一例高致病性猪蓝耳病和猪瘟混合感染的诊断

韩俊伟（河南省新乡市动物卫生监督所 453000）

杜海燕（河南省新乡市动物疫病预防控制中心 453000）

一例高致病性猪蓝耳病和猪瘟混合感染的诊断

韩俊伟（河南省新乡市动物卫生监督所 453000）

杜海燕（河南省新乡市动物疫病预防控制中心 453000）

某规模化猪场存栏生猪519头，其中公猪5头，母猪280头，后备母猪134头，断奶仔猪100头，养殖方式为自繁自养，主要从事仔猪生产销售。免疫方面，该猪场按春秋两防给猪群进行免疫，接种猪瘟弱毒疫苗，并对即将出售的60日龄仔猪接种猪瘟疫苗一次。2014年12月5日，猪群开始发病，病情不断发展变化。12月26日，实验室收到该猪场送检的20～50日龄病死仔猪3头，对发病原因进行检测诊断。

1 流行病学调查

猪群发病后，有130头妊娠母猪发生流产，死胎现象，初产或经产母猪均出现繁殖障碍症状，流产率达到46.4%；哺乳仔猪曾有黄、白痢的流行病史，断奶后发病的仔猪体温升高，伴随呼吸道症状，肢体末端，包括耳朵，吻突，四肢，尾部皮肤发紫。截至送检时，该猪场共死亡成年母猪4头、仔猪120头，死亡率达到23.89%。

2 剖检病变

肺脏表面可见大小不等的出血点或出血斑，肺膈叶观察到暗红色的突变区（3/3）；肺表面出现纤维素性渗出物，肺与胸壁或膈肌相粘连（2/3）；胃底腺体区观察到弥漫性出血病变；包皮积尿，挤压后流出茶黄色的尿液，膀胱粘膜可见针尖大小的出血点；盲肠粘膜、回盲瓣区域出现同心圆状的纽扣状溃疡；肾包膜下可见少量的出血点（1/3）；腹股沟淋巴结、肺门淋巴结、肠系膜淋巴结水肿，切面多汁，部分病例观察到大理石花纹状的出血病变，参看图1、图2、图3。

3 实验室检测

3.1 RAN提取

分别取3头病死猪的肺、淋巴结研磨组织匀浆液，8000rpm离心10min，取上清液采用离心柱提取法提取病料总RNA样本。

图1 胃底腺体区弥漫性出血

图2 回盲区域纽扣状溃疡

图3 肺门淋巴结肿大

3.2 猪瘟病毒核酸检测

采用广州维伯鑫生物科技有限公司的猪瘟病毒核酸检测试剂盒（RT-PCR荧光探针法）对待检病料进行猪瘟病毒RNA体外扩增检测。结果见图4。

图4 猪瘟病毒核酸RT-PCR荧光探针法检测结果

结果判断：（1）阳性：检测样本Ct值小于等于35.0，且曲线有明显的指数增长期；（2）检测样本Ct值大于35.0且小于40.0，重复一次试验，如果Ct值仍小于40.0，且曲线有明显的指数增长期，为阳性，否则为阴性；（3）阴性：检测不到样本Ct值或Ct值为40。

阳性对照Ct值为13.85；样本1的Ct值为15.72；样本2的Ct值为19.16，样本3未检测到Ct值。结果表明3头送检病死猪的猪瘟病毒核酸检出率达66.67%（2/3），病死猪群存在猪瘟病毒的感染。

3.3 猪蓝耳病病原核酸检测

采用针对蓝耳病病毒非结构蛋白Nsp2基因的引物对病料RNA样本进行RT-PCR扩增，结果见图5。

结果表明，从3头送检病死猪的肺和淋巴结样本均扩增出1064bp的DNA带，蓝耳病病原核酸检出率达到100%（3/3）。可知该猪场存在猪蓝耳病的感染。

图5 猪蓝耳病病原核酸检测结果

4 结论与建议

根据诊断结果，对死亡猪组织检测出猪瘟病毒和猪蓝耳病病毒核酸阳性，说明该猪场20～50日龄断奶仔猪出现猪瘟与蓝耳病混合感染。高致病性蓝耳病是引起母猪繁殖障碍和仔猪死亡的罪魁祸首，猪瘟混合感染是次发的病因。发病的仔猪曾经接种猪瘟弱毒疫苗，可能是由于猪场存在管理上的漏洞等问题，单独使用了一些不正规厂家生产的疫苗，且免疫的方法和剂量不当，致使猪群没能产生应有的保护力。

防治动物疫病应采取综合性措施，即加强预防接种，搞好饲养管理，加强检疫和防疫，做好猪场卫生和消毒工作。建议对断奶仔猪群进行猪瘟弱毒活疫苗紧急免疫接种，3～5d以后再接种蓝耳病灭活疫苗。结合猪场实际，科学制定免疫程序，猪瘟免疫程序不能按春秋两防季节性预防接种，应20日龄猪瘟弱毒活疫苗首次免疫；50日龄加强免疫一次（2头份）；以后每4～6个月接种一次猪瘟疫苗。蓝耳病预防接种可以先免疫发病猪群，再接种正常猪群。配种前20d，临产前30d母猪各接种1次（4头份）。此外，猪场还应注意疫苗质量、接种方式和途径，确保免疫质量。目前，猪群不要急于配种，应错开1～2个发情期，待猪群恢复健康以后再配种。