戊二醛繁殖毒性试验研究

许崇辉 谢力 温巧玲 潘芳 刘慧智 李华燕

戊二醛繁殖毒性试验研究

许崇辉 谢力 温巧玲 潘芳 刘慧智 李华燕

（广东出入境检验检疫局 广东广州 510623）

［目的］在完成了戊二醛大鼠急性毒性、遗传毒性、亚慢性毒性试验和致畸试验的基础上，进行大鼠一代繁殖试验，以研究长期接触戊二醛对亲代动物生殖能力及其子代动物生长发育情况的影响。［方法］参考GB 15193.15-2003进行高、中、低3个剂量大鼠一代繁殖试验。［结果］与空白对照组相比，高、中、低3个剂量组出生活仔率较低，存在一定的剂量-效应关系；高剂量组的出生活仔率显著性低于对照组（P＜0.05）；未发现戊二醛对大鼠受孕率、妊娠率、出生存活率和哺乳存活率有明显影响。［结论］戊二醛可能对大鼠妊娠过程有影响，而不影响交配受孕和胎儿生长。

戊二醛；大鼠；繁殖试验

1 前言

在对戊二醛溶液进行了急性毒性试验、遗传毒性试验、局部接触毒性、90天喂养试验和致畸试验等毒理学第一、第二、第三阶段研究的基础上［1-5］，进行戊二醛大鼠繁殖试验，以研究长期、低浓度的戊二醛接触对大鼠亲代生殖能力和子代大鼠生长发育的影响。

2 材料与方法

2.1材料

2.1.1受试物

戊二醛溶液：市售，广东科密欧化学试剂公司产品，批号10160586，分析纯，标称浓度为25%；样本无色、有刺激气味、易溶于水，试验时稀释成不同浓度的溶液使用。

2.1.2试验动物和饲料

试验动物和饲料购自广东省医学实验动物中心。试验动物生产许可证编号：SCXK（粤）2008-0002；试验动物：SD大鼠，♀80只，♂40只；试验初始体重：80.8 g-102.5 g；试验动物合格证号：NO. 4400536558。

2.1.3主要设备、仪器、试剂

SPF级动物房：试验动物使用许可证编号SYXK（粤）2008-0086。

7600生化分析仪及其配套试剂：日立公司；Sysmex 800血球分析仪及其配套试剂：日本西斯美康公司。

2.2方法［6］

2.2.1试验动物饲养方式

试验期间，室温22℃±2℃，相对湿度52%-66%。适应性喂养5d，检疫合格后分组。雌性大鼠随机分为4组，分别为空白对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组，每组20只；雄鼠同样分为相应的4组，每组10只。

非交配期，雌雄分笼喂养，10只/笼；交配期，按雌雄2∶1比例喂养，一般9只/笼。每天定量给予饲料和饮水；每2天换一次垫料；每周称一次动物体重。

2.2.2受试物给予方式和染毒期

根据以前戊二醛毒性试验［4］和致畸试验［5］的结果，设3个剂量组，即高剂量40 mg/kg体重；中剂量10 mg/kg体重；低剂量4 mg/kg体重和空白对照组；戊二醛样品通过饮用水的方式给予试验动物。试验期间，根据试验动物体重变化适当调整饮水量或配制浓度，以达到各组动物的设计剂量；按3次/周配制各组动物的试验用饮水。

染毒期：各剂量组动物按所设剂量染毒7周至性成熟期，并按雌雄2∶1比例交配2周，妊娠期和分娩后直至断乳均继续按所设剂量染毒；断乳后子代大鼠按所设剂量进行染毒约5周。

2.2.3亲代动物交配、受孕动物的确认和分娩

各组动物按雌∶雄=2∶1的比例合笼过夜；次日用阴道涂片方式确认雌性动物受孕后，分笼，继续喂养染毒至分娩。计算各组动物受孕率、妊娠率、出生活仔率及性别比。

2.2.4胎鼠喂养期

各组胎鼠母乳至断乳期，计算各组动物出生存活率和哺乳存活率。

2.2.5子代（F1）动物分组、染毒和喂养

将各组断乳子代大鼠相对应分为4组，即在各剂量组的断乳子鼠中随机选20只，雌雄各半，10只/笼，分别作为子代大鼠的空白对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。

各组子代动物喂养染毒5周至成熟前期。期间，每周称重，每天定量给予饲料和饮水。试验结束时，处死各组动物，作大体解剖，称肝、肾、脾和睾丸/卵巢重量，测量血常规和血清生化指标。

2.2.6数据处理

各组数据分别录入SPSS数据库，计算均数和标准差，以“均值±标准差（X±SD）”的形式表示；方差分析后，对各剂量组与对照组进行分析。

3 结果

3.1亲代、子代大鼠生长发育

3.1.1一般情况

在整个约20周的喂养试验期间（包括亲代大鼠喂养期7周、交配期2周、妊娠期和母乳各约3周、子代动物喂养期5周），各组动物整体生长发育过程正常，未见明显中毒症状和死亡发生。

3.1.2体重增长和食物利用率

亲代试验期间，各组亲代动物的体重情况和总食物利用率见表1；各组子代动物的体重情况和总食物利用率见表2。

表1　试验期间各组动物亲代体重和食物利用率（±SD）（n1=20，n2=10）

表1　试验期间各组动物亲代体重和食物利用率（±SD）（n1=20，n2=10）

体重（g）0 d7 d14 d21 d28 d35 d42 d49 d♀（n1）空白91.69±6.64 110.93±8.03 164.5±10.06 184.08±15.59 206.07±14.11 228.16±15.88 238.39±16.66 259.66±21.43 14.23±3.64低剂量91.50±6.58 109.8±22.48 164.1±12.44 182.26±13.29 204.54±14.23 230.63±22.48 236.43±16.84 260.92±21.87 13.89±3.62中剂量91.45±5.87 112.25±6.66 165.03±10.81 179.45±13.65 197.99±13.90 227.56±15.88 235.70±17.03 261.69±19.48 14.56±4.33高剂量91.80±6.47 116.40±6.80 166.6±11.06 189.95±10.67 205.15±15.47 223.87±15.42 236.65±16.72 258.89±17.28 13.76±2.88♂（n2）空白91.72±5.90 118.85±7.01 168.78±12.32 214.82±16.58 240.08±19.55 254.90±19.34 289.62±21.02 334.22±23.75 14.16±4.98低剂量91.20±7.45 113.10±6.30 171.20±13.77 210.36±14.37 236.20±15.39 253.10±15.44 285.86±18.06 332.15±20.65 14.23±4.87中剂量90.40±7.82113.7±6.64168.4±12.77 206.47±15.17 228.50±18.75 261.50±20.59 289.60±22.37 336.60±24.92 13.67±4.04高剂量90.64±6.55 111.80±9.21 166.5±12.63 212.01±14.67 235.40±14.67 272.50±16.59 297.50±22.48 338.04±23.30 13.80±3.60性别组别食物利用率（%）

表2　试验期间各组动物子代动物体重和食物利用率（±SD）（n=10）

表2　试验期间各组动物子代动物体重和食物利用率（±SD）（n=10）

食物利用率（%）0 d14 d21 d28 d35 d♀（n）空白81.56±4.66139.56±7.07190.50±6.43230.90±9.63288.69±8.3223.76±4.74低剂量84.53±6.34138.30±8.45194.10±7.03234.09±10.56293.20±12.8620.36±3.33中剂量83.26±5.07138.80±8.57193.50±6.98232.79±12.86286.30±11.7824.43±4.08高剂量81.48±4.68140.29±5.44195.40±4.67234.45±9.91287.66±9.7621.78±2.94♂（n）空白83.67±5.96132.85±7.71164.89±9.54182.33±10.98212.91±10.4725.78±5.72低剂量83.59±4.78128.66±4.01163.98±8.96181.87±8.64215.78±12.5526.98±3.87中剂量82.24±3.56128.69±8.08165.64±12.87182.58±10.89216.70±11.9826.76±4.08高剂量81.67±2.98127.83±6.55162.49±8.76180.18±12.56214.77±13.8924.66±3.79性别组别体重（g）

3.2各组动物受孕和胎仔情况

在分娩时和分娩后，检查各组孕鼠情况，记录各孕鼠的胎仔总数、活胎数、死胎数以及4 d、21 d后各组胎儿存活情况，计算妊娠率、出生存活率、哺乳存活率和性别比。结果见表3。

表3　试验动物受孕和胎仔表

3.3子代动物检测

3.3.1子代动物大体解剖检查和脏器系数

各组子代动物喂养染毒5周后，处死各组动物，取肝、肾、脾和生殖器官（卵巢/睾丸）称重、检查，未发现肉眼可见病理改变；各组子代动物动物肝、肾、脾和生殖器官（卵巢/睾丸）的脏器系数未见明显的统计学或生物学的差异；见表4。

表4　试验动物脏器的绝对重量和相对重量±SD）（n=10）

性别组别脏器肝脏脾脏肾脏睾丸/卵巢绝对重量（g）相对重量（%）绝对重量（g）相对重量（%）绝对重量（g）相对重量（%）绝对重量（g）相对重量（%）♂空白8.15±0.492.63±0.130.63±0.040.20±0.072.27±0.120.73±0.042.91±0.170.94±0.06低剂量7.41±0.312.42±0.170.56±0.060.18±0.032.08±0.080.68±0.052.61±0.370.85±0.13中剂量7.94±1.062.74±0.390.63±0.050.22±0.022.35±0.580.81±0.212.83±0.200.98±0.09高剂量8.22±0.282.65±0.090.67±0.050.21±0.022.27±0.190.73±0.062.77±0.280.89±0.07♀空白6.23±0.802.86±0.200.47±0.060.21±0.021.50±0.100.70±0.040.13±0.020.06±0.01低剂量5.76±0.372.68±0.140.43±0.040.20±0.021.44±0.120.67±0.060.12±0.020.06±0.01中剂量5.90±0.682.76±0.330.42±0.070.20±0.031.50±0.120.70±0.030.14±0.020.06±0.01高剂量5.57±0.602.60±0.100.44±0.060.21±0.021.52±0.100.71±0.040.13±0.010.06±0.003

3.3.2各组动物血液指标

各组动物血液指标未见明显的统计学或生物学的差异，结果见表5。

表5　试验动物血常规统计结果（±SD）（n=10）

性别组别WBC（109/L）RBC（1012/L）HGB（g/L）PLT（109/L）♂空白3.96±1.8512.06±0.64174±18703±122低剂量3.99±1.2811.86±1.05178±17694±199中剂量3.59±1.6712.23±0.88182±12705±263高剂量4.20±1.9412.07±0.65189±19678±264♀空白4.10±1.3212.22±1.03175±12734±132低剂量4.06±1.6212.35±0.64177±11692±237中剂量4.65±1.5312.59±1.03184±12768±185高剂量4.98±1.0912.49±1.13192±18712±279

3.3.3各组动物血清生化指标

各组动物血清生化指标未见统计学或生物学的差异，结果见表6。

表6　试验动物血清生化指标（±SD）（n=10）

表6　试验动物血清生化指标（±SD）（n=10）

性别组别总胆固醇（mmol/L）♂空白56.68±1.4736.62±0.748.44±5.53240.11±27.243.46±0.55.46±0.6729.67±2.180.97±0.231.52±0.14低剂量58.03±1.7837.39±0.9149.70±7.72208.30±72.794±0.466.08±0.9732.40±3.030.97±0.131.38±0.19中剂量58.87±2.737.41±1.0151.6±9.2258.9±58.663.59±0.296.86±0.8430.8±2.350.98±0.141.51±0.17高剂量60.33±2.0138.12±1.0252.50±7.82251±36.974.05±0.335.22±0.6430.50±4.61.03±0.171.62±0.184♀空白61.89±2.8439.21±1.3553±12.03206.80±19.635.6±0.966.69±1.2336.9±4.530.84±0.171.83±0.36低剂量62.02±2.1939.54±0.9347.10±8.06219.4±25.334.67±0.429.26±3.3542.10±9.650.87±0.20.42±0.864中剂量63.47±2.4740.07±1.2346.60±4.33245.9±33.364.16±0.499.33±1.3441.10±3.930.75±0.21.92±0.41高剂量61.32±2.1639.31±1.0352.30±5.31250.20±22.664.22±0.396.96±1.0233.3±2.110.68±0.151.71±0.24项目总蛋白（g/L）白蛋白（g/L）谷丙转氨酶（U/L）谷草转氨酶（U/L）葡萄糖（mmol/L）尿素氮（mmol/L）肌酐（μmol/L）甘油三酯（mmol/L）

4 讨论

4.1试验动物的一般情况和体重增长趋势

在整个试验期间，从亲代动物到子代胎鼠成长至性成熟，各组动物喂养生长过程未发现的异常，未见动物死亡和肉眼可见的疾病。表1显示，各剂量组的雌雄动物体重增长趋势与空白组动物相同，符合大鼠生长发育的一般规律。雌雄空白组食物利用率分别为14.16±4.98和14.23±3.64，分别介于雌性剂量组食物利用率的13.76±2.88-14.56±4.33之间和雄性的13.67±4.04-14.23±4.87之间；没有显著性差别（P＞0.05）。表2结果与表1相同，未发现显示各剂量组的雌雄动物体重增长趋势和食物利用率与空白组动物不同（P＞0.05）。这些结果表明，在设计剂量条件下，未发现戊二醛对试验动物的生长有明显影响。

4.2对繁殖的影响

表3显示，各组受孕率与对照组相比无明显的统计学或生物学差异，也无剂量-效应关系；各组妊娠率、出生存活率和哺乳存活率均为100%，说明各剂量组戊二醛对受孕和仔鼠影响不大；而与空白对照组相比，各剂量组在出生活仔率、胎仔总数和存活总数方面较低，特别是高剂量组和中剂量组该特征更明显（P＜0.05）。这些指标提示，戊二醛可能对大鼠胎儿在胎盘中生长过程有影响，即可能存在胚胎毒性，这一结果与在戊二醛致畸试验［5］研究中的结果相一致。2个试验的结果提示，在较高剂量时，戊二醛可能对大鼠的生殖有影响，而这种影响是特异性地作用于生殖的某一阶段，还是非特异性一般毒性，值得进一步研究。

4.3对子代动物的影响

表4、表5和表6的结果显示，与对照组比较，子代各剂量组的脏器系数、血液指标和血清生化指标未见有统计学或生物学的差异，这说明子代动物与亲代动物喂养结果相似，即在本实验条件下，戊二醛对子代动物的生长发育没有明显影响。

5 结论

在本试验条件下，较高剂量水平的戊二醛可明显影响大鼠出生活仔率，而对受孕率和分娩后的仔鼠没有影响。

［1］许崇辉，刘慧智，温巧玲，等.戊二醛急性毒性研究［J］.检验检疫学刊，2012，22（4）：22-24.

［2］许崇辉，潘芳，温巧玲，等.戊二醛遗传毒性研究［J］.检验检疫学刊，2013，23（1）：7-10.

［3］许崇辉，温巧玲，刘慧智，等.戊二醛局部接触毒性研究［J］.检验检疫学刊，2013，23（5）：21-23.

［4］许崇辉，潘芳，刘慧智，等.戊二醛90天喂养实验研究［J］.检验检疫学刊，2014，24（1）：1-4.

［5］许崇辉，谢力，潘芳，等.戊二醛致畸试验［J］.检验检疫学刊，2014，24（1）：8-10.

［6］GB15193.15-2003繁殖试验［S］.

Toxicity Test for Reproduction of Glutaraldehyde in Rat

Xu Chonghui，Xie Li，Wen Qiaoling，Pan Fang，Liu Huizhi，Li Huayan
（Guangdong Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau，Gangzhou，Guangdong，510623）

［Objective］After the study of glutaraldehyde acute toxicity，genetic toxicity，subchronic toxicity test and teratogenicity test，completed the study of reproduction test of glutaraldehyde in order to research the influence of parents reproductive capacity and offspring growing.［Method］3 doses was completed in SD rats according to the GB 15193.15-2003.［Results］Compared with the control group，the high，middle，low dose groups and live birth rate is lower，and there is certain dose-effect relationship in three groups. The high dosage group，live birth rate were decreased significantly（P＜0.05）.Not found the influence of glutaraldehyde on pregnant rate and survival rate of birth.［Conclusion］Glutaraldehyde may have effects on rat gestation，and does not affect pregnancy and fetal growth.

Glutaraldehyde；Rat；Reproduction Test

R114

E-mail：xch868@126.com

国家质检总局科技计划项目（2008IK258-2）；广东省科技计划项目（2005B20401026）

2014-09-15