宫月舒胶囊对大鼠子宫平滑肌收缩的影响

2015-12-08应小平王小平李水花

中成药 2015年11期

关键词：后叶素离体宫素

方艳，张兵，应小平，王小平，李水花

（1.陕西中医药大学，陕西咸阳712046；2.陕西摩美得制药有限公司，陕西咸阳712000；3.渭南职业技术学院，陕西渭南714000）

宫月舒胶囊对大鼠子宫平滑肌收缩的影响

方艳1，张兵2，应小平1，王小平1，李水花3*

（1.陕西中医药大学，陕西咸阳712046；2.陕西摩美得制药有限公司，陕西咸阳712000；3.渭南职业技术学院，陕西渭南714000）

目的观察复方中药宫月舒胶囊（肉桂、川芎、当归、延胡索、白芥子、三七、沉香）对大鼠离体及家兔在体子宫平滑肌收缩的影响。方法选用健康未孕雌性成年大鼠40只，随机分为正常对照组、缩宫素组及宫月舒胶囊提取液大、中、小剂量药组；人工造成动情期，以提高子宫的敏感性。40 h后，处死大鼠并取出子宫，置于缩宫素和宫月舒胶囊提取液中，观察离体子宫张力、收缩强度、频率和活动力，比较单用缩宫素和加用受试药后对以上各指标的影响。选用健康未孕雌性成年家兔40只，随机分为垂体后叶素模型对照组、痛经宝颗粒阳性药物组及宫月舒胶囊大、中、小剂量药组；麻醉后取一侧剥离周围组织的子宫角，给药后，观察子宫平滑肌收缩频率、痉挛性收缩持续时间、峰电位数、及峰电位强度；比较单用垂体后叶素和加用受试药后对以上各指标的影响。结果宫月舒胶囊提取液可通过降低离体大鼠子宫平滑肌的收缩张力、收缩强度、收缩频率及活动力，从而不同程度显著地对抗缩宫素致大鼠离体子宫平滑肌的强烈收缩，并呈一定的量效及时效关系；宫月舒胶囊亦可通过缩短在体家兔子宫平滑肌痉挛收缩持续时间、减少峰电位数及减弱峰电位强度，从而对抗垂体后叶素诱发在体家兔子宫平滑肌痉挛的作用，并呈一定的量效关系。结论宫月舒胶囊临床上可用于治疗痛经。

宫月舒胶囊；子宫平滑肌；缩宫素；垂体后叶素

痛经是妇科常见病和多发病，运用不同的调查方法，其发病率20%～90%［1-2］。于经期或经期前后出现的症状，如周期性下腹疼痛，痛连腰骶、会阴、肛门、大腿内侧，常伴有面色苍白，冷汗淋漓，四肢厥逆，恶心呕吐，严重者甚至可以影响到工作和生活。目前，西药治疗痛经，主要为镇痛、解痉等对症处理，及内分泌、扩张宫颈等治疗方法，但其副作用明显，患者难以接受且复发率高，难以根治［3］。故研制治疗痛经的中药新药是必须的。本文主要从宫月舒胶囊对缩宫素致大鼠离体子宫平滑肌强烈收缩及垂体后叶素诱发在体家兔子宫平滑肌痉挛的影响进行药效学研究，具体报告如下。

1 材料

1.1 样品及试剂宫月舒胶囊粉（2.33 g生药/g粉）和宫月舒胶囊提取液（100%，w/w）均由陕西摩美得制药有限公司提供，批号分别为951207和960810，痛经宝颗粒由河南省宛西制药厂生产，批号940915；将宫月舒胶囊分别用纯净水配置成1.5 g/3 mL、0.5 g/3 m L、0.15 g/3 m L高、中、低

质量浓度的混悬液，将痛经宝颗粒用纯净水配置成1 g/3 m L的混悬液；己烯雌酚注射液（2 mg/m L）（广州明兴制药厂，批号940721-1）；苯甲酸雌二醇注射液（2 mg/mL）（上海第九制药厂，批号941101）；缩宫素注射液（10μg/mL，批号930330），垂体后叶素注射液（10 U/m L，批号9501052），均由上海生物化学制药厂生产；ASP、盐酸肾上腺素注射液（10μg/mL）等。

1.2 实验动物 SD大鼠及家兔均由上海西普尔-必凯实验动物有限公司购进，清洁型，合格证号SCXK（沪）-476566。

1.3 实验仪器 DC-00型离体器官测定仪，JL-3B三笔计录仪，XD-1型放大器等。

2 方法

2.1 对缩宫素致大鼠离体子宫强烈收缩的影响［4-7］选用体质量210～260 g的健康雌性成年SD大鼠40只。实验分空白对照组，缩宫素模型对照组（缩宫素300 U/L），宫月舒胶囊大剂量组（缩宫素300 U/L+宫月舒提取液0.4 g/30 m L）、宫月舒提取液中剂量组（缩宫素300 U/L+宫月舒提取液0.2 g/30 mL）及宫月舒提取液小剂量组（缩宫素300 U/L+宫月舒提取液0.1 g/30 mL）。实验前40 h，取未孕大鼠皮下注射（SC）己烯雌酚（0.2 mg/100 g体质量），人工造成动情期，以提高子宫的敏感性。实验时，颈椎脱臼处死大鼠，剖腹，取出子宫，立即置于盛有戴克隆氏（De-Jalonssol）营养液的玻璃平皿中，剥离附着子宫壁的结缔组织和脂肪组织，剪取子宫约2 cm，阴道端结扎并固定于L型管的小钩上，置于盛有营养液的溶槽中，另一端与肌力换能器相连接。恒温水浴保持工作温度37℃，并不断用增氧泵向营养液中通O2，60～80个气泡/min，稳定30 min后，记录一段正常曲线（量程定为1，走纸速度5 mm/min），再加入缩宫素和受试药，观察离体子宫张力、收缩强度、频率和活动力，比较单用缩宫素和加用受试药后对以上各指标的影响。

2.2 对家兔在体子宫平滑肌肌电活动的影响［8-9］取（2.57±0.2）kg的健康成年雌性家兔40只，随机均分5组：宫月舒胶囊大（1.5 g/kg）、中（0.5 g/kg）、小（0.15 g/kg）剂量试药组。分别用高、中、低质量浓度宫月舒胶囊混悬液3 mL/kg灌胃；阳性药物对照组（痛经宝颗粒1 g/kg），用配制的痛经宝颗粒混悬液3 mL/kg灌胃；垂体后叶素模型对照组（纯净水3 mL/kg灌胃）。实验时，用3%戊巴比妥静脉注射麻醉后，剖腹，找出一侧子宫角，剥离周围组织，用在体子宫平滑肌电位的细胞外记录方法，将双电极插入子宫浆膜下，二电极距离0.5 cm，然后皮肤切口处插一针头，作无效电极，待稳定30 min后，用XD-1型放大器和JL-3B记录仪记录正常肌电（纸速1 mm/s，时间常数10 s，标准电压1 mV）。然后静脉注射垂体后叶素注射液0.5 U/kg（10 s）30 min，待垂体后叶素作用消失后，灌胃给药（3 mL/kg），给予相应药物后，观察对子宫肌电的影响，待40～45 min药物吸收后，再静脉注射等量垂体后叶素。记录时间均为静脉注射垂体后叶素即刻至5 min。观察指标为收缩频率（f簇/5min）、痉挛性收缩持续时间（s/次）、峰电位数（P.V.N，次/5 min）及峰电位强度（P.V.H，mV），比较单用垂体后叶素和加用受试药后对以上各指标的影响。

3 统计学处理

4 结果

4.1 对缩宫素致大鼠离体子宫强烈收缩的影响

正常子宫平滑肌单加入缩宫素后，收缩强度、频率均明显增加。约10 min作用达高峰，随后基本保持稳定，直至40 min，各项指标仍处于较高水平。再加入不同量宫月舒胶囊提取液10 min，均可不同程度地对抗缩宫素所致的子宫平滑肌强烈收缩，且随受试药量的增加作用增强（表1）。尽管宫月舒胶囊提取液0.1 g/30 mL组与单用缩宫素组比，对大鼠离体子宫张力和收缩强度变化均无统计学意义，但该质量浓度仍可使收缩频率明显降低，故而子宫活动力（强度×频率）减弱，与单缩宫素组比较有极显著差异（P＜0.01）；从时效上看（表2），宫月舒胶囊提取液0.4 g/30 mL和0.2 g/30 mL于药后10 min即可明显对抗缩宫素引起的子宫平滑肌各指标的提高，直至30 min，与单缩宫素组比较仍有显著或极显著差异（P＜0.05，P＜0.01）。宫月舒胶囊提取液具有对抗缩宫素致大鼠

离体子宫平滑肌强烈收缩的作用。即可使子宫平滑肌的收缩强度、频率及活动力明显降低，但与痛经宝颗粒比较无显著差异。

表1 宫月舒胶囊对大鼠离体子宫平滑肌收缩的量效关系Tab.1 Dose-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ieson the contractions of uterine smoothmuscIe in rats in vitron=8）

注：与空白对照组比较，△P＜0.01；与缩宫素模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与宫月舒胶囊小剂量组比较，□P＜0.05，□□P＜0.01；与宫月舒胶囊中剂量组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

组别张力/cm 强度/cm 频率/（次.min-1）活动力/（频率×强度）0.35±0.32 9.50±5.98 3.485±2.647缩宫素模型对照组 1.70±1.61△ 8.75±1.29△ 21.5±8.38△ 172.0±56.61△宫月舒胶囊小剂量组 0.58±0.41* 7.76±2.81 12.0±1.85** 91.24±28.77**宫月舒胶囊中剂量组 0.25±0.16*□ 4.61±1.27**□ 10.0±3.85** 45.00±18.87**□□宫月舒胶囊大剂量组 0.07±0.11**□□# 2.70±2.49**□□ 6.50±4.31**□□ 11.29±7.38***□□##空白对照组0

表2 宫月舒胶囊对大鼠离体子宫平滑肌收缩的时效关系Tab.2 Tim e-effect reIationships of Gongyueshu Capsu Ies on the contractions of uterine smooth muscIe in rats in vitros，n=8）

注：与缩宫素模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与宫月舒胶囊小剂量组比较，□P＜0.05，□□P＜0.01；与宫月舒胶囊中剂量组比较，#P＜0.05，##P＜0.01

不同时间测定值10 min 20 min 30 min张力/cm 缩宫素模型对照组指标组别1.70±1.61 1.25±1.31 1.36±1.11宫月舒胶囊小剂量组 0.58±0.41 0.29±0.21 0.22±0.19*宫月舒胶囊中剂量组 0.25±0.16*□ 0.24±0.18 0.19±0.18*宫月舒胶囊大剂量组 0.07±0.11*□□# 0.07±0.01*□# 0.06±0.12**强度/cm 缩宫素模型对照组 8.75±1.29 9.02±1.61 8.76±1.70宫月舒胶囊小剂量组 7.76±2.81 6.47±3.12 5.46±3.10宫月舒胶囊中剂量组 4.61±1.27**□ 4.60±1.59** 4.94±1.96**宫月舒胶囊大剂量组 2.70±2.49**□□ 2.27±2.21**□□# 2.24±2.11**□#频率/（次.min-1）缩宫素模型对照组 21.50±8.38 17.63±6.76 16.25±6.59宫月舒胶囊小剂量组 12.00±1.85** 11.67±1.51* 12.33±3.20*宫月舒胶囊中剂量组 10.00±3.85** 9.63±3.70* 8.63±3.82*宫月舒胶囊大剂量组 6.50±4.31**□□ 5.00±3.42**□□# 4.88±3.44**□□活动力缩宫素模型对照组 172.0±56.61 152.64±51.93 135.08±44.53宫月舒胶囊小剂量组 91.24±28.77** 71.82±23.21** 62.93±24.36**宫月舒胶囊中剂量组 45.00±18.87**□□ 41.74±15.80**□□ 39.99±20.68**宫月舒胶囊大剂量组 11.29±7.38**□□## 12.11±10.31**□□## 13.28±11.08**□□##

4.2 对家兔在体子宫平滑肌肌电活动的影响兔正常子宫肌电呈有规律性慢波或出现快波峰形电位，少数呈无规律性或出现低幅单个或簇状峰形电位。从表3～6可知，各组间，动物子宫肌电活动频率无明显改变，但从其它三项指标看，大、中剂量的宫月舒胶囊和痛经宝颗粒均可明显对抗垂体后叶素所致子宫的痉挛性收缩，即可使痉挛收缩持续时间缩短，峰电位数减少及峰电位强度减弱，与单用垂体后叶素组比较，在统计学上有显著意义。宫月舒胶囊具有对抗垂体后叶素诱发兔在体子宫平滑肌痉挛的作用，即可使子宫平滑肌肌电的峰电位强度降低，峰电位数明显减少以及痉挛持续时间缩短，但与痛经宝颗粒比较无显著差异。

表3 宫月舒胶囊对兔子宫肌电的影响—频率Tab.3 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the frequencies of uterinem yoeIectric activities in rabbitn=8）

正常静脉注射垂体后叶素用药后模型对照组组别 f/（簇.5 min-1）3.20±0.79 4.11±0.93 3.67±1.23宫月舒胶囊小剂量组 2.50±0.55 3.88±1.89 3.25±1.17宫月舒胶囊中剂量组 3.50±0.76 4.88±1.46 4.00±1.20宫月舒胶囊大剂量组 3.00±1.69 3.75±1.17 3.30±1.16阳性药物对照组3.50±1.07 4.63±1.77 4.25±1.75

表4 宫月舒胶囊对兔子宫肌电的影响—痉挛持续时间Tab.4 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the spasm durations in uterinem yoeIectric activities in rabbits

注：与模型对照组比较，**P＜0.01；与宫月舒胶囊小剂量组比较，△△P＜0.01；与宫月舒胶囊中剂量组比较，□□P＜0.01

正常静脉注射垂体后叶素用药后变化值模型对照组组别痉挛持续时间/（s.次-1）11.70±11.44 33.42±22.41 36.45±26.91 3.03±9.11宫月舒胶囊小剂量组 12.88±14.21 35.86±18.86 34.46±22.09 -1.40±5.86宫月舒胶囊中剂量组 11.20±5.19 30.50±18.55 21.48±16.65 -9.02±3.87**△△宫月舒胶囊大剂量组 11.17±7.99 44.65±17.16 12.44±7.32 -32.21±15.43**△△□□阳性药物对照组 11.94±10.66 42.67±22.30 21.46±12.42 -21.21±17.46**△△

表5 宫月舒胶囊对兔子宫肌电的影响-峰电位数Tab.5 Effects of Gongyueshu Capsu Ies on the numbers of spike potentiaIin uterinemyoeIectric activities in rabbitsn=8）

注：与模型对照组比较，**P＜0.01；与宫月舒胶囊小剂量组比较，△△P＜0.01

组别峰电位数/（≥0.1 mv个.5 min-1）正常静脉注射垂体后叶素用药后变化值（△）21.56±19.73 65.10±52.43 62.00±49.21 -3.10±14.90宫月舒胶囊小剂量组 13.43±7.04 41.14±23.60 41.86±28.46 0.71±8.12宫月舒胶囊中剂量组 19.29±13.65 60.29±37.89 30.0±16.36 -30.29±23.94**△△宫月舒胶囊大剂量组 22.25±67.15 67.75±33.10 33.00±21.47 -34.75±17.73**△△阳性药物对照组 18.80±9.74 59.80±49.41 29.70±25.76 -30.10±41.28模型对照组**△△

表6 宫月舒胶囊对兔子宫肌电约影响-峰电位强度Tab.6 E ffects of Gongyueshu Capsu Ies on the strengths of spike potentia Iin uterinem yoeIectric activities in rabbitsn=8）

注：与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与宫月舒胶囊小剂量组比较，△P＜0.05；与宫月舒胶囊中剂量组比较，□P＜0.05

峰电位强度/mV正常静脉注射垂体后叶素用药后变化值模型对照组组别2.05±0.55 2.95±0.60 2.75±0.49 -0.20±0.35宫月舒胶囊小剂量组 1.83±1.08 3.07±0.78 2.86±1.07 -0.21±0.72宫月舒胶囊中剂量组 1.86±0.90 3.43±0.38 2.57±0.54 -0.86±0.35*宫月舒胶囊大剂量组 2.06±0.32 3.69±1.28 2.44±0.56 -1.25±0.85**△□阳性药物对照组 1.95±0.50 3.40±2.04 2.65±1.65 -0.75±0.82*

5 讨论

西医认为原发性痛经与子宫内膜前列腺素合成、分泌关系密切，从而引起子宫平滑肌不协调收缩、甚至痉挛性收缩，造成子宫供血不足，导致厌氧代谢物积贮，刺激痛觉神经元而引起痛经。治疗主要采用解痉镇痛剂、前列腺素合成酶抑制剂、钙离子通道阻滞剂等［10］。祖国医学认为，痛经的病位在冲任、胞宫，与肾、脾、肝三脏密切相关，变化在气血，表现为痛症［10］。主要是由于血瘀停滞、瘀阻胞宫、胞脉，使经行滞涩，不通则痛。宫月舒胶囊是根据《妇人大全良方》的 “芎归散”，《产科发蒙》的 “芎归加桂汤”及《医林改错》的“少腹逐瘀汤”三方之方义、方药化裁而成。其处方由肉桂、川芎、当归、延胡索、白芥子、三七、沉香7味药组成。方中肉桂性辛甘，归肾、脾心、肝经，具有补火助阳、散热止痛、温通经脉的功效［11］；川芎性辛温，归肝、胆、心包经，具有活血行气，祛风止痛之功效［12］；当归性温，味甘辛，归心、肝、脾经，具有补血和血，调经止痛，润燥滑肠的作用［13］。诸药合用具有温经散寒，活血止痛之功效。现代医学研究表明，桂枝汤中分离获得的单体成分桂皮醇，能下调白细胞介素IL-1刺激微血管内皮细胞rCMEC释放升高的前列腺素PGE2

［14］；川芎提取物川芎嗪不仅是一种钙离子拮抗剂［13］，还可抑制神经病理痛大鼠的机械痛敏［15］；当归精油对催产素或高钾去极化液中Ca2+

所致的子宫平滑肌收缩均有抑制作用［6］。亦有研究表明，缩宫素不仅直接作用于子宫平滑肌细胞引起子宫收缩，而且还同时刺激内膜细胞释放前列腺素。缩宫素和前列腺素可从不同机制引起子宫平滑肌痉挛性收缩，是较公认的在体子宫痉挛（类痛经反应）病理模型［16］。本研究通过动物体内、体外实验，结果表明，宫月舒胶囊可对抗缩宫素致大鼠离体子宫平滑肌的强烈收缩及垂体后叶素诱发在体家兔子宫平滑肌的痉挛，进一步为宫月舒胶囊临床上治疗痛经提供了理论依据。

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Effect of Gongyueshu Capsu Ies on contraction of uterine sm ooth m uscIe in rats

FANG Yan1， ZHANG Bing2， YING Xiao-ping1， WANG Xiao-ping1， LIShui-hua3*

（1.Shaanxi Gollege of Ghinese Medicine，Xianyang 712046，Ghina；2.Shaanxi PharmaceuticalGo.，Ltd，Xianyang 712000，Ghina；3.Weinan Vocational and Technical Gollege，Weinan 714000，Ghina）

Gongyueshu Capsules；uterine smooth muscle；pitocin；pituitrin

R285.5

1001-1528（2015）11-2362-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2015.11.006

2015-03-18

陕西省科技厅自然科学基金资助项目（2011k16-05-03）

方艳（1976—），女，硕士，副教授，从事中西医结合临床基础研究。Tel：（029）38185117，E-mail：fangyan9494@ 163.com

*通信作者：李水花（1973—），女，硕士，副教授，从事中西医结合临床基础研究。Tel：（0913）2085062，E-mail：26-35269371@ qq.com