高原脐贴软膏对家兔皮肤急性毒性和刺激性的实验研究*

江晓霁 方勇飞 冯晓枫 潘柏良 流 沙 陈筱珺 王 恒 刘晓飞

（1.解放军第三二四医院，重庆 400020；2.第三军医大学西南医院，重庆 400038；3.重庆市中医院，重庆 400021）

高原脐贴软膏对家兔皮肤急性毒性和刺激性的实验研究*

江晓霁1，2方勇飞2△冯晓枫1潘柏良3流 沙1陈筱珺1王 恒2刘晓飞2

（1.解放军第三二四医院，重庆 400020；2.第三军医大学西南医院，重庆 400038；3.重庆市中医院，重庆 400021）

目的 观察高原脐贴软膏对家兔皮肤是否有急性毒性及刺激性。方法 将16只家兔随机分为4组，即完整皮肤实验组、完整皮肤对照组、破损皮肤实验组和破损皮肤对照组。在脱毛及破损皮肤造模24 h后，分别予试验组和对照组家兔高原脐贴软膏和空白基质软膏。给药24 h后，连续观察14 d并称量家兔体质量。家兔12只，随机分为完整皮肤组和破损皮肤组。家兔背部两侧分别给予高原脐贴软膏和空白基质软膏，连续观察72 h有无局部皮肤刺激反应。结果 试验家兔无急性中毒表现，试验组与对照组家兔体质量无明显差异（P＞0.05）。家兔接触高原脐贴软膏后皮肤刺激分值为0，无皮肤刺激性。结论 高原脐贴软膏经皮给药对家兔无急性毒性，对家兔皮肤无刺激性，是一种安全性较好的外用制剂。

高原脐贴软膏 皮肤急性毒性 皮肤刺激性

近年来，进入高原工作生活或旅游的人越来越多，而急性高原反应（AMS）是人们进入高原的重要障碍，其发病率可达50%至65%［1］。针对AMS，笔者在经方小柴胡汤的基础上进行加减，研制出了高原脐贴软膏，其药物组成为柴胡、党参、半夏、生姜、肉桂、胡椒、冰片、乳香、没药。笔者通过到高原实地进行随机对照试验，初步证实高原脐贴软膏贴脐对AMS有明显的预防效果［2］。现将前期高原脐贴软膏对家兔皮肤急性毒性和刺激性的实验研究结果进行报道，以说明其临床实验前安全性研究结果。

1 材料与方法

1.1 实验动物 健康成年新西兰兔，雌雄各半，体质量（2.0±0.5）kg，毛色纯白。购自第三军医大学附属大坪医院野战外科研究所实验动物中心，分笼饲养于第三军医大学附属西南医院中心实验室动物平台，室温20℃左右，相对湿度57%，饲养过程中自由进食和饮水。

1.2 药物与试剂 高原脐贴软膏每支20 g，生产批号120401；安慰剂软膏为不含药物成分的膏药基质材料，每支20 g，生产批号120402，均由重庆市中医院药剂科生产。医用消毒酒精，500mL/瓶，由第三军医大学药剂科生产。

1.3 实验仪器 体重计；科德士牌电推剪；医用无菌刀片；医用棉签、软尺等。

1.4 家兔皮肤急性毒性试验 1）试验方法。将16只家兔按体质量由低到高编号，然后用随机数字表法将其分为4组，即完整皮肤实验组、完整皮肤对照组、破损皮肤实验组和破损皮肤对照组，每组4只。在给药前24 h，用电推剪在所有实验兔背部脱毛，脱毛面积约150 cm2，然后进行破损皮肤造模，将破损皮肤实验组和破损皮肤对照组8只实验兔背部脱毛区用75%酒精消毒，然后用无菌刀片在脱毛区划“井”字，以渗血为度。脱毛造模24 h后，在完整皮肤实验组和破损皮肤实验组8只实验兔背部脱毛区均匀涂抹高原脐贴软膏5 g。在完整皮肤对照组和破损皮肤对照组8只实验兔背部脱毛区均匀涂抹空白基质软膏5 g。给药24 h后，用温水洗净所有实验兔背部脱毛区残余药物。洗脱药物后即开始观察，连续14 d，每日2次。2）观察指标。依据药物毒理研究方法［3］，拟定《实验动物观察指征表》进行观察。表内项目包括实验兔皮肤、毛发、饮食、二便、呼吸、眼和黏膜的变化、精神状态、四肢活动及死亡情况。如遇死亡，及时进行尸检和肉眼观察，有肉眼可见病变时，进行病理组织学检查。给药后7 d、14 d称量体质量。

1.5 家兔皮肤刺激性试验 1）试验方法。将12只新西兰兔用随机数字表法分为完整皮肤组和破损皮肤组，各6只。在给药前24 h，用电推剪在所有实验兔背部脊柱两侧脱毛，脱毛面积左右各3 cm×3 cm。将破损皮肤组6只实验兔背部脱毛区用75%酒精消毒，然后用无菌刀片在脱毛区划“井”字，以渗血为度。给药采用左右侧自身对照。脱毛及破损皮肤造模24 h后，两组12只实验兔均在背部左侧脱毛区均匀涂抹高原脐贴软膏1.5 g；在右侧脱毛区均匀涂抹空白基质软膏1.5 g。给药24 h后，用温水洗净所有实验兔背部脱毛区残余药物。洗脱药物后1、24、48、72h，连续肉眼观察实验兔脱毛区皮肤有无红斑及水肿。2）评价标准。依据药物毒理学标准［3］，用《皮肤刺激反应评分标准》进行评分，并以公式“刺激平均分值=（红斑形成总分+水肿形成总分）/动物总数”计算刺激平均分，按照《皮肤刺激强度评价标准》确定高原脐贴软膏皮肤刺激性。

1.6 统计学处理 应用SPSS18.0统计软件。实验兔体质量以（±s）表示，组间比较采用独立样本t检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 家兔皮肤急性毒性实验 见表1。4组实验兔皮肤、毛发、饮食、二便、呼吸、眼和黏膜、精神状态、四肢活动均正常，实验期内无死亡。给药后7、14 d称量体质量，完整皮肤实验组和完整皮肤对照组，破损皮肤实验组和破损皮肤对照组比较，体质量无明显差异（P＞0.05）。

表1 各组实验兔给药前后体质量比较（kg，±s）

表1 各组实验兔给药前后体质量比较（kg，±s）

组别 n 给药后14 d给药前 给药后7 d完整皮肤实验组 4 2.36±0.13完整皮肤对照组 4 2.36±0.22破损皮肤实验组 4 2.46±0.12 1.92±0.15 2.15±0.17 1.92±0.09 2.22±0.19 1.90±0.15 2.21±0.14破损皮肤对照组 4 2.44±0.17 1.97±0.25 2.24±0.22

2.2 家兔皮肤刺激性实验 完整皮肤组和破损皮肤组12只实验兔在药物去除1、24、48、72 h后均无皮肤红斑、水肿（如图1，图2），皮肤刺激分值为0，皮肤刺激强度评价为无刺激性。见表2。

图1 洗脱药物1 h后实验兔皮肤

图2 洗脱药物72 h后实验兔皮肤

表2 各组实验兔皮肤刺激性试验结果比较（分）

3 讨 论

人体进入高原后，高原缺氧可以引起消化分泌功能障碍和胃肠运动异常，并导致胃肠黏膜损伤，直接影响机体营养吸收和能量供给，使发生AMS的危险性增高［4］。同时，胃肠黏膜损伤也会影响口服药物的吸收，影响疗效。目前，经皮给药系统由于可以避免胃肠道吸收困难、避免首过效应、延长单次给药疗效、减少给药次数以及减少毒副作用等优点，已成为现代药剂研究的热点之一［5］。由此，笔者考虑改变给药途径，由口服给药改为经皮给药。研究发现［6］，药物经脐部给药的生物利用度是前臂给药的1～6倍。这与中医的脐疗法不谋而合。研究证实［7］，中药贴脐可以有效改善血氧分压、呼吸频率、心率等指标。

因此，笔者开发高原脐贴软膏以中药外敷的方式防治AMS。高原脐贴软膏是重点针对AMS胃肠道症状研制的以小柴胡汤化裁而成的纯中药制剂。小柴胡汤能提高人体血浆胃动素水平，降低血管活性肠肽的表达，进而促进胃部平滑肌收缩，改善胃肠道功能［8］。现代药理研究表明，柴胡可以解热、镇痛、镇静、抗炎、抗病毒和调节免疫［9］，党参具有抗缺氧、耐疲劳、增强免疫力、调节胃收缩及保护胃黏膜的作用［10］。两味主药合用，既可以增强自身免疫力，又具有抗炎、抗病毒的功效，共同起到预防作用。

高原脐贴软膏研制完成后，需要先观察其外用的安全性。在新西兰兔皮肤急性毒性实验中，完整皮肤和破损皮肤的实验兔一次性接触高原脐贴软膏后，均未在短期内出现急性毒性反应，且其体质量和接触基质软膏的实验兔无差别，说明高原脐贴软膏经皮肤给药并无急性毒性反应。而在皮肤刺激性实验中，无论完整皮肤还是破损皮肤组的实验兔在接触高原脐贴软膏后均未出现皮肤红斑或水肿。而兔的皮肤敏感性比人更强，还有可能产生皮肤假阳性反应［11］。因此，本实验结果能够较好说明高原脐贴软膏并无皮肤刺激性。

［1］Hackett P，Roach RC.High-altitude illness［J］.N Engl J Med，2001，345：107-114.

［2］江晓霁，王志中，潘柏良，等.高原脐贴软膏贴脐预防急性高原反应的效果观察［J］.第三军医大学学报，2013，35（3）：251-254.

［3］袁伯俊，廖明阳，李波，等.药物毒理学实验方法与技术［M］.北京：化学工业出版社，2007：212-238.

［4］李素芝，郑必海，闫春城，等.急进高原个体胃肠型高原反应发生情况及其原因［J］.职业与健康，2011，27（4）：427-429.

［5］Samad A，Ullah Z，Alam MI，et al.Transdermal drug delivery system：patent review［J］.Recent Pat Drug Deliv Formul，2009，3（2）：143-152.

［6］田明，周忠光，范越，等.贴脐疗法药剂学研究进展［J］.中医药信息，2008，25（4）：9.

［7］周洵，毕璠.贴脐疗法防治机械通气治疗慢性阻塞性肺疾病急性发作期中胃肠胀气的疗效分析［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18（3）：197-200.

［8］彭智勇，叶小英，刘镇.小柴胡汤对胆汁反流性胃炎患者血浆胃动素、血管活性肠肽表达的影响［J］.中国当代医药，2011，18（8）：99-100.

［9］杨柳，王雪莹，刘畅，等.北柴胡化学成分与药理作用的研究进展［J］.中医药信息，2012，29（3）：143-145.

［10］王洁，邓长泉，石磊，等.党参的现代研究进展［J］.中国医药指南，2011，9（31）：279-281.

［11］李鹏，方剑乔，周亚峰.雷马Ⅱ型贴膏皮肤给药毒性实验研究［J］.浙江中医药大学学报，2011，35（1）：72-78.

Study of Transdermal Drug Delivery of A ltiplano Navel Balm on Acute Toxicity and Irritation in Experimental Rabbits

JIANG Xiaoji1，2，FANG Yongfeng1，FENG Xiaofeng1，et al. 1 No.324 Hospital of PLA，Chongqing 400020，China；2 Southwest Hospital，Third Military Medical University，Chongqing 400038，China

Objective：To observe the acute toxicity and dermal irritation of transdermal drug delivery（TDD）of altiplano navel balm on experimental rabbit.Methods：1）Skin acute toxicity test：16 healthy New Zealand rabbits were randomly divided into 4 groups including the experimental group with integral skin，the control group with integral skin，the experimental group with damaged skin and control group with damaged skin.Altiplano navel balm and placebo balm were applied to the skin of rabbits respectively，and were removed after 24 hours.The observations were continued for 14 days.All rabbits were weighed at 7th day and 14th day.2）Skin irritation test：12 New Zealand rabbits were randomly divided into integral skin group and damaged skin group.Atiplano navel balm and placebo balm were applied to the right or left back skin of those rabbits respectively，and removed after 24 hours.Observations were continued for 72 hours to evaluate skin irritation.Results：None of experimental rabbits was dead and poisoned.There was no significant difference between the weight of experimental groups with those of control groups in 7th day and 14th day（P>0.05）.At 1，24，48，72 hours after removed drug，neither erythema nor edema occurred on the integral skin or damaged skin.Conclusion：Altiplano navel balm is safe.It is nontoxic to apply skin without excitant.

Altiplano navel balm；Acute dermal toxicity；Dermal irritation

R285.5

A

1004-745X（2015）05-0769-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2015.05.006

2015-02-26）

军队中医药科研专项重点课题（2010ZYZ134）

△通信作者（电子邮箱：fangyongfei@qq.com）