Ki67在HBV相关肝细胞癌病理组织中的表达及其临床意义

2015-11-17张彦陆伟

天津医药 2015年8期

张彦，陆伟

张彦1，陆伟2△

目的探讨细胞核增殖抗原Ki67在乙型肝炎病毒（HBV）相关肝细胞癌（HCC）病理组织中的表达及其与临床病理指标的关联性。方法134例HBV相关HCC患者按Ki67阳性细胞所占百分数（Ki67指数）分为Ki67指数＜10%（阴性）组30例和≥10%（阳性）组104例。采用免疫组化法检测Ki67在正常及不同分化程度肝组织中的表达情况。分别计算2组Ki67指数与年龄、性别、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、组织学分级、BCLC分期、门脉转移、甲胎蛋白（AFP）、肝功能Child-pugh分级资料的相关性。依Ki67指数区间设定评分以评估Ki67评分与BCLC分级的关系。结果（1）SP染色结果显示，Ki67在正常肝组织、高分化、中分化及低分化组织中的表达强度呈增加趋势。（2）阳性组Ki67指数与BCLC分期、门脉转移、组织学分级、GPC3、AFP及Child-pugh分级呈正相关（P＜0.05）；阴性组Ki67指数与各临床指标均无相关性（P＞0.05）。（3）Ki67评分随着BCLC分级的进展呈增加趋势。结论阳性组Ki67指数联合患者的GPC3、组织学分级、BCLC分期、门脉转移、AFP、肝功能Child-pugh分级可评估患者HCC的严重程度，其表达水平有望成为HBV相关HCC早期诊断、晚期预后评估的重要指标。

肝肿瘤；肝炎，乙型，慢性；诊断；预后；早期诊断；Ki67

研究认为，乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）感染是原发性肝癌（hepatocellular carcinoma，HCC）发生的重要危险因素，而细胞核增殖抗原Ki67是一种与细胞增生相关的标志物，在细胞周期的G1、S和G2期达到高峰，而在G0期缺失，在许多肿瘤中高表达［1］。Ki67标志物的变化能可靠地反映正常和病变组织的增殖活性，对肿瘤的复发和转移有预测作用［2］。本研究旨在通过对HBV相关HCC患者癌组织的临床病理资料进行分析，探讨Ki67与其他临床病理指标的关联性和临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料选择2011年6月—2013年6月于天津市第二人民医院明确诊断为HBV相关HCC的患者134例。所有诊断均符合中华人民共和国2010年慢性乙型肝炎防治指南及2011年版原发性肝癌诊疗规范的诊断标准。排除肝胆管细胞癌、术前行经导管动脉化学栓塞（TACE）手术、病历或检查资料不全、因肿瘤位置问题无法留肝脏病理者。

1.2 免疫组织化学检测所有肝组织穿刺标本均经4%甲醛固定＞6 h，经脱水、石蜡包埋，常规切片，片厚4µm。采用免疫组化SP法染色，DAB显色。鼠抗人Ki67单克隆抗体，采用ABC法、DAB显色，苏木精复染。常规光镜检测Ki67的表达情况。以细胞核出现棕黄色颗粒为阳性，随机读取10个高倍镜视野，共计数1 000个细胞，以Ki67阳性细胞所占百分数计作Ki67指数，以评估Ki67的表达水平。阳性细胞数＜10%设定为阴性组，≥10%为阳性组。2组年龄、性别、巴塞罗那（BCLC）分期、门脉转移、组织学分级、磷脂酰肌醇蛋白3（GPC3）、甲胎蛋白（AFP）及肝功能Child-pugh分级差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

Tab.1Comparison of basic information between patient in both groups表1 2组患者基本资料比较

1.3 研究指标（1）Ki67在正常肝组织及不同组织学分级的HBV相关HCC组织中的形态学表达情况。（2）研究2组与年龄、性别、BCLC分期、门脉转移、组织学分级、GPC3、AFP、肝功能Child-pugh分级的相关性。（3）将Ki67指数＜10%为1分、10%～25%为2分、26%～50%为3分、＞50%为4分。评估Ki67在HBV相关HCC中随BCLC分级的变化情况。

1.4 统计学方法采用SPSS 17.0软件进行统计学分析。符合正态分布的计量资料以表示。计数资料组间比较采用卡方（χ2）检验。相关性采用Spearman等级相关分析，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 Ki67在正常肝组织及不同组织学分级癌组织中的表达随着患者组织学分级的进展，患者的Ki67表达强度呈增加趋势，见图1。

2.2 Ki67指数与临床病理特征的关系阳性组Ki67指数与BCLC分期、门脉转移、组织学分级、GPC3、AFP及Child-pugh分级呈正相关（P＜0.05）；阴性组Ki67指数与各临床指标均无相关性（P＞0.05），见表2。

Tab.2Relationship between Ki67 index and clinicopathological factors in HBV related HCC表2 Ki67指数与临床病理参数的关系

＊P＜0.05

阳性组临床指标年龄（岁）≤60＞60性别阴性组n1Ki67指数（%）rsn2Ki67指数（%）rs48 56 35.89±23.18 35.90±26.66-0.02924 6 6.43±2.14 6.13±2.900.749男女84 20 36.13±25.23 34.92±23.070.01824 6 5.92±2.65 7.67±1.370.132 BCLC分期A B 20 48 40 16 30.94±23.70 39.39±23.72 44.70±28.53 0.418＊0.150 C+D门脉转移6.20±2.59 7.67±1.37 4.50±2.89无有90 14 33.73±23.83 51.88±26.390.576＊6 4 2 6.21±2.62 7.00±0.000.679组织学分级高中低14 76 14 29.08±26.74 36.35±23.23 42.67±29.59 8 2 1 0 0.529＊16 4 6.40±1.43 5.62±3.05 8.50±0.58 0.123 GPC3阳性阴性AFP阳性阴性Child-pugh分级A非A 74 30 38.23±26.08 30.40±20.500.383＊20 10 6.00±2.83 6.80±1.810.424 72 32 39.46±26.64 25.41±13.360.370＊16 14 6.10±2.92 6.60±1.580.619 80 24 36.82±25.29 32.94±23.060.289＊22 8 6.64±2.06 5.25±3.500.189

2.3 Ki67评分与BCLC分期的关系134例患者的BCLC A、B、C+D的Ki67评分分别为（2.50±1.00）、（7.64±1.12）及（44.44±21.2）分，随着BCLC分级的进展，其Ki67评分也呈增加趋势。

3 讨论

Ki67是一种存在于增殖细胞核基质内、与细胞增殖相关的核蛋白，能反映肿瘤细胞的增殖活性，是判断肿瘤侵袭力和肿瘤预后的有效指标［3］。Ki67的检测已被广泛用于反映肿瘤细胞增殖速度和预测肿瘤预后［4］。Ki67指数高往往反映肿瘤的侵袭性更强、无瘤生存率低、复发率高［5］。

本研究结果显示，Ki67的染色强度随着患者组织学分级的进展呈增加趋势，证实了Ki67的嗜肿瘤性，提示随着Ki67指数表达程度的增强，疾病的恶性程度增高，肿瘤进展速度增快，预后变差。

本研究显示，Ki67指数与肝癌的组织分级呈正相关，Ki67在高分化肝癌组织中的表达强度低于低分化肝癌组织，表明肝癌组织的分化程度越低则其增殖活性越强，恶性程度越高，疾病的预后情况越差。孙宇等［6］对胰腺癌的研究中亦认为，Ki67的表达强度与胰腺癌TNM分期、淋巴结转移及肿瘤分化程度相关。王宝娜等［7］研究显示，乳腺癌的组织学分级与Ki67指数呈正相关性，提示Ki67指数可作为判断组织学分级的指标。

Ki67指数阳性组的表达情况与患者的BCLC分期、组织学分级均相关，表明患者行手术或消融治疗前的临床情况与患者术中病理结果对患者疾病的进展及预后的评估具有一致性，这与罗旻等［8］的研究结果不尽相同，考虑原因为本研究选取的研究对象均为HBV相关HCC患者，而罗旻等研究的48例中HBV相关HCC患者为34例。何泽宝等［9］研究显示，HCC患者AFP升高与HBV感染关系密切。常家聪等［10］研究显示，HCC患者AFP的产生与HBV感染直接相关。本研究亦显示，阳性组AFP水平与患者Ki67指数呈正相关，而阴性组AFP水平与Ki67指数无相关性，结合上述文献，笔者认为10%作为分界点对HBV相关HCC患者的恶性程度评估和预后评判具有一定临床参考价值。

BCLC分期是对肿瘤状态及肝功能状态的综合评价，相较于之前的TNM分期其优势在于：BCLC分期的同时即确定了临床治疗方案，并且涵盖了早中晚期，弥补了TNM分期系统只适用于晚期HCC的不足。故本研究把所有HBV相关HCC患者按BCLC分期标准分为A、B、C+D 3组，把Ki67指数划分为4个评分，可以看出随BCLC分期进展，其Ki67评分明显增加，且Ki67指数随HCC组织学分级亦呈增加趋势，均提示着疾病预后不良。此与肝癌的组织学分级及门脉转移情况结论一致。

综上所述，综合评价HBV相关HCC患者的肝功能Child-pugh分级、BCLC分期、门脉转移情况、AFP水平，结合其治疗时取的肝癌病理组织中GPC3水平、组织学分级及Ki67指数，可评价其目前肿瘤的恶性程度并预测其肿瘤的发展速度及预后，对于Ki67指数明显增高的患者应进行更为密切的监测和更为积极的治疗，以期延长患者的生存时间。

（图1见插页）

［1］Weigel MT，Dowsett M.Current and emerging biomarkers in breast cancer.Prognosis and prediction［J］.Endocr Relat Cancer，2010，17（4）：R245-262.

［2］Swarts DR，Ramaekers FC，Speel EJ，et al.Molecular and cellular biology of neuroendocrine lung tumors：Evidence for separate biolog⁃ical entities［J］.B iochim Biophys Acta，2012，1826（12）：255-271.

［3］Hejna M，Raderer M，Zielinski CC.Inhibition of metastases by anti⁃coagulants［J］.J Natl Cancer Inst，1999，91（1）：22-36.

［4］Potemski P，Pluciennik E，Bednarek AK，et al.Ki-67 expression in operable breast cancer：a comparative study of immunostaining and a real-time RT-PCR assay［J］.Pathol Res Pract，2006，202（7）：491-495.

［5］Singhal A，Jayaraman M，Dhanasekaran DN，et al.Molecular and serum markers in hepatocellular carcinoma：predictive tools for prognosis and recurrence［J］.Crit Rev Oncol Hematol，2012，82（2）：116-140.

［6］Sun Y，Sun N，Yang SS，et al.Relationship between expression of MMP-9 and Ki67 in pancreatic Cancer［J］.Tianjin Med J，2014，42（1）：44-46.［孙宇，孙宁，杨绍时，等.MMP-9和Ki67在胰腺癌中表达的意义［J］.天津医药，2014，42（1）：44-46］.doi：10.3969/j. issn.0253-9896.2014.01.014.

［7］Wang BN，Wang X，Wang J，et al.Expression of Ki67 and clinico⁃pathological features in breast cancer［J］.Chin J Oncol，2014，36（4）：273-275.［王宝娜，王翔，王靖，等.Ki67在乳腺癌中的表达及临床意义［J］.中华肿瘤杂志，2014，36（4）：273-275］.doi：10.3760/ cma.j.issn.0253-3766.2014.04.007.

［8］Luo M，Cao Y，Wen AZ，et al.Expression of Ki-67 antigen in hu⁃man hepatocellular carcinoma［J］.Modern Oncology，2013，21（12）：2759-2761.［罗旻，曹颖，文安智，等.Ki-67在人肝癌组织中的表达特点［J］.现代肿瘤医学，2013，21（12）：2759-2761］.doi：10.3969/j.issn.1672-4992.2013.12.39.

［9］He ZB，Zhu JS，Cai XX，et al.The relationship between AFP and HBV［J］.Chin J Infect Dis，2001，19（3）：176-177.［何泽宝，朱坚胜，蔡修熙，等.甲胎蛋白与肝炎病毒关系研究［J］.中华传染病杂志，2001，19（3）：176-177］.doi：10.3760/j.issn.1000-6680.2001.03.016.

［10］Chang JC，Liu G，Song HP，et al.The study of HBsAg and AFP in hepatocellular carcinoma［J］.Chinese Journal of General Surgery，1996，5：11-12.［常家聪，刘戈，宋海屏，等.肝细胞癌组织中HB⁃sAg，AFP的研究［J］.中国普通外科杂志，1996，5：11-12］.doi：10.3978/j.issn.1005-6947.1996.05.014.

（2014-12-02收稿2015-01-06修回）

（本文编辑陆荣展）

Expression of Ki67 and its clinic significance in HBV related hepatocellular carcinoma

ZHANG Yan1，LU Wei2△
1 Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；2 The Second People′s Hospital△

ObjectiveTo investigate the expression of proliferating cell nuclear antigen（Ki67）in hepatitis B virus（HBV）related hepatocellular carcinoma（HCC）tissue and its correlation with clinicopathological parameters of HBV related HCC.MethodsHBV-related HCC patients（n=134）were divided according to Ki67 index（the percentage of Ki67-posi⁃tive cells）into Ki67 index＜10%group（negative group，n=30）and Ki67 index≥10%group（positive group，n=104）.The cor⁃relation of Ki67 index with age，gender，glypican 3（GPC3），histological grade，BCLC（Barcelona Clinic liver cancer）staging，portal involvement，AFP（AFP），liver function related child-pugh classification data were calculated in both groups.Ki67 in⁃dex is set according to the interval score to assess the relationship between Ki67 score and BCLC classification.Results（1）SP staining showed，Ki67 present a trend of increase from normal liver tissue to well-differentiated to medium differentiat⁃ed tissue to poorly differentiated tissues intensity.（2）In positive group，Ki67 index was correlated with BCLC staging，portal metastasis，histological grade，GPC3 and AFP（P＜0.05）；By contrast，in negative group，Ki67 index was not correlated with any clinical parameter（P＞0.05）.（3）Ki67 score increases with the progress of BCLC classification.ConclusionIn Ki67 positive group，Ki67 index combined with GPC3，histological grade，BCLC staging，portal involvement，AFP and liver func⁃tion child-pugh classification can assess the severity of the patients with HCC，which is expected to become an important in⁃dicator for the HBV-related HCC early diagnosis.

liver neoplasms；hepatitis B，chronic；diagnosis；prognosis；early diagnosis；Ki67

R735.7

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.08.027

1天津医科大学研究生院（邮编300070）；2天津市第二人民医院

张彦（1983），女，住院医师，学士学位，主要从事肝炎后肝硬化、肝癌诊断及治疗的研究

△通讯作者E-mail：luwei1966@126.com