植物油与含水量对玫烟色棒束孢IfB01菌株分生孢子萌发率的影响

邹春华，黎坤瑜，董廷艳，胡琼波

(华南农业大学资源环境学院，广州 510642)

玫烟色棒束孢菌Isaria fumosorosea，以前称玫烟色拟青霉Paecilomyces fumosoroseus，是一个常见的虫生真菌复合种(spcies complex)(Zimmermann，2008)，其寄主多样，分布广泛，常用于防治烟粉虱Bemisia tabaci、蚜虫Aphis spp.、小菜蛾Plutella xylostella 等重要害虫(Maketon et al.，2008;Shapiro-Ilan et al.，2008;Espinel et al.，2009;Mascarin et al.，2014)。IfB01 菌株是作者前期从烟粉虱感病尸体上分离筛选的玫烟色棒束孢菌菌株，该菌株对B 型烟粉虱有较好控制效果，其分生孢子在浓度为1.0×107spores/mL 对2 龄若虫致死率达81%以上，2.5×106spores/mL 与1.25 mg/L 螺虫乙酯混剂则达到87%以上的防效，但其分生孢子不耐贮藏。过去的实验表明，分生孢子含水量对玫烟色棒束孢菌分生孢子的保存寿命有显著影响(陈宜涛和冯明光，2002;Bouamama et al.，2010a，2010b)，并且许多植物油也可以促进孢子贮存期的延长(Kim et al.，2011)。因此，本研究将考察孢子含水量及植物油对该菌株分生孢子不同贮藏时间萌发率的影响，以探索延长孢子寿命的方法。

1 材料与方法

1.1 供试菌株与培养

供试菌株:IfB01 菌株(中国典型培养物保藏中心保藏编号CCTCC M 2012400)斜面菌种。

菌种培养与分生孢子收集:刮取IfB01 菌株斜面菌种的分生孢子，接种于PDA 平板上，25℃培养箱中培养15-20 d 至表层产生大量分生孢子时，将适量的无菌水倒入培养皿，使无菌水没过分生孢子层，用毛笔在水面下轻刮培养基表面，使分生孢子分散于无菌水中。将含有大量孢子的无菌水过325 目筛网滤去菌丝及PDA 残渣等，收集滤液，2000 转/分离心10 min，去除上清液，将分生孢子沉淀物于35℃干燥箱中烘干24 h，得到纯净分生孢子粉，备用。

1.2 分生孢子含水量测定

先将1.5 mL 离心管在75℃干燥至恒重，准确称取0.3 g 孢子粉，轻轻滑入离心管内，将其置于35℃低温干燥，取出后放入硅胶干燥器冷却再称重，重复3 次，至恒重为止。含水量的计算公式为:

其中，m1为离心管质量，m2为烘前离心管加孢子粉质量，m3为烘后离心管加孢子粉质量。

1.3 植物油处理

用1.5 mL 的离心管分装0.3 g 孢子粉，向其中分别滴加约0.5 mL 大豆油(福临门，中粮集团)、调和油(金龙鱼，嘉里粮油)、花生油(金龙鱼，嘉里粮油)、葵花籽油(福临门，中粮集团)和玉米油(深圳南顺)，充分混匀，以不加植物油的孢子粉为空白对照(CK)，重复3 次，离心管用帕拉胶膜封口后于25℃下保存。

1.4 分生孢子萌发率测定

分别于贮藏7 d、30 d、90 d 后，用灭菌牙签挑出少许分生孢子贮藏物，放入装有0.2%吐温-80 离心管中充分震荡，制成孢子悬浮液，调节孢子浓度约在105-106spores/mL。吸取100 μL 悬浮液均匀涂布在PDA 平板上，于25℃培养箱中培养24 h 后，在显微镜下检查3个视野，记录孢子总数与萌发数，计算萌发率。

2 结果与分析

2.1 不同植物油对玫烟色棒束孢菌分生孢子萌发率影响

植物油能够提高分生孢子的萌发率(如表1)，在贮藏后第7 天，对照的孢子萌发率为65%左右，而5种植物油处理的孢子萌发率都大于80%;在贮藏后第30 天，对照的孢子萌发率急剧降低到5%左右，而5种植物油处理的孢子萌发率仍然维持在66%-81%之间;然而，至贮藏90 d 后，植物油处理的孢子相互粘结，虽然有少量萌发，但无法精确测定其萌发率，估计小于5%，而此时对照的孢子萌发率则降至零。

植物油品种之间比较，不管孢子含水量怎样变化，五种植物油处理的孢子萌发率都没有显著性差异(图1)。

2.2 孢子含水量对植物油贮分生孢子萌发率的影响

孢子含水量对贮藏初期(7 d)及对照的孢子萌发率没有影响，但对植物油处理的贮藏30 d 后分生孢子之萌发率显著影响(图2)。贮藏后30 d，含水量为3.13%的处理，不管采用哪种植物油，其油贮孢子萌发率在80%左右，显著性高于含水量为9.13%和18.83%的处理的75%左右和70%以下的萌发率。

表1 植物油与孢子含水量对分生孢子萌发率的影响Table 1 Effects of plant oils and differentmoisture content on conidia germination rates

3 结论与讨论

虫生真菌分生孢子是其重要的繁殖体，也是真菌杀虫剂的主要成份，因此，如何延长分生孢子的寿命，提高其萌发率，是真菌杀虫剂制剂加工中一个必需解决的问题。然而，分生孢子的寿命控制机理非常复杂，有种质遗传因素，也与环境因素(比如温度、湿度、营养条件、氧气及其所处的化学环境等)密切相关，在目前对于分生孢子在什么条件下进入休眠与解除休眠及其机理缺乏认识的情况下，通过大量实验工作来研究延长孢子寿命的技术手段具有实际意义。本研究发现，五种植物油及低含水量能够延长IfB01 菌株分生孢子的贮存时间，与前人(雷仲仁等，2003;谷祖敏等，2013;Kim et al.，2013)研究报道油类可提高不同真菌孢子萌发率的结果具有相似性，进一步说明，油类似乎可广泛延长不同虫生真菌孢子的寿命。

然而，本实验中发现，植物油贮分生孢子在贮藏90 d 以后，发生粘结现象，致使无法检测其萌发率，这种现象将影响油剂的使用价值。在以后的油剂加工研究中，可考虑添加适当助剂，增加其分散性，以解决此问题。

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