散斑竹根七的组织培养与快速繁殖体系的建立

蒋天仪等

摘要：以散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]的嫩茎段作为外植体，研究了其组织培养和快速繁殖体系。结果表明，外植体预处理后，经过75%的乙醇消毒20 s，再用0.1% HgCl2处理6 min的灭菌效果最好，启动率达到78.40%，污染率仅为23.75%。初代培养最适宜的培养基是MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L；MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L +NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L适用于继代增殖培养，丛生芽的增殖系数达到6.10；适宜生根的培养基为NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，生根率达到96.13%。

关键词：散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]；组织培养；快速繁殖体系

中图分类号：Q943.1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）16-4070-03

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.16.062

Establishment of Rapid Propagation System for Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause by Tissue Culture

JIANG Tian-Yi1，TANG Min1，YANG Shu1，WANG Bo2，SHI Da-xing3

（1.Department of Agriculture and Horticulture，Chengdu Vocational College of Agricultural Science and Technology，Chengdu 611130， China； 2.Construction Engineering Department of Sichuan Engineering Technical College，Deyang 618000，Sichuan， China；

3.College of Forest Science， Sichuan Agricultural University，Yaan 625014， Sichuan， China）

Abstract： Tissue culture and rapid propagation system of Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause were studied by using the tender stem as explants.The results showed that after 75% alcohol disinfection for 20 s ，with another 0.1% HgCL2 for 6 min was the best disinfection method， the survival rate was 78.40% and the contamination rate was only 23.75%. The optimum initial medium was MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 g/L+IAA 1.0 mg/L； MS+ 6-BA 0.5 mg/L+KT 1.5 mg/L+NAA 0.2 mg/L+IBA 1.0 mg/L was the suitable medium for buds multiplication，tufted bud proliferation coefficient reached 6.10. The suitable rooting culture medium was NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS，which gave a rooting rate as high as 96.13%.

Key words： Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause；tissue culture；rapid propagarion system

散斑竹根七[Disporopsis aspera （Hua） Engl.ex Krause]是百合科竹根七属植物，为多年生草本[1]，其叶厚纸质，花黄绿色，具紫色斑点，花被钟状[2]，春季开花，花朵俯垂，枝形优美。该种原产于林下、阴蔽山谷或溪边，是一种耐阴性很好的植物，可应用于风景林地下或建筑边缘物作地被植物，也可盆栽观赏[3]。地被植物在园林中的应用量一般很大，快速繁殖是满足园林应用的一个方面，而工厂化生产是保证苗木整齐的另一个方面。目前，工厂化生产种苗的公司并不多，专业生产地被植物的更少[4，5]。

1 材料与方法

1.1 试验材料

散斑竹根七植株采自四川省雅安市的周边山上，采回后种植于苗圃，选在5月取材，剪取3～4 cm的带芽茎段作为外植体。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体表面灭菌 将外植体在加有洗衣粉的洗涤液中浸泡10 min，接着用自来水冲洗2～3次，然后放入75%乙醇中处理20 s后用无菌水冲洗3次，再用0.1% HgCl2溶液分别处理3、6和9 min，期间不停地振荡，最后使用无菌水冲洗5次。每处理接种20个外植体，重复3次，灭菌后的外植体接入启动培养基先暗培养7 d，再进行光照培养（12 h/d），35 d后统计启动率和污染率。

1.2.2 初代培养 将处理好的带芽嫩茎段作为外植体进行接种，基本培养基为MS。设置基本培养基MS，加入6-BA（0、0.5、1.0、2.0 mg/L）、2，4-D（0.01、0.05、0.1、0.5 mg/L）、NAA（0、0.05、0.1、0.5 mg/L）和IAA（ 0、0.1、0.5、1.0 mg/L），共16个处理。每处理接种10株外植体，重复3次，培养30 d观察统计芽启动率。endprint

1.2.3 继代增殖培养 将初代培养获得的茎段丛生芽切割为带1个芽的小块，转接到继代增殖培养基上，以MS为基本培养基，加入6-BA（0.5、1.0、2.0 mg/L）、KT（0.5、1.0、1.5 mg/L）、NAA（0.01、0.1、0.2 mg/L）和IBA（0.1、0.5、1.0 mg/L），共12个处理。每个处理接种20株外植体，重复3次，40 d后统计增殖系数及有效苗数。

1.2.4 生根培养 在增殖培养中选取高约3 cm的健壮丛生芽，切割成单苗，接种于生根培养基中，基本培养基为MS，加入NAA（0.1、0.5、1.0 mg/L）、IBA（0.05、0.1、0.5 mg/L）和MS培养基（MS、1/2MS、1/4MS），共9个处理。每个处理接种20株外植体，重复3次，40 d后观察统计生根率。

2 结果与分析

2.1 不同表面灭菌方式对灭菌效果的影响

对散斑竹根七在不同灭菌时间处理中的启动率和污染率进行显著性差异SSR检验，结果见表1。从表1中可以看出，随着0.1% HgCl2处理时间的增加，污染率逐渐降低，启动率则表现为先上升后下降。处理3 min时，外植体启动率较高，为76.39%，但污染率也高（48.61%）；处理6 min时启动率最高，达到78.40%，污染率较低，为23.75%。而随着灭菌处理的时间延长，污染率降至最低（14.29%），但启动率仅有51.26%，为各处理中最低。综合来看，采用0.1% HgCl2灭菌6 min是较为适宜的外植体表面灭菌时间。

2.2 不同激素组合对初代培养的影响

接种1周后，接种的茎段腋芽开始萌动，大约3～5 mm，30 d绝大部分的芽苗长至2 cm。从表2中可以看出，处理9（MS+ 6-BA 1.0 mg/L+2，4-D 0.01 mg/L+NAA 0.1 mg/L+IAA 1.0 mg/L）对散斑竹根七芽的诱导效果最好，启动率达到85.20%，与其他处理差异极显著。随着6-BA浓度的升高，芽启动率逐渐升高，当6-BA达到1.0 mg/L的时候，处理9、10、11、12的芽启动率均达到70%以上。但当6-BA达到2.0 mg/L的时候，启动率又开始下降。同时，经过方差分析发现，2，4-D对启动诱导影响不显著。

2.3 不同激素组合对继代增殖培养的影响

从表3可以看出，对于丛生芽的诱导，3号处理效果最好，增殖系数达到6.10。各处理多数增殖系数都在4.0～5.0之间。经过方差分析发现，6-BA对继代增殖的影响呈极显著差异，NAA呈显著差异。当6-BA浓度为最低水平，而NAA的水平为最高值时，增殖系数最大。

2.4 不同激素组合对生根培养的影响

从表4中可以看出，在生根培养中，7号处理（NAA 1.0 mg/L+IBA 0.5 mg/L+1/2MS）的效果极显著高于其他处理，生根率达到96.13%，其次是9号处理，生根率为91.8%，与其他处理的差异也达极显著水平，经过方差分析发现，NAA对生根的影响极显著。随着NAA的浓度升高，生根率逐渐升高，而在NAA处于最高值水平时，1/2MS培养基的生根率最高，说明适当降低无机盐的浓度有利于散斑竹根七瓶苗的生根培养。

3 小结与讨论

带芽茎段的初代诱导时，6-BA、NAA以及二者的配合使用促进了茎段芽的启动。在一定范围内，随着6-BA浓度的升高，启动率也升高，说明6-BA浓度过高对芽的诱导起抑制作用，同时还发现2，4-D与IBA对散斑竹根七芽的启动诱导影响不显著。本试验中NAA对生根培养影响极显著，且随着NAA用量的减少生根率也呈下降的趋势。这与许多研究中低浓度的NAA促进生根、使生根时间缩短的结论相反[4]。这说明不同植物对激素浓度反应不同，与植株本身体内激素种类和水平相关。在组织培养生根阶段，一般认为低浓度的无机盐对壮苗生根有利，而生根状况的好坏直接影响着组培成功的最后一步。本试验的生根培养中，采用了MS、1/2MS、1/4MS为基本培养基，其中1/2MS生根效果最好，生根率达96%。在之前的培养中，经过外源激素的使用和转瓶继代的培养，培养物本身积累了许多生长激素，低盐的培养基有利于过多激素的释放，防止植株徒长、黄化等。因此，在散斑竹根七的生根培养中1/2MS的培养基生根效果最佳。

参考文献：

[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].北京：科学出版社，2013.

[2] 李明银，郭 英，陈 娟，等.龙门山地区常见斑叶观叶植物调查[J].江苏农业科学，2011， 39 （2）：260-263.

[3] 袁桂美，王海洋，彭先涛.缙云山野生观赏植物资源及其园林应用[J].南方农业（园林花卉版），2007（8）：26-29.

[4] 刘 敏.花卉组织培养与工厂化生产[M].北京：地质出版社，2002.45.

[5] 陈志萍，虞志军，闵 玮.几种野生地被的引种栽培[J].北方园艺，2011（20）：92-94.endprint