陈旧性血迹的DNA检验

泉州市公安局 孙琳琳 程 冲

随着 DNA检验技术及其数据库在侦查破案和执法办案中的作用越来越突出，部分在当年未进行 DNA检验的检材被要求重新整理并送检。这部分生物检材由于存放时间过长，并受存放场所条件的限制，DNA的降解是不可避免的。本实验利用Chelex-100法和M48磁珠提取法分别提取陈旧性血迹进行DNA检验。

1 材料与方法

1.1 实验样本

1～21号检材（其中所有检材存放时间均为10～14年）。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取

1.2.1.1 Chelex-100法。剪取检材适量，置于0.5mL离心管中，加入 200µL 10%Chelex-100 和 5µL PK（10mL/mL）；56℃1h，震荡，100 ℃ 10min,13000rpm 离心3min。

1.2.1.2 M48磁珠提取法。剪取检材适量，置于1.5mL离心管中，加入200µL G2溶液和20µL 1mg/mL PK，56℃保温1h，13，000rpm离心3min，取上清液，加入600µL MTL溶液和30µL磁珠，充分混匀，室温放置15min，期间震荡数次。用500µL 80%乙醇溶液洗涤 3次，65℃晾干 10min,加入 30µL去离子水洗脱。

1.2.2 PCR-STR检测

用Identifiler Plus试剂盒进行扩增，总体系为10µL，模板DNA1µL，PCR热循环采用29个循环；扩增产物ABI3130XL遗传分析仪检测，GeneMapper软件进行STR分型。

2 结果

表1 STR分型结果统计

图1 用Chelex-100法提取检材的分型图谱

图2 用M48磁珠法提取检材的分型图谱

用Chelex-100法提取的21例样本中，有14例出现等位基因缺失，且有15例平均峰高≤400RFU ；使用M48磁珠法提取的样本中仅有1例存在等位基因缺失，2例平均峰高≤400RFU。图1与图2是针对同一样本使用两种不同方法的STR分型结果，图1的检测结果显示该样品出现小片度优势扩增，大片段等位基因缺失，等位基因扩增不平衡等现象；图2的检测结果并未出现等位基因缺失，峰值在 400～4000RFU之间，各等位基因间的均衡性良好。

3 讨论

现场的生物检材多种多样，检材的 DNA质量受温度、湿度、化学及生物等多种因素的影响，其保存时间越久、降解也越严重，而且检材中越容易掺入PCR抑制剂。本次实验所使用的样本均是 10年以上的陈旧性血迹检材，通过Chelex-100法提取的结果提示大部分样本 DNA发生不同程度的降解，这是与当时提取的情况及保存时间和条件有一定关联。与Chelex-100法相比较，M48磁珠法可能更适合陈旧性血迹这类DNA发生降解含有大量抑制物的检材。M48磁珠提取法是利用细胞裂解液促使细胞膜、核膜破裂，并使与DNA结合的蛋白质变性，DNA游离释放，它是以磁珠为载体，通过磁珠吸附DNA，而杂质不被吸附，然后利用磁力架聚集磁珠，通过洗涤去除杂质，从而得到纯度和浓度很高的DNA。而Chelex-100是一种化学整合树脂，由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成，含有成对的亚氨基二乙酸盐离子来整合多价金属离子。它不能有效去除杂质及降解的 DNA片段；无细胞裂解液裂解细胞，只是利用温度变化和PK促使细胞核膜破裂释放DNA，这就使DNA含量和纯度受到一定影响。

综上所述，对于陈旧性血迹在使用常规的Chelex-100法效果欠佳的情况下，可考虑采用M48磁珠提取法进行复检，以最大可能获得完整的STR分型图谱。