镉对鸡肝脏的影响

文│蔡洪波（辽宁省建平县八家农场动物卫生监督所）

镉对鸡肝脏的影响

文│蔡洪波（辽宁省建平县八家农场动物卫生监督所）

一、材料与方法

1.试验材料。1日龄健康海兰公鸡160只，常规饲养，至30日龄时进行染毒试验。

2.试验方法。

（1）镉毒性试验。160只30日龄海兰公鸡随机分为2组，即对照组、加镉组，每组80只，对照组饲喂基础日粮，加镉组饲喂基础日粮＋氯化镉150毫克/千克。分笼常规饲养，自由采食，每日记录饲料和饮水消耗，每7天称体重1次。自试验开始的第15天、30天、45天、60天分别从对照组、加镉组中取10只鸡剖杀，分别采取肝脏组织样品用于各项指标测定。试验期为60天，试验期内观察试验鸡的临床表现，并记录之。

（2）临床症状检查。定期称重、观察，收集各试验组鸡的临床症状，筛选出鸡镉中毒临床指标。

（3）组织样品的采集与处理。心脏采血，放入洁净试管，置于室温下，自行析出血清，分装备用。鸡剖杀后，称取肝脏重量用于测定脏器系数。采取肝脏组织块固定于10%中性福尔马林溶液中，用于病理组织学的检查。采取肝脏组织块0.5克，快速匀浆用于抗氧化功能指标的检测。

（4）病理学检查。

眼观变化。常规剖检，观察肝脏病理变化，准确记录试验结果。

光镜检查。采取肝脏组织样1.5厘米×1.5厘米×0.5厘米，10%中性福尔马林溶液固定，按照常规方法制作病理石蜡切片，在C35AD型OLYMPUS生物学显微镜下观察病理组织学变化，记录结果。

（5）测定肝脏的脏器系数。肝脏脏器系数＝肝脏重（克）/体重（千克）。

（6）抗氧化功能指标的测定。血清和肝脏组织匀浆中谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性的检测采用DTNB法；血清和肝脏组织匀浆中超氧化物歧化酶（SOD）活性的检测采用黄嘌呤氧化法；血清和肝脏组织匀浆中丙二醛（MDA）含量的测定采用硫化巴比妥酸法。

（7）试验数据的分析与统计。数据的统计学分析应用SAS for Windows 6.12软件。

二、结果与分析

1.临床症状观察。同对照组比较，试验至30日时，加镉组鸡出现较明显的临床症状，冠及肉髯萎缩，精神萎靡，跛行，饮食欲减退或废绝，离群、蹲卧、嗜睡、腹泻。40日时部分病例鼻孔流出多量的脓性黏液，可听见拉风箱似的呼吸声。多数病例严重下痢，初呈水样稀便，然后转为灰白色或黄白色黏稠物。至试验结束，可见跗关节关节肿大。

对照组羽毛光亮，精神状态良好，饮食正常。

2.病理学检查结果。

（1）病理解剖学检查结果。加镉组表现为：脾脏充血，萎缩，表面有白色纤维膜，皮质与髓质界限不明显；胸腺萎缩；法氏囊萎缩充血、出血；右心扩张，心肌变性；肝脏体积肿大质脆，呈土黄色，胆囊肿大；肺脏实变被覆纤维素膜，呈紫红色；气囊壁增厚浑浊呈灰白色；胃肠黏膜充血，肠腔充满黏稠淡黄色粥样物，腹腔中有多量的淡黄色微浑浊的液体；肾肿大。

对照组器官形态无明显异常变化。

（2）病理组织学检查结果。加镉组肝细胞脱落、变性，细胞坏死，胞浆内脂肪变性，随着染镉时间的延长，肝脏损害加重，空泡样变性增多，部分肝细胞坏死形成坏死灶。

对照组肝细胞发育正常，细胞核明显，界限清晰。

3.肝脏脏器系数的测定结果。

由表1可以看出，各时间段对照组和加镉组脏器系数均逐渐降低，但随着染镉时间的延长，加镉组脏器系数低于对照组，经统计学分析差异显著(P＜0.05)或差异极显著（P＜0.01）。结果表明镉能够降低鸡肝脏的脏器系数。

表1 肝脏的脏器系数的测定结果

4.抗氧化功能的测定结果。

（1）血清和肝脏组织匀浆中GSH-Px活性的测定结果。由表2、3可知，在整个试验期内血清、肝脏中的GSH-Px活性由对照组至加镉组依次降低，随着时间延长加镉组呈现下降趋势，呈现明显的时间-效应关系。在同一时间段对照组与加镉组之间比较差异极显著（P＜0.01）；30天后加镉组各时间段之间差异极显著（P＜0.01）。这表明镉能够降低鸡体内和肝脏中GSH-Px活性。

（2）血清和肝脏组织匀浆中SOD活性的测定结果。由表4、5可知，在整个试验期内各时间点血清、肝脏中的SOD活性由对照组至加镉组依次降低，随着时间的延长加镉组肝脏中的SOD活性逐渐下降。对照组与加镉组间差异均极显著（P＜0.01）；30天后加镉组各时间点间差异极显著（P＜0.01）。由此可见，镉能够降低鸡体内和肝脏中的SOD活性。

（3）血清和肝脏组织匀浆中MDA含量的测定结果。由表6、7可知，在整个试验期内肝脏中MDA含量由对照组至加镉组依次升高，随着时间延长加镉组呈现升高趋势，呈现明显的时间-效应关系。各时间点对照组与加镉组之间差异均极显著（P＜0.01）；镉组在30天前差异不显著，30天后各时间点间差异极显著（P＜0.01）。这一结果表明镉能够增加鸡体内和肝脏内MDA含量。

表2 血清中GSH-Px活性的测定结果NU/毫升

表3 肝脏中GSH-Px活性的测定结果NU/毫克.Pr

表4 血清中SOD活性的测定结果NU/毫升

表5 肝脏中SOD活性的测定结果NU/毫克.Pr

表6 血清中MDA含量的测定结果NU/毫升

表7 肝脏中MDA含量的测定结果NU/毫克.Pr

三、讨论

1.鸡镉中毒模型的建立。为复制鸡镉中毒模型，本试验通过在其日粮中添加一定剂量的镉，经60天的试验，根据鸡的临床表现、剖检变化、病理学、血液学和组织学指标，表明鸡镉中毒模型复制成功。

2.镉对鸡肝脏毒性作用。本试验对鸡肝脏病理解剖学检查结果表明，加镉组的肝脏表现为充血、出血，不同程度的肿胀，并有局灶性坏死。光镜可见肝细胞核变形，细胞空泡样变性，随着染镉时间的延长，空泡样变性越加明显，并出现坏死灶。所观察到的镉对鸡肝脏解剖学和组织学的损伤情况，可以表明镉能够通过损伤鸡肝脏来影响其功能，发挥了毒性作用。

3.镉对鸡肝脏抗氧化系统功能的影响。GSH-Px是一种抗氧化酶类，能够分解过氧化物，去除细胞内脂质和有机过氧化反应产生的毒物，以维持细胞膜的还原状态，从而起到保护细胞膜的作用。SOD能够清除细胞内的氧离子等自由基，发挥抗氧化功能。MDA是自由基攻击生物膜中的多不饱和脂肪酸引发脂质过氧化作用中形成的脂质过氧化物。因此，MDA的量常常可反映机体内脂质过氧化的程度，间接地反映出细胞受损的程度。

本试验结果表明镉能够影响血清及肝脏组织匀浆中GSH-Px、SOD活性和MDA含量，即随着时间的延长，酶活性下降，MDA含量增加，呈现明显的时间效应。正常动物机体内有比较完善的抗氧化系统，如GSH-Px、SOD等，可以保护组织细胞不受氧化物和自由基的损伤。本试验结果与之前报道的试验结果一致，可见镉所导致的氧化胁迫是其发挥毒性机制的主要途径。

四、结论

本试验以鸡为试验动物，在日粮中添加一定浓度的镉，复制鸡镉中毒模型。通过对试验鸡的临床表现及肝脏的病理变化的观察，同时进行了肝脏的脏器系数和氧化胁迫等方面的检测。研究结果表明镉能够导致鸡肝脏发生损伤，并且诱导鸡肝脏发生氧化胁迫，导致鸡体内血清和肝脏中GSH-Px和SOD活性降低、MDA含量升高，破坏机体清除自由基及抗氧化防御系统，造成鸡肝脏发生氧化损伤。加镉组在病理组织学上改变的差异为判断和分析镉中毒提供了依据。