抗肿瘤中药金仙胶囊提取工艺研究

赵 英,杨 军,卢永昌，廖志明，张爱军*

（1.青海民族大学药学院，青海西宁810007；2.四川省中医药科学院，四川成都610041）

抗肿瘤中药金仙胶囊提取工艺研究

赵 英1,杨 军2,卢永昌1，廖志明1，张爱军2*

（1.青海民族大学药学院，青海西宁810007；2.四川省中医药科学院，四川成都610041）

目的探讨金仙胶囊的最佳提取工艺。方法利用正交实验的方法，考察溶剂浓度、溶剂量、提取时间、提取次数对抗肿瘤中药金仙胶囊中人参皂苷Rb1提取效果的影响。结果抗肿瘤中药金仙胶囊中人参皂苷Rb1提取最挂工艺为：取处方药材，8倍于药材量的70%乙醇，提取3次，每次1.5 h。结论用该最佳工艺，最终人参皂苷Rb1提取转移率平均可达到90.64%。

工艺研究；正交试验；人参皂苷Rb1

我国由于人口的逐渐老龄化，以及吸烟、感染、污染和不良饮食习惯等问题的存在，肿瘤发生率呈明显上升趋势[1]。肿瘤由于发现时多属中、晚期，手术治疗效果差，放化疗又都有明显不良反应，导致患者生存质量差，生存期短。而以中医药为主的综合治疗对控制患者病情发展，改善生活质量，延长生存期有着重要意义，中医药复方在抗癌中达到近乎和放化疗相当疗效的同时可以增强机体免疫能力，减少人体损害。回顾近年来抗癌方剂的实验研究，总结经验，发现问题，对进一步发现疗效可靠、毒副作用小的抗癌新药颇有必要[2]。金仙胶囊来源于四川省中西医结合医院肿瘤专科的临床经验方。其主要功能主治为消癥解毒，益气活血，化瘀止痛；临床用于肺癌、肝癌、胃癌及其他消化道肿瘤证属血瘀者[3]。人参皂苷 Rb1是人参二醇系皂苷，属于达玛烷型三萜皂苷类化合物，对于主要活性成分Rb1的研究，尤其在中枢神经系统、心血管系统、免疫系统以及抗肿瘤、抗肝脏热缺血再灌注等方面的研究非常广泛[4]。为提高有效成分提取工艺的科学性，以人参皂苷Rb1含量为指标，采用正交试验优选，为生产工艺提供科学依据。

1 仪器与试剂

安捷伦1200高效液相色谱分析仪，十八烷基硅烷键合硅胶柱（北京科益恒达科技有限公司)；RE-52AA型旋转蒸发器(上海亚荣生化仪器厂)；DZF-6050AB型真空干燥箱(郑州博科仪器设备有限公司)；DZKW-4型电子恒温水浴锅(上海一凯仪器设备有限公司)。

西洋参（四川省中药饮片有限责任公司，批号：120524)；西洋参对照药材（中国药品生物制品检定所，批号：120997-200608）；人参皂苷Rb1(中国食品药品检定研究所，批号：110704-201122)。乙腈(色谱级，CAS 75-05-8)；石油醚(60～90℃)，正丁醇,磷酸,甲醇,乙醇等；均为分析纯。

2 提取工艺的研究

经药效学对比实验，处方的乙醇提取物效果较好，故选择乙醇为提取溶剂，并进行提取工艺的相关研究。采用处方药材西洋参中含量较高的人参皂苷Rb1为含量测定指标，进行工艺的考察。

2.1 乙醇浓度对人参皂苷Rb1提取的影响

称取西洋参等药材共62.5 g，加入8倍量的40%的乙醇，200目筛过滤，冷至室温，每次1 h，共3次，合并滤液，量定体积，取滤液定容至10 mL作为供试品，采用HPLC方法测定有效成分人参皂苷Rb1的含量，剩余滤液减压回收干燥。50%，60%，70%，80%的乙醇提取操作同40%乙醇的提取方法。用40%，50%，60%，70%，80%浓度的乙醇提取提取物量分别为8.65，8.71，9.01，8.53，6.24 g。

从上述实验结果可以看出,随着乙醇浓度的增加,人参皂苷Rb1含量也逐渐增加,但当乙醇浓度超过70%以后,人参皂苷Rb1含量随乙醇浓度的增加反而减少。因此,选择甲醇浓度70%为最佳浓度。

2.2 正交实验

以处方药材西洋参中人参皂苷Rb1的含量为考察指标，在考察单因素影响的预试验基础上,选择70%乙醇作为提取溶剂，以主药效物质人参皂苷Rb1的提取总量为考察因素，采用L9（34）正交表进行实验[5-6]，确定最佳工艺。正交实验因素和水平设置见表1。

表1 正交试验因素水平表

取药材处方量62.5 g，并根据正交实验表格进行试验，每个水平都合并提取液并且最终定容至10 mL，其余提取液都浓缩成提取物。进样量均为10 μL，实验结果见表2。

表2 正交试验结果直观分析表

根据实验结果，进行方差分析，见表3。

表3 正交试验方差分析表[7]

由直观分析可知，影响因素主次为：提取次数(C)＞乙醇浓度(B)＞提取时间(A)＞加醇量(D)。从方差分析可知，提取次数(C)与乙醇浓度(B)具有显著性，提取时间(A)与加醇量(D)对人参皂苷Rb1提取没有太大的影响，最终选择A2B3C3D2为最佳工艺，即为使用70%的乙醇为溶剂，加8倍于药材量的乙醇，提取3次，每次提取1.5 h。

2.3 验证试验[8]

为进一步考察优化工艺的可靠性，取3份药材，每份62.5 g，按上述最佳提取工艺A2B3C3进行验证试验，操作方法同上，最终得出人参皂苷Rb1平均总量分别127.0，128.8，127.9 mg，表明在最优条件下人参皂苷Rb1含量高于其他各正交实验值，其RSD为0.59%，说明该方法稳定、可行。

2.4 放大实验

根据筛选的最佳工艺进行放大实验，取处方药材共计312.5 g（即5倍的处方量），按加8倍于药材量的乙醇，提取3次，每次提取1.5 h的工艺路线进行放大实验。

根据实验结果表明人参皂苷Rb1总量为639.80，634.29，642.96 mg，转移率为 90.75%、89.97%、91.20%与正交试验结果相符合，从而可得知此工艺具有重复性和稳定性。即为20140606批供试品。

3 含量测定方法学考察

3.1 色谱条件[9]

以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.1%磷酸溶液流动相A；以乙腈流动相B，按下表4中的规定进行梯度洗脱；检测波长为203 nm；柱温40℃。

表4 梯度洗脱表

3.2 溶液制备

3.2.1 对照品溶液制备

取人参皂苷Rb110.03 mg，加甲醇制得每1 mL含人身皂苷Rb11 mg的溶液。

3.2.2 供试品溶液制备

取20130606批供试品1.498 g，置于圆底烧瓶中，加入水饱和正丁醇50 mL，称定质量，置水浴中加热回流提取1.5 h，放冷，摇匀，滤过。转移续滤液至蒸发皿中，蒸干，残渣加50%的甲醇适量使溶解，转移至10 mL的容量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，过滤，取续滤液，即得。

3.2.3 阴性供试品溶液制备

缺西洋参药材，按最终确定的最优工艺同法制得阴性供试品溶液。

3.3 测定方法考察

吸取供试品溶液、阴性供试品溶液、人参皂苷Rb1对照品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。结果见图1。

图1 样品含量测定方法学考察图谱

结论：由图谱中可见，阴性供试品对人参皂苷的测定基本无干扰。

3.4 线性关系考察

精密吸取对照品溶液0.5，1，3，5，7 μL，按上述色谱条件测定峰面积，测定数据得回归方程：Y=204.61X+0.029 5，R=0.999 9，表明人参皂苷Rb1在0.479 7～7.026 7 μg范围内有良好的线性关系。

3.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液5 μL，重复进样5次，按上述色谱条件测定峰面积并用回归方程测得各组分含量，结果表明RSD为0.17%小于2.0%，证明此条件下精密度高。

3.6 稳定性试验

精密吸取供试品溶液，每隔6 h进样，进样3次，每次10 μL，用回归方程测得各组分含量，结果表明RSD为0.35%小于2.0%，表明供试品溶液在0～12 h内稳定性良好。

3.7 重复性实验

取20140303批样品5份，按上述条件制备并测定求算人参皂苷Rb1含量，用回归方程测得各组分含量，结果表明RSD 0.45%小于2.0%，证明此条件下重复性好。

3.8 加样回收实验

取20140606批供试品（已测定人参皂苷Rb1含量为 14.168 4 mg∕mL）6份，各约0.062 5 g，分别置于100 mL的圆底烧瓶中，分成3组，每组2份，3组添加人参皂苷Rb1对照品溶液量分别为样品中含量的80%，100%，120%（配置人参皂苷Rb1浓度为0.890 1 mg∕mL的对照品）。3组实验最终测定的回收率为97.45%～98.83%，结果表明RSD=0.47%，小于2.0%，证明此条件具有良好的回收率。

4 结论与讨论

提取、纯化工艺：取处方药材，加8倍于药材量的70%乙醇，提取3次，每次1.5 h，滤液用200目筛网过滤，最终合并滤液，抽滤，减压回收乙醇至适量，水浴浓缩至适量，减压干燥得干提取物即得。

实验中，线性、精密度实验对实验仪器的考察都符合正常范围，准确度，重复性，加样回收实验，不仅对仪器，同时也对操作者之间的误差等系统误差及偶然误差都有所考察，都在误差范围内。方法学考察符合标准，成为建立实验方法的可靠依据。

[1]中华医学会呼吸病学会慢性阻塞性肺疾病学组.慢性阻塞性肺疾病诊治指南(2007)年修订版[J].中华结核和呼吸，2007，30(1)：8-17.

[2]王星，王三虎，郭华.中药复方抗癌实验研究进展[J].中国实验方剂学杂志，2005，11(6)：71-73.

[3]张莉，唐大轩，谭正怀.金仙胶囊不同提取工艺的急性毒性及其抗肿瘤作用研究[J].四川中医，2014，32(2)：67-69.

[4]杨秋娅，李晓宇，刘皋林.人参皂苷Rb1的药理作用研究进展[J].中国药学杂志，2013，40(15)：1233-1237.

[5]林沛玉.医药数理统计中正交试验方法研究[J].数理医药学杂志，2011，24(4)：389-394.

[6]韦波，杨瑞云.壮药咳嗽草中总黄酮提取工艺研究[J].广西师范大学学报，2012，30(2):83-87.

[7]史娜.SPSS软件在《概率论与数理统计》课程教学中的应用研究[J].甘肃联合大学学报，2012,26(6)：107-110.

[8]尹文清,冯华芬,段少卿，等.毛冬青叶三萜酸提取纯化研究[J].广西师范大学学报，2012，30（2）：88-93.

[9]中华人民共和国药典委员会.中国药典(2010版一部)[S].北京：化学工业出版社，2010.

Study on Extraction Process of Anti-tumor Medicine Jinxian Capsule

ZHAO Ying1,YANG Jun2,LU Yong-chang1,LIAO Zhi-ming1,ZHANG Ai-jun2*
（1.College of Pharmacy,Qinghai University for Nationalities,Xining Qinghai,810007；2.Sichuan Academy of Chinese Medicine Sciences,Chengdu Sichuan,610041)

ObjectiveTo explore best extraction process of Jinxian capsule.MethodTo study the influence of solvent strength,sol⁃vent quantity,extraction time and times of extraction on ginseng saponin Rb1in anti-tumor medicine Jinxian capsule.ResultThe best extraction process of ginseng saponin Rb1in anti-tumor medicine Jinxian capsule:prescription materials,8 times of 70%ethanol,ex⁃tract three times,each time lasting 1.5 h.ConclusionThe extraction rate of ginseng saponin Rb1can reach 90.64%through this extrac⁃tion process.

technology research;orthogonal test;ginseng saponin Rb1

R94

A

1674-0874(2015)05-0055-04

2015-08-13

赵英（1993-），女，山西运城人，硕士，研究方向：药物分析专业。*张爱军，研究员，通信作者。

〔责任编辑 杨德兵〕