高效液相色谱法测定不同来源岩黄连中不同部位脱氢卡维丁含量*

叶勇，黄秋洁，刘华钢

(1.广西医科大学药学院，南宁 530021；2.广西中医药大学药学院，南宁 530001)

高效液相色谱法测定不同来源岩黄连中不同部位脱氢卡维丁含量*

叶勇1，黄秋洁2，刘华钢1

(1.广西医科大学药学院，南宁 530021；2.广西中医药大学药学院，南宁 530001)

目的 建立岩黄连中有效成分脱氢卡维丁的高效液相色谱(HPLC)含量测定方法，并对2种不同来源药材的不同部位进行分析，为岩黄连质量标准的制定提供参考。方法 采用SHISEIDO-SPOLAR C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱，流动相为乙腈-0.05 moL·L-1磷酸二氢钠溶液(25：75)，检测波长347 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温：30 ℃。结果 脱氢卡维丁进样量在0.024 1～0.482 0 μg范围内与峰面积线性关系良好(r=0.999 9)；平均回收率99.48%(RSD=1.44%，n=6)。不同生长方式的岩黄连脱氢卡维丁的含量差异较大，以野生含量较高；药材不同部位中以根部含量最高。结论 建立的脱氢卡维丁含量测定方法简便，准确，重复性好，可用于岩黄连中类似生物碱成分的质量控制。

岩黄连；脱氢卡维丁；色谱法，高效液相

岩黄连系罂粟科紫堇属植物石生黄堇(CorydalissaxicolaBunting)的全草及肥大的根茎部。收载于《广西中药材标准》1990年版第1册，因其功效近似黄连且生长于石缝中或者岩石旁而得名，又叫土黄连、岩连%等[1]。岩黄连味苦，性凉，具有清热利湿、散瘀消肿功能，临床主要用于治疗肝炎、肝硬化、肝肿瘤和作为辅助治疗药[2-3]。岩黄连含有20多种生物碱成分，其中含量较高且具有明确药理活性的成分为脱氢卡维丁、脱氢甲卡维丁、盐酸小檗碱、盐酸巴马汀等[4-7]。岩黄连中生物碱类成分含量测定的文献已有报道[5-6]，其中脱氢卡维丁是岩黄连注射液主要有效成分之一。笔者在本实验建立了高效液相色谱(HPLC)法测定岩黄连中脱氢卡维丁含量的方法，并对不同来源(栽培或野生)岩黄连药材的不同部位进行了定量分析，报道如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器 高效液相色谱仪：Shimadzu-Prominence HPLC(Shimadzu公司)，包括LC-20A 输液泵、SPD-M20A二极管阵列检测器、SIL-20A自动进样器、CTO-20A柱温箱 、LCsolution工作站；XS205DU电子天平(梅特勒-托利多公司)；数控超声波清洗器KQ-500DB(昆明市超声仪器有限公司) 。

1.2 试药 乙腈为色谱纯，磷酸二氢钠为分析纯，水为超纯水；脱氢卡维丁对照品(中国食品药品检定研究院，含量>98%，批号：111667-200401)；岩黄连药材购于广西壮族自治区宜州市，并经广西中医药大学廖月葵鉴定为岩黄连(Corydalis saxicola Bunting)的全草及根茎部。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：SHISEIDO-SPOLAR C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.05 moL·L-1磷酸二氢钠溶液(25：75)；检测波长347 nm；流速1.0 mL·min-1；柱温30 ℃，理论板数按脱氢卡维丁峰计应不得低于3 000。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取脱氢卡维丁对照品2.41 mg置于10 mL量瓶中，加入甲醇，超声溶解，并稀释至刻度，摇匀，即得每毫升含0.241 mg脱氢卡维丁的对照品溶液，精密吸取0.241 mg·mL-1脱氢卡维丁对照品溶液1.0 mL于10 mL量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，即得0.024 1 mg·mL-1脱氢卡维丁对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备 取药材粉末约0.5 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中，精密加入1%盐酸甲醇溶液25 mL，称质量，超声处理40 min(300 W，40 kHz)，放冷，补重，摇匀，滤过，取续滤液用孔径0.45 μm微孔滤膜滤过，即得供试品溶液。

2.4 专属性实验 在本实验所采用的色谱条件下，脱氢卡维丁的保留时间约为12.0 min，分离度>1.5，峰形良好，无杂峰干扰测定，具有较好的专属性，分析条件可行。

2.5 线性关系考察 分别精密吸取0.024 1 mg·mL-1脱氢卡维丁对照品溶液1，4，8，12，16，20 μL，按上述色谱条件进样分析，以峰面积积分值(Y)对进样量(X，μg)进行线性回归。按上述色谱条件进样分析，以峰面积积分值(Y)对进样量(X，μg)进行线性回归，得回归方程为Y=3 480 296.2X-5 401.6(r=0.999 9，n=6)。结果表明，脱氢卡维丁进样量在0.024 1～0.482 0 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。

2.6 精密度实验 精密吸取浓度为0.024 1 mg·mL-1脱氢卡维丁对照品溶液10 μL，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，测定峰面积，计算RSD。结果RSD=0.59%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性实验 分别于0，2，4，8，10，12 h吸取供试品溶液10 μL注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，计算RSD。结果RSD=0.85%，表明供试品溶液在12 h内稳定性良好。

2.8 重复性实验 取同一批药材样品，共6份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分取上述溶液10 μL注入色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，计算RSD。计算各样品含量，结果RSD=1.26%，表明方法重复性良好。

2.9 加样回收率实验 取已知含量的样品0.25 g，精密称定，共6份，每份分别精密加入0.241 0 mg·mL-1脱氢卡维丁对照品贮备液0.75 mL，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。取上述各溶液注入色谱仪，测定并记录色谱图，计算加样回收率。计算各浓度的回收率，结果平均回收率为99.48%，RSD为1.44%，回收率在97.90%～101.88%之间，结果见表1。

表1 脱氢卡维丁加样回收率实验结果

2.10 样品含量测定 精密称取3批样品，每批3份，按“2.3”项下方法制备供试品溶液。分取上述溶液10 μL注入色谱仪，记录色谱图，测定各批样品中脱氢卡维丁的含量。不同样品中脱氢卡维丁的含量测定结果见表2。

表2 样品中脱氢卡维丁含量测定结果

3 讨论

本研究考察了不同提取溶剂：甲醇、乙醇、1%盐酸乙醇及1%盐酸甲醇等，发现用1%盐酸甲醇溶液作为溶剂提取脱氢卡维丁含量最高，且提取的样品中杂质干扰较少，分离度、峰形良好，故决定采用1%盐酸甲醇作为提取溶剂。此外，还考察了加热回流法、冷浸提取法及超声法等提取方法，冷浸提取法提取时间过长，提取效率低下，且操作繁琐，加热回流法与超声提取法所得提取率结果差异不明显，但超声法提取效率高、快速、杂质干扰少、操作简单，因此最终选择超声提取法，并考察超声提取20，30，40 和60 min的提取效率，结果表明超声提取40 min可获得较高的提取率，因此确定40 min为超声提取时间。

生物碱拖尾比较严重，在流动相中加入磷酸二氢钠等缓冲盐可改善其峰形，其用量在保证分离度及峰形良好、色谱柱的寿命等前提下越少越好。本实验通过摸索确定为0.05 moL·L-1，优化的洗脱系统能够较好的对脱氢卡维丁类生物碱成分进行分离，且提取物中其他成分对分析物没有干扰。经过对脱氢卡维丁的二极管阵列扫描，发现有2 个较大的紫外吸收峰，最强吸收峰在274 nm，次吸收峰在347 nm。但采用274 nm作为检测波长时，脱氢卡维丁的检测受到杂质干扰，不能很好分离；选用347 nm作为检测波长时无杂质干扰，分离度及峰形良好，因而最终选用347 nm作为检测波长。

实验结果表明，野生岩黄连药材中的脱氢卡维丁含量显著高于种植药材，不同生长方式(野生和种植)岩黄连药材中不同部位的脱氢卡维丁分布存在一定差异，但野生及种植药材中均以根部含量最高。本研究采用HPLC法测定壮族岩黄连中脱氢卡维丁含量，该方法简便，快捷、专属性高，对岩黄连药材及其制剂的质量控制具有参考意义。

[1] 江苏新医学院.中药大辞典(下册)[M].上海：上海科学技术出版社，2001：1523-1524.

[2] 贵州中医药研究院.贵州草药(第一 集)[M].贵阳：贵州人民出版社，1970：609-610.

[3] 广西卫生厅.广西中药材标准[M].南宁：广西科技出版社，1990：223-224.

[4] 吴颖瑞，马云宝，赵友兴，等.岩黄连的抗乙肝病毒活性成分研究[J].中草药，2012，43(1)：32-37.

[5] 毛春芹，陆兔林，王静，等.高效液相色谱法测定岩黄连总碱胶囊中3种生物碱含量[J].中国药学杂志，2011，46(5)：396-397.

[6] 毛春芹，谢辉，池玉梅，等.高效液相色谱法测定岩黄连药材中3种生物碱[J].中成药，2011，33(8)：1368-1370.

[7]LI H L，ZHANG W D，LIU R H，et al.Simultaneous determination of four active alkaloids from a traditional Chinese medicineCorydalissaxicolaBunting.(Yanhuanglian) in plasma and urine samples by LC-MS-MS[J].J Chromat B Analyt Technol Biomed Life Sci，2006,831(1-2)：140-146.

DOI 10.3870/yydb.2015.01.026

Determination of Dehydrocavidine in Different Parts ofCorydalisSaxicolaBunting from Various Origins by HPLC

YE Yong1,HUANG Qiujie2,LIU Huagang1

(1.CollegeofPharmaceuticalSciences,GuangxiMedicalUniversity,Nanning530021,China; 2.CollegeofPharmaceuticalSciences,GuangxiUniversityofTCM，Nanning530001,China)

Objective To establish a quantification method for the determination of dehydrocavidine inCorydalissaxicolaBunting by reversed phase high performance liquid chromatography (RP-HPLC).Different parts of the herb from two different sources were analyzed in order to provide evidence for setting quality standards forCorydalissaxicolaBunting. Methods The samples were separated by RP-HPLC on a SHISEIDO-SPOLAR C18column(250 mm×4.6 mm,5 μm), with the mixture of acetonitrile and buffer solution of 0.05 moL·L-1sodium dihydrogen phosphate (25：75) as the mobile phase.The detection wavelength was set at 347 nm, and the flowing rate was 1.0 mL·min-1.The column temperature was kept at 30 ℃. Results The linear range of dehydrocavidine was within 0.024 1-0.482 0 μg(r=0.999 9),and the average recovery was 99.48% with RSD of 1.44%(n=6).There was great variation in the content of dehydrocavidine under different growing conditions.Wildly grownCorydalissaxicolaBunting had the highest content of dehydrocavidine, and the roots have the highest content among different parts of the plant. Conclusion The established method is simple, accurate, and reproducible, therefore can be applied to the quality control for analogous alkaloids inCorydalissaxicolaBunting.

CorydalissaxicolaBunting; Dehydrocavidine; Chromatography, high performance liquid

2013-10-14

2014-02-10

*高等学校博士学科点专项科研基金资助项目(20114503120006)；广西教育厅科研基金资助项目(201106LX118)

叶勇(1979-)，男，广西宾阳人，讲师，主要从事药物新剂型与新技术研究。电话：(0)13978679458，E-mail：yong-ye@163.com。

黄秋洁(1979-)，女，广西宾阳人，副教授，硕士，主要从事中药新剂型与新技术研究。电话：(0)13737172226，E-mail：hqj8@163.com。

R282.71；R927.2

B

1004-0781(2015)01-0099-03