羔羊大肠杆菌的药敏试验

李海燕 刘国文 叶和平 河北省丰宁满族自治县农牧局068350

羔羊大肠杆菌的药敏试验

李海燕 刘国文 叶和平 河北省丰宁满族自治县农牧局068350

1　材料

（1）供试菌株的分离鉴定与培养。从丰宁县乐拓牧业公司羊场因腹泻死亡的羔羊中取1只进行试验研究，取肝脏做细菌分离，接种于普通营养琼脂平板，37℃培养24小时，挑取表面光滑、边缘整齐、灰白色、半透明的小菌落，接种于麦康凯琼脂平板，37℃培养24小时，再从麦康凯琼脂平板上挑取孤立的红色菌落。将分离的单个菌落涂片革兰氏染色、镜检，观察到两端钝圆的小杆菌，单个或成对排列，革兰氏染色阴性。将分离的菌株进行生化试验。结果见表1。

表1　生化试验结果

由表1可知，所分离的5个菌株均为羊的大肠杆菌。将分离鉴定后确定为大肠杆菌的菌落无菌接种在营养肉汤中37℃培养24小时，用灭菌生理盐水稀释10倍，备用。

（2）药敏纸片。用6mm打孔器打出滤纸小圆片，160℃干热灭菌1小时后按常规方法分别制备青霉素、链霉素、庆大霉素、环丙沙星和氟本尼考等药敏纸片，备用。

（3）中药。从本地医药公司采购白头翁、苍术、白术、黄芪、茯苓、泽泻、大青叶、苦参、青皮和陈皮。

2　试验方法

（1）制备药液。将上述中药加适量水煎煮30分钟后过滤，水煎2次，将2次过滤的药液合并浓缩成含生药1g/mL的药液备用。

（2）中药药敏试验。采用平皿打洞法将供试药液均匀涂布在琼脂培养基表面，用直径6mm打孔器在琼脂平板上打孔（适当封闭孔底），将制备好的中药供试液分别加入各孔内（满而不溢），贴上标记，置37℃温箱培养24小时。

（3）抗菌药敏试验。将供试菌液均匀涂布于琼脂培养基表面贴上标记，以无菌方法贴上各种药敏实验纸，置37℃恒温箱培养24小时。

（4）抑菌结果的判定。抑菌圈大于15mm以上为高度敏感，10～15mm为中度敏感，小于10mm为低度敏感，没有抑菌圈为无效。

3　试验结果

白头翁对菌株呈高度敏感，黄芪呈中度敏感，其他中药均呈低度敏感，苦参、大青叶对个别菌株无抑菌效果；庆大霉素、环丙沙星呈高度敏感，恩诺沙星中度敏感，氟苯尼考、磺胺嘧啶呈低度敏感，青霉素基本没有抑菌作用。常用的抗生素对不同菌株间的抑菌效果具有一定的差异性，这种菌株差异比中药明显，说明在解决临床耐药菌株方面，中药具有更好的效果，但是中草药的敏感程度不如常用的抗生素药物，需要进一步探讨和研究两者间如何合理有效地配合问题。