不同花期野葛花总黄酮、花青素和总多酚含量的研究

2015-12-08谭娟刘良科谢梦涵陈思娴

怀化学院学报 2015年11期

谭娟，刘良科，谢梦涵，陈思娴

（怀化学院，1.生物与食品工程学院；2.民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室；3.湘西药用植物与民族植物学湖南省高校重点实验室，湖南怀化418008）

谭娟1，2，3，刘良科1，2，3，谢梦涵1，陈思娴1

采用紫外－分光光度法测定了野葛花中的总黄酮、花青素和总多酚的含量，为野葛花深入开发利用提供理论依据.研究结果表明，野葛花在花蕾期、盛花期和终花期时总黄酮、花青素和总多酚含量存在显著差异，在盛花期时均达到最大值，分别是1.61%、2.12%和4.11%.提取野葛花的总黄酮、花青素和总多酚时，适宜在盛花期采收.

野葛花；花期；总黄酮；花青素；总多酚

野葛花为豆科植物野葛（Pueraria Lobate（Willd.）ohwi）的花，异名葛条花.在我国葛花用于解酒已有愈千年历史，《神农本草经》、《本草纲目》等均有记载，其性甘、凉，用于解酒醒脾，治伤酒发热，烦渴，吐血，肠风下血等症状［1］.近年来随着人们生活水平的提高，饮酒成为部分人生活的一种方式，大量或长期饮酒，则易导致急、慢性酒精中毒.葛花解酒具有简、便、效、廉的特点，备受人们关注［2］.不仅如此，大量研究表明葛花具有保肝护肝作用，野葛花能够在乙醇的肠胃吸收及代谢两个环节发挥作用，其水提取物通过激活乙醇脱氢酶活性来降低乙醇的浓度，从而有效地降低血液中乙醇浓度，对酒精引起的肝细胞损害有保护作用［3，4］.同时，野葛花还具有保护心肌、扩张脑血管、心血管和外周血管以及抗氧化、降血糖等作用［5，6］.已有研究表明，葛花主要化学成分为黄酮类化合物，还包括皂苷类化合物、花青素、总多酚、挥发油等，并分离得到葛花苷、鸢尾异黄酮等多种有效成分化合物［7，8］.但植物的花有一定的生长周期，不同时期的花中化学成分及含量不尽相同.为获得药效成分含量较高的野葛花，也为促进药材原材料使用规范化，本文通过比较测定不同花期的野葛花的主要成分总黄酮、花青素以及总多酚的含量，为野葛花这一药用资源的进一步规范化开发与应用提供科学依据.

1 材料与方法

1.1 实验材料

野葛材料属怀化学院生物园人工栽培品种.于2014年7～8月采摘花蕾期（花被未张开）、盛花期（花朵绽放，花被片张开角度最大）和终花期（花朵凋零，凋落在地）的野葛花，并及时将各花期样品洗净后，40－50℃干燥至恒重，粉碎，过60目筛得葛花粉末，备用.

1.2 方法

1.2.1 总黄酮含量的测定

1.2.1.1 对照液及标准曲线的制备

准确称取芦丁对照品20 mg，加85%乙醇30 ml，微热溶解，加乙醇稀释至100 ml，摇匀，即0.2 mg/ml的芦丁对照液.吸取对照液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置于25ml试管中，加5%亚硝酸钠溶液1.0ml，6 min后，加10%氯化铝溶液1.0 ml，6 min后，加1.0 mol/LNaOH 10 ml，85%乙醇稀释至刻度.用蒸馏水作空白，在510 nm处测吸光度，绘制标准曲线（图1），回归方程为y＝0.4331x－0.0039，R2＝0.9996，其中x为提取液中总黄酮含量（mg/ml），y为吸光值.

1.2.1.2 待测品溶液制备及总黄酮含量测定

参考李胜华等［9］的方法，采用硝酸铝－亚硝钠，此色法测定总黄酮含量.准确称取不同花期5 g干葛花各3份，加125 ml分析纯甲醇，索氏提取法萃取，旋转蒸发，85%乙醇溶液溶解过滤，定容至100ml，即得待测品溶液.量取1ml待测品溶液至25ml试管中，加入5%亚硝酸钠1 ml，混匀，6 min后加5%氯化铝1ml，混匀，6 min后加1 mol/LNaOH 10 ml，加85%乙醇至刻度，摇匀，15min后用分光光度法在510 nm波长处测定吸光值，根据芦丁标准曲线中的回归方程计算样品中总黄酮的含量.

图1 芦丁标准曲线

式中：c代表样品中总黄酮的浓度（mg/ml），n代表样品的稀释倍数，w代表干样品的质量（g）.

1.2.2 总多酚含量的测定

1.2.2.1 对照液及标准曲线的制备

称取10 mg没食子酸，定容至100 ml，摇匀作为没食子酸对照液（0.1 mg/ml）.取1 ml不同浓度没食子酸对照液，分别加入5ml福林酚试剂，摇匀.反应3～8 min，加4 ml7.5%碳酸钠，加水定容，摇匀.室温下放置60 min.以蒸馏水作空白，在765 nm处测吸光度，绘制标准曲线（图2），回归方程为y＝3.8998x＋0.0081，R2＝0.9992，其中x为提取液中总多酚含量（mg/ml），y为吸光值.

图2 没食子酸标准曲线

1.2.2.2 待测品溶液制备及总多酚含量测定

参考欧阳玉祝等［10］的方法，采用福林－酚（Folin－ciocalteu）法测定野葛花提取液中的总多酚含量.取样品1 ml于25 ml试管内，加入5 ml福林酚试剂，摇匀，按上述方法测定吸光值.根据没食子酸标准曲线的回归方程计算样品中总多酚的含量.设置3次重复，取平均值.

1.2.3 花青素含量的测定

1.2.3.1 对照液及标准曲线的制备

称取儿茶素对照品20mg，70%乙醇定容至100ml，摇匀，即为0.2 mg/ml的儿茶素对照液.吸取对照液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 ml分别置于25 ml试管中，依次加入6 ml 4%的香草醛－甲醇溶液和3 ml浓盐酸，摇匀，30±1℃避光条件下反应15 min后，70%的乙醇定容至25 ml，以70%乙醇代替样品溶液作空白对照，500 nm处测吸光度，绘制标准曲线（图3），回归方程为y＝0.0323x－0.0001，R2＝0.9995，其中x为提取液中花青素含量（mg/ml），y为吸光值.

图3 儿茶素标准曲线

1.2.3.2 待测品溶液制备及花青素含量测定

参考鲍俊竹［11］的方法，使用香草醛－甲醇溶液和盐酸等试剂，采用分光光度法测定花青素的含量.量取1 ml样品液稀释，同上方法依次加入同样药品处理，测定吸光度，根据儿茶素标准曲线的回归方程计算样品中花青素的含量.设置3次重复，取平均值.

2 结果与分析

野葛花3个不同时期包括花蕾期、盛花期和终花期的总黄酮、花青素和总多酚含量如图4所示.本实验结果表明，野葛花中总黄酮、花青素和总多酚含量在不同的花期差异较大，从花蕾期到终花期，总黄酮、花青素和总多酚的含量均呈现出先升高后降低的趋势.在盛花期野葛花中总黄酮、花青素和总多酚含量均达到最高，分别为1.61%、2.12%和4.11%，显著高于花蕾期和终花期（P＜0.05），花蕾期和终花期时总黄酮含量和花青素含量没有显著性差异（P＞0.05），而总多酚含量在花蕾期时显著高于终花期（P＜0.05）.

图4 不同花期野葛花的总黄酮、花青素和总多酚含量

3 结论与讨论

野葛花主要成分为黄酮类化合物，还含有皂苷类化合物、花青素、总多酚、挥发油、无机元素等.黄酮类化合物不仅数量种类繁多，而且结构类型复杂多样，对哺乳动物和其它类型的细胞具有许多重要的生理、生化作用，是许多中草药的有效成分.研究表明，不同植物种类在不同花期时体内有效成分含量存在显著差异［12－14］.本研究表明，野葛花的总黄酮、花青素和总多酚含量在不同花期存在一定差异，其中盛花期时这三种成分含量都达到最高值.与不同花期状态下的金银花（Lonicera japonica Thunb）［12］、白玉兰（Michelia alba DC）［13］、玉兰（Magnolia denudata Desr.）［14］等中的总黄酮含量和总多酚含量测定的结果基本一致，这可能与生物合成过程中酶的含量有关.也有研究表明，植物液泡中的花青素合成受外部环境因素的刺激，包括光照、低温、紫外线A、紫外线B、缺水、蔗糖等，外部因素诱导转录因子表达，进而激活花青素合成途径中结构基因的表达［15］.因而推测野葛花在不同花期，它的状态不一，盛花期的花朵张开的最大，即表面积最大，接受外界环境的刺激最大，盛花期的花青素含量最高.

本实验结果表明，不同花期野葛花的总黄酮、花青素和总多酚的含量存在一定差异，其中盛花期时其有效成分含量较高.在用野葛花加工饮料、保健品、药品等时，建议在盛花期采收，使其总黄酮、花青素和总多酚等有效成分含量达到最大，提高资源利用率.?

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草（4）［M］.上海：上海科学技术出版社，1999.

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［5］李文，贺殿，王晓，等.葛花中总黄酮的含量测定［J］.西北药学杂志，2005，20（1）：14－15.

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Study on the Contents of Total Flavonoids，Anthocyanin and Total Phenols from Flower of Flos Pueraria in Different Florescence

TAN Juan1，2，3，LIU Liang-ke1，2，3，XIEMeng-han1，CHEN Si-xian1
（1.College of Biological and Food Engineering；
2.Key Laboratory of Research and Utilization of Ethnic Medicinal Plant Resources of Hunan Province；
3.Key Laboratory of XiangxiMedicinal Plant and Ethnobotany of Hunan Higher Education，Huaihua University，Huaihua，Hunan 418008）

The contents of total flavonoids，anthocyanin and total phenols from flower of flos pueraria in different florescence had been detected by using the ultraviolet－spectrophotometry，in order to provide the theoretical basis for further developmentand utilization of flos pueraria.The results showed that the content of total flavnoid，anthocyanins and total polyphenolswere different in Flospueraria in different florescence，and in full flowering stage the contentswere the highest，reaching1.61%，2.12%and 4.11%.When extracting the total flavonoids，anthocyanin and total phenols from flower of Flos pueraria，we should choose the full flowering stage for collection.

flos pueraria；florenscence；total flavonoids；anthocyanin；total polyphenols

R282

1671－9743（2015）11－0012－03

2015－08－21

民族药用植物资源研究与利用湖南省重点实验室开放项目资助（HHUW2015－13）；湖南省重点学科建设项目资助“植物学”（2011－42）；湖南省大学生创新性项目资助“葛花提取物对CCl4诱导肝损伤的修复效果研究”（2014）.

谭娟，1982年生，女，湖南株洲人，讲师，研究方向：药理学.