枣庄市市中区牛羊布氏杆菌病和结核病流行病学调查

张 冉 陈 萍 许瑞利 李元元 （山东省枣庄市市中区畜牧兽医局 277100）

枣庄市市中区牛羊布氏杆菌病和结核病流行病学调查

张 冉 陈 萍 许瑞利 李元元 （山东省枣庄市市中区畜牧兽医局 277100）

为全面了解枣庄市市中区牛羊布氏杆菌病和结核病（以下简称“两病”）的流行情况，2015年6月份开展了两病的流行病学调查研究。采用虎红平板凝集试验和试管凝集试验结合的方式对采集的1926份血清(牛816份，羊1110份)进行布病检测；采用牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验对816头牛进行结核病检测。结果显示：布氏杆菌病检测，检出阳性牛16头、阳性羊4只；牛结核病检测，检出阳性牛3头。

布氏杆菌病简称布病，是由布氏杆菌引起的一种人畜共患的传染病，严重威胁畜牧业生产和人体健康，我国农业部将其列为二类动物疫病[1]。牛、羊、猪最易感[2]，给畜牧业生产造成重大经济损失，严重危害畜牧业生产和人类健康。虎红平板凝集试验与试管凝集试验是临床上用于检测布氏杆菌病的常用方法，虎红平板凝集试验简便易行，方便快捷，常用于样品的初步检测，但其检出阳性率较高，常有假阳性出现，在实际工作中，常采用虎红平板凝集试验初检，试管凝集试验复检的方法，便可得出快速、准确的结果[3]。牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacterium. bovis)引起的一种人兽共患的慢性消耗性传染病[4]，该病因其易传染，一年四季均可发生，呈世界性流行，且能通过奶制品传染给人和犊牛，危害严重，被世界动物卫生组织(OIE)定为B类动物传染病，我国将其列为二类动物疫病[5]。皮内变态反诊断，简单易行，目前仍被世界各国广泛使用，也是世界动物卫生组织推荐的诊断牛结核病的唯一方法[6]。

1 材料和方法

1.1 血清的制备与保存 待血清析出时，分装入离心管，放于4℃冰箱用于试验检测，将其他备份血清放于-20℃冰箱冻存。

1.2 材料 布氏杆菌病虎红平板凝集试验和试管凝集试验抗原、阳性血清、阴性血清均购自青岛易邦生物工程有限公司。结核菌素：哈药集团生物疫苗有限公司生产，批准文号兽药生字(2006)080078024。真空管、离心管、离心机、冰箱、玻璃板、试管、游标卡尺(精度为0.02mm)、毛剪、酒精棉、1ml注射器、工作服、一次性帽子、一次性口罩、胶靴、记录表等。

1.3 布氏杆菌病检测 对采集的1926份血清采用布氏杆菌病虎红平板凝集试验初步筛查，待其出现阳性结果，再使用试管凝集试验进行复检。（1）布病虎红平板凝集试验方法及判定标准：参照国家标准GB/T18646-2002动物布氏杆菌诊断技术，在灭菌洁净的玻璃板片上，分别吸取被 检血清30μl与虎红平板凝集抗原30μl混合均匀，同时以 阳、阴性血清作对照。在4min内出现肉眼可见凝集现象 判为阳性，无凝集现象，呈均匀粉红色者判为阴性。（2）布病试管凝集试验(SAT)方法及判定标准。首先稀释血清，稀释度依次为1:12.5、l:25、1:50、1:100。加入等量稀释后的抗原，混匀，则血清稀释度依次为l:25、1:50、1:100、1:200。同时做阴性对照和阳性对照及抗原对照，并配制比浊管。将全部试管、对照管及比浊管充分振荡后置37℃温箱24h，取出检查并记录结果[7]。参照

比浊管，按各试管上层液体亮度判读，++++菌体完全凝集，100%下沉，上层液体100%清亮；+++菌体几乎完全凝集，上层液体75%清亮；++菌体凝集显著，液体50%清亮；+凝集物有沉淀，液体25%清亮；－凝集物无沉淀，液体均匀混浊。

1.4 牛型结核分枝杆菌PPD皮内变态反应试验方法及判定标准 注射部位及术前处理：将牛只编号后在颈侧中部上三分之一处剪毛(或提前1d剃毛)，3个月以内的犊牛，也可在肩胛部进行，直径约10cm。用卡尺测量术部中央皮皱厚度，作好记录。注意术部应无明显的病变。注射剂量：不论大小牛只，一律皮内注射0.1ml(含2000IU)。即将牛型结核分枝杆菌PPD稀释成每毫升含2万IU后，皮内注射0.1ml。冻干PPD 稀释后当天用完。注射方法：先以75%酒精消毒术部，然后皮内注射定量的牛型结核分枝杆菌PPD，注射后局部应出现小疱，如对注射有疑问时，应另选15cm以外的部位或对侧重做。注射次数和观察反应：皮内注射后经72h判定，仔细观察局部有无热痛、肿胀等炎性反应，并以卡尺测量皮皱厚度，作好详细记录。对疑似反应牛应立即在另一侧以同一批PPD同一剂量进行第二回皮内注射，再经72h观察反应结果。对阴性牛和疑似反应牛，于注射后96h和120h再分别观察一次，以防个别牛出现较晚的迟发型变态反应。结果判定：局部有明显的炎性反应，皮厚差大于或等于4.0mm，判为阳性反应；局部炎性反应不明显，皮厚差大于或等于2.0mm、小于4.0mm判为疑似反应；无炎性反应，皮厚差在2.0mm以下判为阴性反应。凡判定为疑似反应的牛，于第一次检疫60d后进行复检，其结果仍为疑似反应时，经60d再复检，如仍为疑似反应应判为阳性。

2 结果与分析

2.1 牛羊布氏杆菌病 布氏杆菌初筛及复检结果见表1。由表1可知，初检结果牛16头阳性、羊4头阳性；经试管凝集试验复检，牛16头阳性、羊4头阳性。

表1 牛羊布氏杆菌病的检测结果 （头）

2.2 牛结核病 牛结核病初检及可疑病例复检结果见表2。由表2可知，检测结果牛3头阳性。

表2 牛结核病初检及可疑病例复检结果 （头）

4 讨论

通过这次调研，检测出本区存在布氏杆菌病及牛结核病阳性畜。对于所有阳性畜采取及时扑杀、焚烧、消毒、深埋等无害化处理，并做好登记备案、消毒灭源等其它疫点拔除工作，达到净化家畜两病的目的。本区对于“两病”采取以预防为主和扑杀病畜为主的综合性措施。具体方法是：（1）加大“两病”防治知识的宣传力度，使养殖户真正具备自我防范两病的自觉性及技能性[8]；（2）应严格按防治程序进行无害化处理，定期消毒，减少畜间传播机率；（3）牛、羊的流产物要深埋；对污染的畜圈和场地进行彻底消毒；（4）严禁买卖病畜，外引入新畜时，必须经检疫证实无病后方可合群；（5）大搞环境卫生，接触牛、羊后要洗手，不要在牛、羊圈舍内吃食物，不吃未熟的肉和奶，不要玩羊羔、牛犊；（6）人畜屋舍要分离，牛、羊接产时要做好个人防护，如穿工作服、戴口罩及橡胶手套等。

[1] 罗明星, 周碧君, 王开功等. 贵州省家畜布氏杆菌病血清学检测

[J]. 贵州农业科学, 2009, 37(1): 109-110.

[2] 蔡一非. 奶牛布氏杆菌的分离鉴定、血清学检测方法比较与流行病学调查[D]. 新疆: 新疆农业大学, 2008,

[3] 田峰. 湖北省2005-2009年畜间布鲁氏菌病血清学检测分析[D]. 湖北: 华中农业大学, 2010.

[4] Ahmed N,Mohanty A K,Mukhopadhyay U, et al.PCR-based rapid detection of Mycobacterium tuberculosis in blood from immunocompetent patients with pulmonary tuberculosis[J]. Journal of Clinical Microbiology, 1998, 36(10): 3094-3095.

[5] 王忠仁. 牛结核病与人结核病的相互关系[J]. 中国防痨杂志, 2005, 27(2): 123-125.

[6] 李金岭, 郭宏军, 王丽艳等. 国内外牛结核病的防制现状及检测手段[J]. 兽医导刊, 2007, 124(12): 18.

[7] 胡登林, 马长丽, 爱尔拜尔等. 塔城地区牛羊布鲁氏杆菌病血清学调查与风险分析[J]. 湖北畜牧兽医, 2013, 34(1): 26-27.

[8] 孙延星, 窦玉凤, 刘建平等. 新疆兵团农五师地区牛羊布鲁氏菌病流行病学调查及防制[J]. 中国畜牧兽医文摘, 2011, 44(8): 70-71.

S858.23-26

A

1007-1733(2015)09-0062-02

2015–7–20）