氨糖胶囊的急性和亚急性毒理学评价

林丽萍，杜芳琼，莫杰明，吕晔，席建红

（1.江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究开发中心，江苏南京210014；2.江苏省农业种质资源保护与利用平台，江苏南京210014；3.福建省肿瘤医院，福建福州350014；4.广西嘉盈生物科技有限公司，广西南宁530000；5.托尔专用化学品（镇江）有限公司，江苏镇江212132）

氨糖胶囊的急性和亚急性毒理学评价

林丽萍1，2，杜芳琼3，莫杰明4，吕晔1，席建红5，*

（1.江苏省中国科学院植物研究所药用植物研究开发中心，江苏南京210014；2.江苏省农业种质资源保护与利用平台，江苏南京210014；3.福建省肿瘤医院，福建福州350014；4.广西嘉盈生物科技有限公司，广西南宁530000；5.托尔专用化学品（镇江）有限公司，江苏镇江212132）

氨糖胶囊系由氨基葡萄糖盐酸盐、硫酸软骨素、碳酸钙和维生素D组成的具有增加骨密度功能的保健食品，为判定其对人体健康是否产生危害，特进行了安全性毒理学评价。依据《食品安全性毒理学评价程序》，对氨糖胶囊进行了急性毒性试验和30 d喂养试验。结果表明，氨糖胶囊对雌、雄小鼠的急性经口的最大耐受剂量（MTD）大于20.0 g/kg·bw，根据急性毒性分级，氨糖胶囊属无毒级。连续氨糖胶囊喂养30天，各剂量组动物生长良好，体重、进食量及食物利用率、血液学指标、血生化指标、脏器绝对重量及脏/体比值与阴性对照组相比均无显著差异（P＞0.05）；病理组织学检查结果也表明氨糖胶囊对受检脏器无明显损害。因此，根据实验结果，判定氨糖胶囊为安全性保健食品

急性毒性；MTD；30 d喂养试验；亚急性毒性；氨糖胶囊

氨糖胶囊系由氨基葡萄糖盐酸盐、硫酸软骨素、碳酸钙和维生素D组成的保健食品，功能学检测结果显示其具有增加骨密度的作用。文献报道氨基葡萄糖和硫酸软骨素常用于类风湿性关节炎的辅助治疗［1-2］。这两种原料联合使用的毒理学研究也有些报道［3-4］。但是氨糖胶囊四种组分用于增加骨密度的保健食品，未见其安全毒理学评价，因此，根据食品安全性毒理学评价程序［5］对该受试物进行了急性毒性和亚慢性毒性实验研究。

1材料和方法

1.1受试物

氨糖胶囊由广西嘉盈生物科技有限公司提供。样品为胶囊，内容物为灰白色粉末，生产批号为20110928。人体每日推荐用量为3.0 g/60 kg·bw。

1.2试验动物

选用山东大学实验动物中心提供的健康SPF级昆明种小鼠和SPF级Wistar大鼠，实验动物生产许可证号为SCXK（鲁）20090001。SPF级实验动物环境设施合格证号为鲁动环字SYXK（鲁）20100011号。实验环境温度（22±2）℃，相对湿度（50±10）%。

1.3方法

1.3.1小鼠急性毒性试验［6］

采用最大耐受量（MTD）试验。健康昆明种小鼠20只，雌雄各半，体重为18 g～22 g。称取受试物10 g，用蒸馏水溶解并定容至20 mL，小鼠空腹16 h后，间隔4 h，以0.20 mL/10 g·bw容量灌胃2次，总剂量为20.0 g/kg·bw灌胃，连续观察14 d，记录中毒表现及死亡情况。

1.3.230d喂养试验［7］

选断乳SD大鼠80只，体重60 g～80 g，随机分为阴性对照组及3个受试样品组，每组20只，雌雄各半。3个受试样品组剂量分别为1.25、2.50、5.00 g/kg·bw。将送检样品分别按1.25%、2.50%、5.00%的比例（质量分数）掺入饲料，制备相当于原产品人体每日推荐用量25倍、50倍、100倍的饲料；三组大鼠分别喂饲以上饲料，阴性对照组喂饲常规饲料。单笼喂养，自由饮食，连续30 d。每天观察并记录动物的一般表现、行为、中毒表现和死亡情况。每周称1次体重和2次食物摄入量，计算每周及总的食物利用率。试验结束观察以下指标：（1）血液学指标：测定血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类。（2）血液生化学指标：测定谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、甘油三酯、胆固醇、血糖、血清白蛋白、总蛋白。（3）病理检查：对所有动物进行大体检查，将重要器官和组织固定保存，将脏器（肝、脾、肾、睾丸）称重，计算相对重量（脏/体比值），并进行病理组织学检查（肝、肾、脾、胃及十二指肠、睾丸或卵巢）。

1.3.3数据处理

采用SPSS11.0统计软件对数据分别进行χ2检验、Fisher精确概率法、One-way ANOVA分析及Dunnett检验，检验水准α=0.05。

2结果与分析

2.1急性毒性试验

氨糖胶囊对小鼠经口急性毒性试验结果，见表1。

本研究依据《食品安全性毒理学评价程序》［5］的规定，保健食品的急性毒性结果须满足动物未现死亡≥10.0 g/kg·bw（即涵盖人体推荐量的100倍），才能进行第2阶段的毒理学研究。由表1可见，试验期间两种性别的小鼠均未见明显的中毒症状，也无死亡。将受试动物处死后进行解剖检查，肝脏、脾脏、肾脏、心脏、肺、胃、肠等主要器官，均未见明显异常改变。受试样品对两种性别小鼠的最大耐受剂量（MTD）均大于20.0 g/kg·bw，根据急性毒性分级，氨糖胶囊属无毒级。

表1　氨糖胶囊对小鼠的急性毒性试验结果Table 1Acute toxicity test results of An’tang capsule in mice

2.230d喂养试验

2.2.1一般情况观察

试验期间各组动物生长发育、活动均正常，无中毒表现和死亡发生。

2.2.2氨糖胶囊对大鼠体重、增重的影响

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw剂量的氨糖胶囊制备饲料喂饲大鼠，连续30 d，与阴性对照组相比，受试样品各剂量组动物每周体重、体重增加量、进食量和食物利用率及总体重增加量、进食量和食物利用率差异无显著性，结果见表2。

表2　氨糖胶囊对大鼠体重（g）的影响（±s，n=10）Table2EffectofAn’tangcapsuleonbodymassinrats（±s，n=10）

表2　氨糖胶囊对大鼠体重（g）的影响（±s，n=10）Table2EffectofAn’tangcapsuleonbodymassinrats（±s，n=10）

注：与阴性对照组相比无显著性差异（P＞0.05）。

性别剂量/（g/kg·bw）始重第一周第二周第三周第四周雄阴性对照73.9±4.9 122.5±7.4 166.6±10.5 205.5±14.1240.1±16.1 1.2574.6±4.4 123.8±7.3168.4±9.5208.2±12.0243.3±14.8 2.5073.8±5.2 121.9±6.1165.3±8.5204.9±10.4238.7±12.1 5.0074.1±5.1 123.0±6.5167.4±7.6206.5±10.1240.8±12.3雌阴性对照72.3±3.9 111.2±4.7145.5±5.5174.4±6.3196.8±9.2 1.2571.7±3.9 110.2±6.0144.1±7.5172.5±9.2194.6±10.2 2.5072.1±4.6 109.9±5.3144.4±6.0172.2±7.4193.8±9.4 5.0073.2±3.8 112.3±4.5147.2±6.1175.2±6.6198.4±8.0

2.2.3氨糖胶囊对大鼠血液学指标的影响

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw剂量的氨糖胶囊制备饲料喂饲大鼠，连续30 d，各剂量组大鼠的血红蛋白、红细胞计数、白细胞计数及其分类与阴性对照组相比无显著性差异（P＞0.05），见表3。

2.2.4氨糖胶囊对大鼠血液生化指标

以1.25g、2.50、5.00 g/kg·bw剂量的氨糖胶囊制备饲料喂饲大鼠，连续30 d，各剂量组大鼠的血生化指标与阴性对照组相比无显著性差异（P＞0.05），见表4。

表3　氨糖胶囊30 d喂养试验血液学检查结果（±s，n=10）Table 3Effect of An’tang capsule on blood in rats（±s，n=10）

表3　氨糖胶囊30 d喂养试验血液学检查结果（±s，n=10）Table 3Effect of An’tang capsule on blood in rats（±s，n=10）

注：与阴性对照组相比无显著性差异（P＞0.05）。

性别剂量/（g/kg·bw）血红蛋白/（g/L）红细胞计数/（×1012/L）白细胞计数/（×109/L）中性/%淋巴/%雄阴性对照150.00±9.757.73±0.628.08±2.2632.23±10.7467.77±10.74 1.25155.70±14.807.88±0.688.00±2.1331.80±4.0968.20±4.09 2.50146.90±12.097.54±0.588.13±2.1926.55±3.4373.45±3.43 5.00147.10±10.227.74±0.528.11±2.9431.09±5.3968.91±5.39雌阴性对照149.30±5.917.70±0.478.13±2.2028.08±6.7871.92±6.78 1.25147.70±8.127.47±0.438.13±1.5027.95±6.0072.05±6.00 2.50142.60±24.477.17±1.198.03±2.1330.12±6.5369.88±6.53 5.00149.10±15.217.71±0.628.37±2.8632.84±7.4367.16±7.43

表4　氨糖胶囊30 d喂养试验生化检验结果（x+s，n=10）Table 4Biochemical indexes results ofthe blood of Rats with An'tang capsule in 30 days feeding test（x+s，n=10）

2.2.5病理检查

以1.25、2.50、5.00 g/kg·bw剂量的氨糖胶囊制备饲料喂饲大鼠，连续30 d，各组大鼠大体观察未发现异常，脏器绝对重量及脏/体比值与阴性对照组相比无显著性差异（P＞0.05）。实验组与对照组比较，送检脏器肝、肾、脾、胃、十二指肠、睾丸或卵巢组织未见有意义的病理改变。

3讨论与结论

氨基葡萄糖和硫酸软骨素成为世界范围内保健食品中广泛使用的添加剂，与碳酸钙和维生素D联合使用，具有很好的增加骨密度保健功能，为了验证其是否具有毒性，让消费者放心，其毒理学安全性评价意义十分重大。本研究依据《食品安全性毒理学评价程序》的规定，本实验中氨糖胶囊第1阶段急性毒性试验表明，雌雄两性小鼠MTD均大于20.0 g/kg·bw，属于实际无毒级，可以进入第2阶段毒理学试验。30 d喂养试验结果显示其对雌雄大鼠体重、总食物利用率、血常规以及血液生化指标无明显影响，肝、肾、胃及十二指肠均未见病理组织学改变，因此认为该受试物属安全性保健食品，可以长期服用。

［1］Susanne X.Wang，Sheila Laverty，MirceaDumitriu，et al.The Effects of Glucosamine Hydrochloride on Subchondral Bone Changes in an Animal Model of Osteoarthritis［J］.Arthritis&Rheumatism，2007，56（5）:1537-1548

［2］Olivier B，Jean-Yves R.Glucosamine and Chondroitin Sulfate as Therapeutic Agents for Knee and Hip Osteoarthritis［J］.Drugs&Aging，2007，24（7）:573-580

［3］John N.Hathcock，Andrew Shao.Risk assessment for glucosamine and chondroitin sulfate［J］.Regulatory Toxicology and Pharmacology，2007，47（1）:78-83

［4］Pavelka K，Gatterova J，Olejarova M，et al.Glucosamine sulfate use and delay of progression of knee osteoarthritis:a 3-year，randomized，placebo-controlled，double-blind study［J］.Arch Intern Med，2002，162（18）:2113-2123

［5］中华人民共和国卫生部.GB 15193.1-2003食品安全性毒理学评价程序［S］.北京:中国标准出版社，2003:1-8

［6］中华人民共和国卫生部.GB 15193.3-2003急性毒性试验标准［S］.北京:中国标准出版社，2003:17-31

［7］中华人民共和国卫生部.GB 15193.13-2003 30天和90天喂养试验［S］.北京:中国标准出版社，2003:85-88

Acute and Subacute Toxicological Assessment of An'tang Caspsule

LIN Li-ping1，2，DU Fang-qiong3，MO Jie-ming4，LÜ Ye1，XI Jian-hong5，*
（1.Jiangsu Center for Research&Development of Medicinal Plants，Institute of Botany，Jiangsu Province and Chinese Academy of Sciences，Nanjing 210014，Jiangsu，China；2.The Jiangsu Provincial Platform for Conservation and Utilization of Agricultural Germplasm，Nanjing 210014，Jiangsu，China；3.Tumor Hospital of Fujian Province，Fuzhou 350014，Fujian，China；4.Guangxi Giant Bio-Tech Co.，Ltd.，Nanning 530000，Guangxi，China；5.Thor Specialty Chemical（Zhenjiang）Co.，Ltd.，Zhenjiang 212132，Jiangsu，China）

An'tang capsule was a functional food by increasing bone mineral density which comprising glucosamine hydrochloride，chondroitin sulfate，calcium carbonate and Vitamin D.Inorder to provide scientific basis for rational development and utilization of An'tang capsule，its dietary safety was studied.Acute toxicity test and thirty-day feeding test set on for An'tang capsule were investigated according to the health food inspection and evaluation of technical specifications.Male and female rats acute oral maximum tolerated dose（MTD）of An'tang capsule was greater than 20.0 g/kg.bw which indicated that it was actually non-toxicity.Furthermore，the results indicated that no significant difference of the rat growth，body weight，food intake and food utilization，rout blood and biochemical index，which indentified that An'tang capsule was safety for human being.

acute toxicity；maximum tolerated dose（MTD）；thirty-day feeding；subacute toxicity；An'tang capsule

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.14.033

2014-03-20

林丽萍（1979—），女（汉），助理研究员，博士，研究方向：天然活性成分和保健食品的研究与开发。

席建红（汉）。