产黑色素类杆菌与慢性根尖周炎临床症状的相关性

刘海霞

(中国核工业北京四O一医院, 北京 102413)

·临床研究·

产黑色素类杆菌与慢性根尖周炎临床症状的相关性

刘海霞

(中国核工业北京四O一医院, 北京 102413)

目的: 探讨产黑色素类杆菌(BPB)与慢性根尖周炎临床症状的相关性。方法：采用PCR技术检测30个慢性根尖周炎患牙感染根管内5种BPB的定植情况，单因素分析5种BPB与慢性根尖周炎临床症状的相关性。结果：牙龈卟啉单胞菌(Pg)、牙髓卟啉单胞菌(Pe)与慢性根尖周炎的疼痛、肿胀呈正相关(OR>2，P<0.05),与叩痛、窦道无相关性；变黑普氏菌(Pn)与慢性根尖周炎的叩痛、肿胀呈正相关(OR>2，P<0.05)，与疼痛、窦道无相关性；中间普氏菌(Pi)和产黑普氏菌(Pm)与慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、窦道和肿胀均无相关性。结论：Pg、Pe与慢性根尖周炎的疼痛和肿胀密切相关，Pn与叩痛和肿胀密切相关。尚未发现Pi和Pm与慢性根尖周炎临床症状的相关性。

产黑色素类杆菌; 慢性根尖周炎

[DOI] 10.15956/j.cnki.chin.j.conserv.dent.2015.09.007

[Chinese Journal of Conservative Dentistry,2015,25(9):541]

慢性根尖周炎是根管内以厌氧菌为主的混合感染。尽管100多年前就已证实感染根管内存在细菌，但到目前为止，有关细菌引起根尖周炎临床症状的发病机制仍存在分歧。Siqueira[1]、Foschi F[2-3]等认为感染根管内细菌与根尖周炎的部分临床症状如疼痛、叩痛、窦道及肿胀密切相关。亦有学者[4-5]认为, 细菌与慢性根尖周炎的临床症状并无相关性。本课题组前期采用分子生物学技术(PCR)检测了产黑色素类杆菌(BPB)在慢性根尖周炎的定植情况[6]，本研究在前期研究基础上进一步分析5种BPB与慢性根尖周炎临床症状之间的相关性。

1 临床资料和方法

1.1 临床资料

临床随机选择慢性根尖周炎患者25例(30个牙)，其中男15例，女10例，年龄18～73岁(表1)。纳入标准：①患牙为单根管；②无全身性疾病，近3个月未服用抗生素；③知情同意。

表1 慢性根尖周炎患牙临床症状分布 (牙)

1.2 方法

1.2.1 标本采集

参照谢晓莉等[6]的方法，橡皮障隔湿，术区常规消毒，去除釉质或原有充填材料，再次消毒窝洞，揭髓顶。#15 K锉探查根管，测定工作长度。连续3根无菌纸尖插入根管内(距工作长度短1 mm处)，停留30 s，吸取根管渗出液(若根管内干燥，则注入无菌生理盐水，充分扩锉根管壁)。将采集的所有纸尖放入盛有1 mL(pH 7.2)磷酸盐缓冲液的无菌Eppendorf管中，-20 ℃低温保存。

1.2.2 PCR扩增

引物合成、PCR扩增及产物分析见文献[6]。

1.3 统计学分析

采用比数比(odds ratio，OR)进行单因素分析,根据Socransky SS等[7]和Sundqvist G[8]的方法，当OR>2时,两者间为正相关；当OR<0.5时，两者间为负相关。根据OR 95%可信区间(confidence interval，CI)，在正相关关系时OR下限<1或在负相关关系时OR上限>1时，OR统计学分析无显著性意义。

2 结果

2.1 电泳结果[6]

所有临床标本通用引物的PCR检测均出现1 500 bp的扩增带，说明感染根管内存在细菌，标本中可能存在的其他感染物质和根管内的成分未对PCR产生明显的影响。

细菌菌种特异性引物的PCR检测出现了与预计大小一致的单一扩增带，条带清晰，未出现非特异扩增带，说明特异性引物PCR的扩增条件适宜。

2.2 产黑色素类杆菌与慢性根尖周炎临床症状的相关性

2.2.1Pg、Pe与慢性根尖周炎临床症状的相关性

Pg、Pe在疼痛、肿胀组检出率高于无症状组，但无统计学差异(P>0.05)；相关性分析示，Pg、Pe与慢性根尖周炎的疼痛、肿胀呈正相关(OR>2);而叩痛和窦道组检出率差异不明显(P>0.05)，尚不能认为Pg、Pe与慢性根尖周炎的叩痛和窦道形成相关(表2～3)。

表2 Pg与慢性根尖周炎临床症状的相关性(n, %)

*表示相关性显著, 括号内为检出率

表3 Pe与慢性根尖周炎临床症状的相关性(n, %)

* 表示相关性显著, 括号内为检出率

2.2.2Pn与慢性根尖周炎临床症状的相关性

Pn在疼痛、叩痛、窦道、肿胀组检出率较无症状组高，但无统计学差异(P>0.05)；相关性分析显示，Pn与慢性根尖周炎的叩痛、肿胀呈正相关(OR>2)(表4)。

表4 Pn与慢性根尖周炎临床症状的相关性(n, %)

* 表示相关性显著, 括号内为检出率

2.2.3Pi、Pm与慢性根尖周炎临床症状的相关性

Pi、Pm在疼痛、叩痛、窦道、肿胀组检出率与无症状组无显著差异(P>0.05)；相关性分析显示，Pi、Pm与慢性根尖周炎的疼痛、叩痛、窦道及肿胀亦无相关性(表5～6)。

表5 Pi与慢性根尖周炎临床症状的相关性(n, %)

括号内为检出率

表6 Pm与慢性根尖周炎临床症状的相关性(n, %)

括号内为检出率

3 讨论

疼痛、肿胀及窦道往往是慢性根尖周炎患者就医的原因之一。鉴于感染根管内环境的特殊性及菌种的复杂性，有关根尖周炎临床症状的发病机制目前还不是十分清楚。细菌作为根尖周炎的主要致病因素，其自身的内毒素、荚膜、外膜蛋白、蛋白水解酶等毒力因子及其代谢产物在根尖周炎临床症状的发生机制中均发挥重要作用。致病菌的分离鉴定无疑为临床症状的发生机制提供了理论依据。

本研究中的30个慢性根尖周炎患牙，17个伴有疼痛，Pg、Pe、Pn的检出率相对较高。进一步分析产黑色素类杆菌和疼痛的相关性，发现Pg和Pe与根尖周炎的疼痛密切相关，但尚不能认为Pn、Pi、Pm的存在引起根尖周炎的疼痛。除Pn外其余4种产黑色素类杆菌均与叩痛无相关性，表明Pn与慢性根尖周炎的叩痛关系密切。结合实验数据和临床表现，进一步推测叩痛形成的机制主要是细菌的毒力因子及其代谢产物而引起根周膜充血、水肿、渗出物淤积，牙周间隙内压力升高，临床上患牙表现为不适、发木、浮出肿胀感，叩诊检查增加根尖周组织的负担而引起疼痛。

根尖周炎的患牙牙髓坏死，尖周局部组织化脓，牙槽骨破坏，脓液沿破坏的牙槽骨流至牙龈处，致牙龈破坏形成窦道。本研究中9个存在窦道的患牙，经统计学分析显示，与产黑色素类杆菌无明显相关性(P>0.05)，尚不能认为产黑色素类杆菌就是窦道形成的原因。

肿胀是根尖周炎较为严重的一种临床表现，近年，有关BPB和慢性根尖周炎肿胀的研究较多。本结果表明，Pg、Pe、Pn与肿胀呈正相关。这与Siqueira JF等[1]的研究结果一致，产黑色素类杆菌在根尖脓肿根管内的检出率达80%，其中Pe的检出率为70%，同时发现在脓肿患牙根管内Pg和Pe常在同一根管同时检出。

目前有关致病菌和根尖周炎临床症状相关性的研究存在分歧，Siqueira JF等[1,3]认为BPB与根尖周炎的临床症状明显相关，普氏菌属与根尖周炎的疼痛、叩痛及肿胀关系密切。Griffee MB等[9]的研究也证实Bacteroidesmelaninogenicu(即新命名的Pm)与根尖周炎的疼痛明显相关。曹慧敏等[10]对80例感染根管研究发现BPB的检出率高达76%，进一步研究发现Pg、Pe的存在与窦道形成和根尖脓肿密切相关。而另一部分学者[3-4]持相反的观点，认为细菌的检出与根尖周炎的疼痛并无相关性，理论依据是同一种细菌在有症状和无症状根尖周炎根管内都有定植。针对这两种截然不同的观点，我们推测以下几个可能影响研究结果差异的因素。

①同一菌种不同菌株间的致病性本身存在差异，影响研究结果。如：Pg不同菌株间致病性毒力亦有不同。菌毛是Pg主要毒力因子，fimA是Pg菌毛主要亚基菌毛素的编码基因，存在广泛差异。欧阳玉玲等[11]研究不同基因型Pg与慢性牙周炎临床症状的关系，发现ⅡfimA 和ⅣfimA型Pg致病能力较强，在牙周组织的破坏中发挥重要作用。

②根尖周炎是细菌的毒力因子和宿主防御系统相互对抗的结果[12]，一方面细菌的毒力因子引起尖周组织的感染，另一方面，细菌在感染部位的数量可能影响根尖周炎临床症状的表现。当细菌达到一定的数量才可能干扰宿主的防御反应，出现临床症状。而少量的侵入，可能被机体防御机能所清除。同时宿主的免疫防御对临床症状的表现也有重要影响。同为根尖周炎在不同患者的临床表现亦有很大差别。

③细菌间的相互作用也是影响临床症状的一个重要因素。Gomes BP等[13]研究60例感染根管发现Pi、Pn和Porphyromonas均与牙髓感染引起的疼痛和肿胀有相关性，这种细菌间潜在的相互作用是导致典型临床症状的主要原因。单独培养细菌的毒性较弱，混合培养时，细菌相互提供营养物质，增强彼此的毒力。王变红等[14]将Pe、Pg、Fn分别接种于SD大鼠第一磨牙髓腔内，发现细菌混合感染的致病能力显著强于单菌感染。

④人种和地区差异也是导致细菌检出差异的原因之一。Siqueira JF等[15]对比研究巴西和韩国人感染根管内7种牙髓感染致病菌，发现细菌检出率存在明显差异。巴西人群中Pe,Dp、Fa、Td、Tf的检出明显高于韩国人 。

综上所述，BPB作为感染根管内的优势菌群，在根尖周病的发生发展过程中起重要作用。其毒力因子，如内毒素、酶、菌毛、荚膜、外膜蛋白及其代谢产物作用于牙髓及根尖周组织，引起患牙疼痛、叩痛、肿胀等临床症状。

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Correlation betweenblack-pigmentedbacteroidesand clinical symptoms in chronic apical periodontitis

LIU Hai- xia

(Beijing401HospitaloftheNuclearIndustryofChina,Beijing102413,China)

AIM: To study the correlation betweenblack-pigmentedbacteroides(BPB) and clinical symptoms of chronic periodontitis. METHODS: The colonization of 5 kinds ofBPBin 30 infected root canals in patients with chronic apical periodontitis were detected by 16S rDNA PCR.The correlation betweenBPBand clinical symptom of chronic apical periodontitis was analyzed by monofactorial odds ratio, and their functions in chronic apical periodontitis were discussed. RESULTS: The relationship betweenP.g,P.eand pain, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But there was no correlation with pain of percussion and sinus. The relationship betweenP.nand pain of percussion, swelling in chronic apical periodontitis showed positive correlation (OR>2,P<0.05). But it had no correlation with pain and sinus. There was no correlation betweenP.i,P.mand pain, pain of percussion, sinus and swelling in chronic apical periodontitis(P>0.05). CONCLUSION:P.g,P.eandP.nplay an important role in pain and swelling in chronic periodontitis. There was no correlation betweenP.i,P.mand clinical symptom in chronic apical periodontitis.

black-pigmentedbacteroides; chronic apical periodontitis

2014-08-03;

2015-07-03

刘海霞(1982-)，女，汉族，甘肃人。硕士，主治医师

刘海霞，E-mail:liuhx1202@126.com

R780.2

A

1005-2593(2015)09-0541-04