［5］。本试验中公牛运输后血清 Na＋、Cl－、K＋的变化趋势同报道一致。长途运输后血清Na＋升高和K＋降低，这可能与醛固酮分泌增多、肾脏排钾保钠作用加强有关。但本试验中与运输前相比，两组Ca2＋均比运输前显著降低，这可能是由试验季节不同导致的。离子变化可以作为评价运输应激大小的指标。本试验中普通车组血清中K＋降低水平显著高于专用车组、Na＋变化显著强于专用车组、Cl－水平在运输后显著升高，由这些对比可以推测用普通车运输对肉牛造成的应激比专用车大。

3.3 两种运输车对HSP90的影响

HSP90是生物体内重要的应激性蛋白［6］，它在应激反应时被迅速合成并激活［7］，在蛋白质聚集、折叠、跨膜、运输和转位、稳定细胞骨架以及分子伴侣等方面都发挥着重要的调节作用，能够抵抗早期应激性损伤［8］。HSP90表达增强，反映机体适应和保护机制发挥作用，同时也说明应激可能造成了细胞功能受损。有研究报道牛的外周血淋巴细胞中HSP90表达在运输9h、10h、15h时极显著升高（P＜0.01），运输后10h仍有升高趋势，运输后20h恢复到正常水平［9］。本试验中与运输前相比，两组运输后4h外周血淋巴细胞中HSP90均升高，并且两组运输后各时间点HSP90水平并未显著性升高，这与报道一致。本实验结果显示普通车组运输后外周血淋巴细胞中HSP90含量的波动性明显强于专用车组，这与普通车运输对肉牛造成的应激高于肉牛专用运输车有很大关系。

3.4 两种车对体重的影响

称重结果表明使用专用车运输对延缓公牛体重损失有显著作用，这可能与肉牛专用运输车特有的便于装卸升降尾板、车厢内防滑橡胶板、百叶窗阻挡肉牛视线、可伸缩篷布遮风挡雨的抗运输应激措施有关。肉牛长途运输后体重损失不可避免，加快运输后体重恢复有重要意义，体重增长也情况能从一定程度反应动物健康状况。所以肉牛专用运输车促进肉牛运输后体重恢复具有重大意义。

3.5 两种车对消化道病发病率的影响

本试验结果显示专用运输车有降低消化道发病率趋势，这可能是由于普通车垫料为稻草制作的草帘，长途运输中稻草被粪尿污染，牛只饥饿采食被污染的稻草再加上长途运输瘤胃微生物本已失调而导致的。而肉牛专用运输车车箱底部为防滑橡胶板，有效避免运输途中牛采食污染的食物。

3.6 两种车对呼吸道病发病率的影响

肉牛专用运输车并没有降低呼吸道疾病发病率可能是由于高速行驶中灌入百叶窗的风强度仍能对肉牛造成应激。另一方面，和普通敞篷车相比，专用运输车的半封闭车厢内空气质量可能比普通车差，具体空气质量还需要进一步检测。

4 结论

综上所述，与普通运输车相比，肉牛专用运输车能减弱肉牛运输后血清K＋、Na＋、Cl－以及外周血淋巴细胞中HSP90的波动，显著减小肉牛运输后体重损失、并且有降低肉牛运输后消化道疾病发病率的趋势。所以肉牛专用运输车的抗应激效果优于普通运输车，有一定的推广价值。

［1］ 贺丛，张凯韩，王子恒，等.河南省肉牛运输应激综合征调研报告［J］.河南农业科学，2010，39（12）：131－132.

［2］ 宋媛媛，韩晓红，郑翠玲.ELISA检测肿瘤患者热休克蛋白90α的影响因素分析［J］.中华检验医学杂志，2013，36（12）：1100－1103.

［3］ 河南农业大学.双层肉牛专用运输车［P］.中国，发明专利，CN201310742238.7＿，2013－12－30.

［4］ 河南农业大学.用于双层肉牛专用运输车的垂直升降装置［P］.中国，实用新型，CN201320879734.2＿，2013－12－30.

［5］ 韩瑾瑾，杨高丰，张凯韩.夏南牛运输前后生理指标和血液指标的对比研究［J］.动物医学进展，2011，32（3）：121－124.

［6］ Alberts B，Bray D，Lewis J，et al.Molecular biology of the cell［M］.3rd ed.New York：Garland Pub，Inc，1994.567.

［7］ Chen Guangbo，Bradford William D，Seidel Chris W，et al.Hsp90Stress Potentiates Rapid Cellular Adaptation through Induction of Aneuploidy［J］.Nature.2012，482 （7384）：246－250.

［8］ 陈玲.急性冷应激大鼠组织和细胞热休克蛋白90表达及应激性损伤机理研究［D］.南昌大学博士学位论文，2012.

［9］ 杨高丰.运输对夏南牛外周血淋巴细胞HSPs基因表达的影响及 HSP70基因的克隆［D］.河南农业大学硕士学位论文，2012.