黑蒜经口急性毒性试验研究

王月明，刘宇峰，马若波，韩秋菊

（1.东北农业大学食品学院，哈尔滨150040；2.黑龙江省科学院大庆分院，黑龙江大庆163319；3.哈尔滨医科大学公共卫生学院，哈尔滨150001；4.黑龙江农垦职业学院，哈尔滨150025）

黑蒜经口急性毒性试验研究

王月明1,2，刘宇峰2，马若波3，韩秋菊4

（1.东北农业大学食品学院，哈尔滨150040；2.黑龙江省科学院大庆分院，黑龙江大庆163319；3.哈尔滨医科大学公共卫生学院，哈尔滨150001；4.黑龙江农垦职业学院，哈尔滨150025）

为研究黑蒜的经口急性毒性，按中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》规定的方法。将黑蒜于24h内两次经口灌胃给予昆明种小鼠20 000 mg/kg·BW，对小鼠的生存状态进行观察和记录14d。在14d观察期内，未见小鼠有任何中毒症状，更无死亡，表明黑蒜对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于20 000mg/kg·BW。说明黑蒜属实际无毒物质。

黑蒜；小鼠；经口急性毒性

黑蒜是采用新鲜的大蒜，通过发酵制成的具有保健作用的食品。普通大蒜(garlic)本身富含人体所需的氨基酸、蛋白质、大蒜烯、活性SOD、多酚类等物质，并表现出较强的增进健康、预防疾病的作用［1-2］。近年来，欧美、日本等国的研究证明，经过发酵熟成后的黑蒜不仅具备了普通大蒜的保健效果，更对预防癌症、抗氧化、提高人体免疫功能等防病及保健作用具有明显的提高。但黑蒜在进行发酵成熟的过程中，在强化了原来所固有的成分的基础上又产生了全新的成分［6-7］。故对其经口急性毒性进行研究，为黑蒜的安全食用提供毒理学依据。

1　材料

1.1仪器

MOL-300全自动生化分析仪（上海力申科学仪器有限公司生产），电分析天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司)，JY31002型电子天平（上海精密科学仪器有限公司），101AB型电热鼓风干燥箱(龙口市电炉制造厂)。

1.2样品

实验样品由黑龙江省科学院大庆分院提供，为带皮黑蒜，去皮后蒜体表面为黑色，经研磨后呈深咖啡色，无特殊气味，试验时根据需要用蒸馏水配制成所需浓度。

1.3实验动物

选用哈药集团制药总厂提供的清洁级健康成年昆明种小鼠，体重为18～22g,许可证号：SCXK(黑) 2008004，试验前检疫观察7d，基础饲料（黑龙江中医药大学实验动物中心提供）。

2　方法

2.1预试验

取20只小鼠，雌雄各10只。小鼠隔夜禁食8h后，次日于24h内按动物每100g体重灌胃2mL体积经口灌胃2次，总灌胃剂量为20 000mg/kg·BW，末次灌胃后2h开始投以饲料和饮水，连续14d观察。观察期内小鼠生命体征良好，无一死亡。因此无法测定黑蒜的半数致死量(LD)，故进行黑蒜的最大耐受量(MTD)的测定。

2.2最大耐受量

取40只小鼠，雌雄各20只，随机抽取雄鼠10只为黑蒜组，余下10只为空白对照组，雌鼠同上。各组小鼠隔夜禁食8h后，次日于24h内按动物每100g体重灌胃2mL体积经口灌胃2次，总灌胃剂量为20 000mg/kg·BW，末次灌胃后2h开始投以饲料和饮水，空白对照组同样方法灌胃蒸馏水。连续观察14d。

2.3观察行为

观察灌胃后小鼠的活动情况及自主神经反应，如无断尾和举尾现象、声音异常、身体震颤和抽搐、觅食情况等。第2d起，每天固定时间观察1次，称取体重。

2.4统计学方法

采用SPSS 19.0做ANOVA统计学处理，所有数据×(-)±s表示，组间比较采用方差分析t检验，P＜0.05表示差异有统计学意义。

2.5脏器病例剖检

第14d时，如有小鼠死亡，将其解剖，观察小鼠心脏、肝脏、肾脏、脾、胃等主要器官有无病变。如无死亡，处死小鼠，观察小鼠心脏、肝脏、肾脏、脾、胃等主要器官结构有无病变发生。

3　结果

3.1小鼠行为状况

灌胃后黑蒜组小鼠并未出现断尾、举尾、声音异常、身体震颤、觅食、进水、排便异常等生理现象，未见腹泻、便秘、眼屎分泌、流血、流泪、流鼻涕、呼吸困难和毛色糙乱等异常，在之后14 d内，小鼠活动自如，反应正常，皮毛有光泽，齐整，干净，进食及大小便正常，体重增长正常。

空白对照组的小鼠在l～14d内，小鼠行为活动，生理反应正常；皮毛有光泽，齐整，干净，进食及大小便正常，未见任何异常状态。

3.2小鼠死亡情况

从灌胃后至14 d内，黑蒜组和空白对照的40只小鼠全部存活，各组小鼠均未出现死亡。

3.3小鼠体重变化

第1～14d的时间段两组无显著差异（P＞0.05）。灌胃黑蒜组小鼠体重正常增长情况见表1。

表1　灌胃后黑蒜对小鼠体重变化影响（x±s,n=5）Tab.1Influences on changes of mice's weight after filling their stomaches（x±s,n=5）

3.4病例剖检分析

黑蒜组和空白对照组的各项观察指标未见明显的毒性反应，亦未能有相应的生理组织、和脏器的病变。第14d解剖小鼠，可见其心脏、肝脏、肾脏、脾、胃等主要器官颜色、外观形状、大小比例、表面黏膜附着情况均正常，并无组织结构肿瘤、结缔组织结节、坏死、肥大等病理病变；胃形状、大小正常，胃黏膜无出血点、坏死等，胃内容物性状正常。

4　结论

结果表明，14d观察期内，未见小鼠有任何中毒症状，更无死亡，表明黑蒜对昆明种小鼠的经口急性毒性剂量大于20 000mg/kg·BW。根据中华人民共和国卫生部《保健食品检验与评价技术规范》中急性毒性的分级标准，黑蒜小鼠经口急性毒性属实际无毒物质。

［1］周道根，龚千锋，陈泣.大蒜的研究进展［J］.食品与药品，2006，（08）：21-24.

［2］李福臣，孙建霞，刘洪富.大蒜的功能性质及开发［J］.中国食物与营养，2005，（04）：20-22.

［3］祝炳俏，吴海歌，刘媛媛，等.黑蒜抗氧化活性研究［J］.食品研究与开发，2008，（10）：58-60.

［4］李津，覃永长，李桂勇，等.薏苡茎、叶提取物的急性毒性［J］.中国实验方剂学杂志，2015，21（5）：178-181.

［5］孙东宁，杨桂青，刘晓旭，等.黑蒜抑制胃癌机理研究进展［J］.实用中医药杂志，2013，（09）：789-792.

［6］王鑫，杨柯.黑蒜对肿瘤防治作用的研究进展［J］.实用医药杂志，2011，（02）：176-178.

［7］CORZO-MARTINEZ M，CORSO N&VILLAMIEL M.Biological properties of onions and garlic［J］.Trends in Food Science&Technology，2007，（18）：609-625.

The Acute Oral Toxicity of Black Garlic

WANGYue-ming1,2,LIUYu-feng2,MARuo-bo3,HANQiu-ju4
(1.College ofFood Science,Northeast Agricultural University,Harbin 150040,China;
2.DaqingBranch ofHeilongjiangAcademyofSciences,Daqing163319,China;
3.School ofPublic Health,Harbin Medical University,Harbin 150001,China;
4.HeilongjiangNongken Vocational College,Harbin 150025,China）

The acute oral toxicity ofblack garlic was tested based on"Health Food Inspection and Evaluation ofTechnical Specifications"by the People's Republic of China Ministry of Health.The Kunming mice was administered intragastrically with black garlic at a dose of 20 000mg/kg twice within 24 hours.Mice had no toxicity symptom and no death within 14 days,the results showed that the MTD of acute toxic test was higher than the dosage of20 000 mg/kg.Conclusion:the black garlic is an actuallynonpoisonous material.

Black garlic;Mice;Acute oral toxicity

R114

A

1674-8646（2015）09-0008-02

2015-06-25

王月明（1985-），女，黑龙江哈尔滨人，东北农业大学食品学院在读硕士，从事食品工艺及微生物应用研究。

吴非（1968-），女，教授，博士研究生导师，从事粮食、油脂及植物蛋白工程研究。