钇增敏氧氟沙星荧光的研究及分析应用

徐丽芳， 陶建伟， 沈文婧

（上海应用技术学院化学与环境工程学院，上海 201418）

钇增敏氧氟沙星荧光的研究及分析应用

徐丽芳， 陶建伟， 沈文婧

（上海应用技术学院化学与环境工程学院，上海 201418）

研究了在p H为6.7的醋酸-醋酸钠介质中，钇（Ⅲ）与氧氟沙星形成的配合物的荧光特性，并建立了测定氧氟沙星的荧光光度新方法.结果表明：在常温下，激发狭缝为10 nm，发射狭缝为5 nm，荧光激发波长为292.0 nm，发射波长为470.9 nm处，钇（Ⅲ）与氧氟沙星形成的二元配合物有灵敏的荧光发射峰；氧氟沙星在6.0×10-2～1.0μmol／L范围内与体系的荧光强度呈良好的线性关系，相关系数为0.999 3，该方法的检出限为1.6 nmol／L.本方法操作简单、灵敏度高，用于氧氟沙星片剂的分析，结果令人满意.

氧氟沙星；钇；荧光光度法；荧光强度

氧氟沙星（Ofloxacin）又名氟嗪酸（结构式见图1），是第三代氟喹诺酮类药物，具有抗菌谱广和抗菌活性强的特点，在临床上主要用于尿路感染、肠管感染、呼吸道感染、肺炎、耳鼻咽喉感染、皮肤软组织感染、胆管感染、妇科感染、前列腺炎以及伤寒等治疗.分析氧氟沙星的常用方法有高效液相色谱法［1-3］、紫外可见分光光度法［4-6］，也有电位滴定法［7］和化学发光法［8］.其中，紫外可见分光光度法虽然仪器价廉、操作简便，但其溶液的吸光度易受溶剂极性、溶液p H和温度等因素的影响；电位滴定法对电极稳定性要求较高；高效液相色谱法虽然选择性较好、准确性高，但其流动相通常是有毒溶剂，不利于环保.从利用荧光性质测定氧氟沙星的文献报道［9-11］可知，荧光分光光度法大多在水溶剂中进行，且其灵敏度高、稳定性好.本文研究了钇离子与氧氟沙星形成的二元配合物的荧光性质，建立了一个测定氧氟沙星含量的新方法，本方法灵敏度高、无毒、简便、快速.

图1 氧氟沙星结构式Fig.1 Structure of ofloxacin

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Cary Eclipse荧光分光光度仪（美国瓦里安）；PHS-3D型p H计（上海三信仪表厂）；Waters高效液相色谱仪（515泵、2487UV检测器）；M2P微量分析天平（德国赛多利斯）.

氧氟沙星标准溶液（对照品由中国药品生物制品鉴定所提供）：准确称取一定量氧氟沙星对照品，配制为2.0 mmol／L的储备液；0.01 mol／L钇（Ⅲ）储备液：准确称取一定量优级纯氧化钇于小烧杯中，加入适量2 mol／L盐酸，在通风橱内加热使之溶解完全，蒸发至近干，冷却后将溶液全部移入100 m L容量瓶内，用去离子水稀释至刻度，摇匀，临用时用去离子水稀释至所需浓度；p H为6.7的醋酸-醋酸钠溶液；盐酸左氧氟沙星片（山东罗欣药业股份有限公司，0.1 g／粒，批号：090106）；盐酸左氧氟沙星片（上海天赐福生物工程有限公司，0.1 g／粒，批号：081101）；实验用水均为去离子水.

1.2 方法

在10 m L具塞比色管中加入一定量氧氟沙星溶液，2 mmol／L钇（Ⅲ）溶液1.0 m L、p H为6.7的醋酸-醋酸钠溶液1.0 m L，并用去离子水稀释至刻度，摇匀，放置15 min.在室温下，用1 cm石英比色皿，设置激发狭缝为10 nm，发射狭缝为5 nm，于激发波长为292.0 nm、发射波长为470.9 nm处，以含钇（Ⅲ）溶液的试剂参比，用分光光度计测定钇（Ⅲ）和氧氟沙星二元配合物的荧光强度.

2 结果与讨论

2.1 荧光光谱的条件选择

2.1.1 荧光体系的选择

按实验方法配制钇（Ⅲ）和氧氟沙星二元配合物体系，对体系进行激发波长和荧光波长的扫描.另取2支10 m L具塞比色管，1支只加1 mmol／L钇（Ⅲ）工作液，另1支只加氧氟沙星标准溶液，并进行激发波长和荧光波长的扫描.3个体系扫描所得荧光激发和发射光谱如图2所示.

图2 荧光激发和发射光谱Fig.2 Fluorescence excitation and emission spectra

由图2可知，钇（Ⅲ）在470.9 nm处无荧光发射，而钇（Ⅲ）与氧氟沙星组成的二元配合物与氧氟沙星单体在292.0 nm激发波长和470.9 nm发射波长处的峰型及其出峰位置基本相符，且二元配合物的荧光强度明显高于氧氟沙星单体.可见钇对氧氟沙星荧光有明显的增敏作用.发光机理可能是由于氧氟沙星上的羰基和羧酸基团与Y3+结合形成一个六圆环，使配合物的平面结构更加稳定，提高了体系的荧光强度.配合物结构推测如图3所示.

图3 配合物结构Fig.3 Structure of complex

2.1.2 激发狭缝和荧光发射狭缝的选择

通过对激发狭缝和荧光发射狭缝的宽度选择试验得到，当激发狭缝为10 nm、发射狭缝为5 nm时，钇（Ⅲ）和氧氟沙星二元体系的荧光强度最大.

2.2 不同p H值醋酸-醋酸钠对荧光强度的影响

按试验方法配制二元配合物，仅改变醋酸-醋酸钠介质的p H值.测定二元配合物荧光强度，p H值与荧光强度关系曲线如图4所示.由图可知，醋酸-醋酸钠溶液p H值为6.4～7.0时，二元配合物的荧光强度基本保持不变.

图4 p H值对荧光强度的影响Fig.4 Effect of p H on fluorescence intensity

取p H值为6.7的醋酸-醋酸钠进行用量试验，得缓冲溶液用量为1.0 m L时最佳，如图5所示.

图5 缓冲溶液用量对荧光强度的影响Fig.5 Effect of the concentration of buffer solution on fluorescence intensity

2.3 钇（Ⅲ）用量的影响

钇（Ⅲ）离子浓度对体系荧光强度的影响如图6所示.由图可见，当钇（Ⅲ）的物质的量为2 mmol／L，用量在0.80～2.00 m L范围内，钇（Ⅲ）与氧氟沙星的配合物荧光强度稳定.取2 mmol／L的钇（Ⅲ）溶液1 m L.

2.4 反应时间和温度的影响

每隔一定时间测定钇（Ⅲ）与氧氟沙星配合物体系的荧光强度.结果显示，当配合物形成10 min后，反应达到平衡，荧光强度稳定，室温下可稳定6 h.本试验在反应15 min后测定荧光强度，结果如图7所示.

图6 钇（Ⅲ）用量对荧光强度的影响Fig.6 Effect of the concentration of buffer solution on fluorescence intensity

图7 反应时间对荧光强度的影响Fig.7 Effect of reaction time on fluorescence intensity

考察了钇（Ⅲ）与氧氟沙星配合物在20、30、40、50、60°C恒温15 min的荧光强度，如图8所示.结果显示，在室温（20°C）时，钇（Ⅲ）与氧氟沙星配合物的荧光强度明显好于体系在30、40、50、60°C水浴加热后的荧光强度.可见二元配合物的稳定性随着温度的升高而下降.反应的温度取室温.

图8 反应温度对荧光强度的影响Fig.8 Effect of reaction temperature on fluorescence intensity

2.5 工作曲线、线性范围和检出限的测定

在上述最优条件下，改变氧氟沙星的浓度，得本文方法的线性回归方程为F=7.704×108c-1.072，r=0.999 3.氧氟沙星的线性范围为6.0× 10-2～1.0μmol／L.以3.3倍信噪比计算，测得本方法的检测限为1.6 nmol／L.

2.6 样品分析

2.6.1 样品的处理

随机取不同批号盐酸左氧氟沙星片剂10粒，准确称取其总质量，研细混匀，然后准确称取总质量的1／50，倒入100 m L容量瓶，加入适量去离子水及数滴0.5%NaOH溶液，超声仪处理3 min后，用去离子水稀释至刻度并摇匀.如有沉淀则用干燥中速滤纸过滤，滤液的前4～5 m L弃去，剩余滤液用干燥的容量瓶保存，作为储备液.测定时根据标准曲线的线性范围取一定量稀释.

2.6.2 样品的测定

取样品测定液，分别以本法和药典法［12］进行测定，结果如表1所示.查统计表得到在置信度为95%的情况下，t=2.57，F=5.05，由表1样品测定结果可见，2个样品的t和F检验值均小于该临界值，说明本法与药典法无显著差别.

表1 样品的测定结果（n=6）Tab.1 Determination results of samples（n=6）

2.6.3 样品的测定及回收率试验

对盐酸左氧氟沙星片剂进行重复6次的加标法回收率试验，表明用本方法所得回收率为97.3%～106.5%，平均回收率为102.3%和103.4%，相对标准偏差为4.5%和2.2%.

3 结 语

本文建立了在常温、水溶液中用荧光分光光度法测定氧氟沙星含量的新方法.本方法操作简单、灵敏度高、稳定性好，为测定微量乃至痕量氧氟沙星提供了一个新的途径.

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［4］ 胡卫平，王鑫，董学芝，等.刚果红-孔雀石绿-左氧氟沙星分光光度法测定左氧氟沙星的含量［J］.分析科学学报，2012，28（2）：257-260.

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［6］ 陈国平，汪月红.分光光度法测定注射液中的左氧氟沙星［J］.黄山学院学报，2008，10（5）：34-36.

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［12］ 国家药典委员会.中华人民共和国药典（二部）［M］.北京：化学工业出版社，2005.

（编辑 吕丹）

Research and Application of Yttrium Sensitized Fluorescence Spectroscopy of Ofloxacin

XU Lifang， TAO Jianwei， SHEN Wenjing
（School of Chemical and Environmental Engineering，Shanghai Institute of Technology，Shanghai 201418，China）

The fluorescence characteristics formed by yttrium（Ⅲ）and ofloxacin complexes were investigated with acetic acida-sodium acetic acid buffer solution（p H=6.7）.The results showed that the ofloxacin binary complexes fluorescence had a sensitive fluorescence emission peak when excitation wavelength 292.0 nm and emission wavelength 470.9 nm，the excitation slit 10 nm and emission slit 5 nm at normal temperature.The linear range of the complex system was 6.0×10-2to 1.0μmol／L and the correlation coefficient was 0.999 3.The detection limit was 1.6 nmol／L.The method is easy to operate，with high sensitivity，and is proved to be satisfactory for its application into the determination of ofloxacin drug in tablets.

ofloxacin；yttrium；fluorescence spectroscopy；fluorescence intensity

O 657.3

A

1671-7333（2015）04-0333-04

10.3969／j.issn.1671-7333.2015.04.004

2015-03-31

徐丽芳（1961-），女，讲师，主要研究方向为分析化学.E-mail：xulifang＠sit.edu.cn

陶建伟（1976-），男，工程师，主要研究方向为分析化学.E-mail：tjw＠sit.edu.cn