HPLC法同时测定湿热痹胶囊中粉防己碱及防己诺林碱的含量

赵正煜施 法李 妮

（1 沈阳医学院附属中心医院，辽宁 沈阳 110023；2 辽宁省药品检验检测院，辽宁 沈阳 110023；3 辽宁省药品认证中心，辽宁 沈阳 110023）

HPLC法同时测定湿热痹胶囊中粉防己碱及防己诺林碱的含量

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（1 沈阳医学院附属中心医院，辽宁 沈阳 110023；2 辽宁省药品检验检测院，辽宁 沈阳 110023；3 辽宁省药品认证中心，辽宁 沈阳 110023）

目的 建立同时测定湿热痹胶囊中粉防己碱及防己诺林碱的HPLC法。方法 采用高效液相色谱法测定湿热痹胶囊中粉防己碱及防己诺林碱的含量。结果 粉防己碱在0.04322～0.8644 μg范围内呈良好线性关系，平均回收率为99.2%（RSD=1.3%，n=6）；防己诺林碱在0.04406～0.8812 μg范围内线性关系良好，平均回收率为98.2%（RSD=1.7%，n=6）。结论 该方法重复性、准确性良好，可作为标准用于湿热痹胶囊的质量控制。

湿热痹胶囊；高效液相色谱法；粉防己碱；防己诺林碱

1　仪器与试药

1.1仪器：岛津LC-2010CHT高效液相色谱仪，岛津2010UVD，Phenomen HU10260B型超声波清洗器，Sartorius R200D型电子天平。

1.2试药：粉防己碱和防己诺林碱对照品（中国药品生物制品检定所提供，批号为110711-200708，110793-200605）湿热痹胶囊由本溪三药集团有限公司提供，批号为131101、131102、131103，标示量为0.37克/粒。甲醇为色谱纯，冰醋酸为分析纯，水为二次蒸馏水，其余试剂均为分析纯［1］。

2　方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：安捷伦ZORBAX C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）；流动相：乙腈-甲醇-水-冰醋酸（40∶30∶30∶1）（每100 mL含十二烷基磺酸钠0.41 g），流速：1.0 mL/min；检测波长：280 nm；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。理论板数按粉防己碱峰计算应不低于3000。在上述色谱条件下，样品中其他成分对粉防己碱和防己诺林碱的测定无干扰。对照品、样品及阴性样品色谱图见图1。

图1　湿热痹片HPLC色谱图

2.2溶液制备

2.2.1供试品溶液制备：取装量差异项下本品内容物，研细，取0.4 g，精密称定，置于具塞锥形瓶内，精密加入盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液25 mL，密塞，称定重量，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，放冷，再称定重量，用盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.2阴性对照品溶液制备：按工艺方法制备缺防己的阴性样品，其他操作同“2.2.1”项下制成阴性对照溶液。

2.3线性关系：精密吸取对照品溶液5 mL至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度。精密吸取上述溶液1、2、5、10、15、20 μL注入液相色谱仪中，测定峰面积，以进样量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标，绘制标准曲线，粉防己碱在0.04322～0.8644 μg范围内时，线性关系良好，回归方程为Y=-1310.6+693413.5X，r=0.9999；防己诺林碱在0.04406～0.8812 μg范围内时，线性关系良好，回归方程为Y=-1512.8+795032.4X，r=0.9999。

2.4精密度实验：精密吸取同一样品溶液（批号131101）重复进样6次，测定峰面积，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为0.9%和0.7%，结果表明，本试验精密度良好。

2.5稳定性实验：取同一批样品（131101）按“2.2.1”项下方法制备方法，分别于配制后0，2，4，6，8，12 h，测定峰面积，粉防己碱和防己诺林碱RSD分别为1.2%和1.7%。测定结果表明，供试品溶液在12 h内稳定。

2.6加样回收率实验：精密称取已知准确含量的同一批样品（131101）6份各0.2 g，分别精密加入粉防己碱对照品溶液（C=0.06012 mg/mL）5 mL，防己诺林碱对照品溶液（C=0.07016 mg/mL）5 mL，盐酸-甲醇（1∶100）的混合溶液15 mL，按“2.2.1”项下方法制备方法操作，测定加标样品中的粉防己碱及防己诺林碱的含量，计算回收率。结果见表1。测定结果表明，本试验准确性良好。

3　讨 论

本实验进行了方法耐用性考察，采用安捷伦ZORBAX C18（4.6 mm ×250 mm，5 µm）色谱柱和奥迪马C18（4.6 mm×250mm，5µm）色谱柱，均能达到较好的分离效果。并采用安捷伦ZORBAX C18色谱柱，考察了流速及柱温变化对方法的影响，发现流速在0.8～1.2 mL/min范围内，柱温在30～40 ℃范围内改变对分离效果无影响。

［1］韩新峰，杜天信，李无阴.湿热痹胶囊治疗湿热痹阻型风湿病的临床观察［J］.中医正骨，2002，14（4）：9-11.

表1　粉防己碱回收率试验

R282.710.3

B

1671-8194（2015）29-0044-01