反相高效液相色谱法测定心脉康合剂中淫羊藿苷含量

白荣，龚小倩，邱海蕴，陶恩

（1.三峡大学仁和医院，湖北宜昌443001；2.三峡食品药品检验检测中心，湖北宜昌443000；3.湖北民族学院附属民大医院，湖北恩施445000）

反相高效液相色谱法测定心脉康合剂中淫羊藿苷含量

白荣1，龚小倩2，邱海蕴2，陶恩3

（1.三峡大学仁和医院，湖北宜昌443001；2.三峡食品药品检验检测中心，湖北宜昌443000；3.湖北民族学院附属民大医院，湖北恩施445000）

目的建立测定心脉康合剂中淫羊藿苷含量的反相高效液相色谱法，为质量控制提供依据。方法色谱柱为Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm），流动相为乙腈-0.05%磷酸溶液（25∶75），流速为1.0mL/min，检测波长为270 nm。结果淫羊藿苷进样量线性范围为0.062 6～1.879 8μg（r=1.000 0），精密度、稳定性及重复性的RSD均小于2.00%，平均回收率为99.35%，RSD为0.79%（n=9）。结论该方法简便、准确、重复性好，可用于该制剂质量控制。

心脉康合剂；淫羊藿苷；反相高效液相色谱法

心脉康合剂是由麦冬、丹参、淫羊藿、党参、附片、五味子、黄芪、甘草、桂枝、菟丝子、赤芍11味中药组方的中药复方制剂，临床用于脾肾两虚引起的气血虚弱、心阳不足及冠心病、心肾功能不全、免疫功能失调。该制剂在我院临床已应用多年，效果良好。淫羊藿主要功能为补肾阳、强筋骨，用于肾阳虚衰、阳痿遗精。在目前的心脉康合剂质量标准中，只有对麦冬、丹参的薄层色谱鉴别，未对其中任一药材的有效成分进行定量分析。为提高医院制剂质量标准，有效控制剂质量，参考文献［1-7］，建立了心脉康合剂中淫羊藿苷含量测定的反相高效液相色谱（RP-HPLC）法，现报道如下。

1　仪器与试药

Waters e2695型高效液相色谱仪，Empower色谱工作站（美国Waters公司）；METTLER-AE240型电子分析天平。淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为110737-200415）；乙腈为色谱纯，水为去离子双蒸馏水，其他试剂均为分析纯；心脉康合剂（湖北民族学院附属医院制剂室，批号为140109，140308，140809）；缺淫羊藿的阴性对照合剂（自制）。

2　方法与结果

2.1色谱条件及系统适用性试验

色谱柱：Diamonsil C18柱（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05%磷酸溶液（25∶75）；流速：1.0mL/min；检测波长：270 nm；柱温：25℃；进样量：20μL。在此色谱条件下，淫羊藿苷达到基线分离（分离度大于1.5），理论板数按淫羊藿苷峰计算应不低于3 000。色谱图见图1。

图1　高效液相色谱图

2.2溶液制备

精密称取60℃减压干燥14 h后的淫羊藿苷对照品19.57mg，置25mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，作为贮备液；精密量取贮备液2 mL，置25mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得质量浓度为62.62μg/mL的对照品溶液。精密量取供试品5mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇约45 mL，超声溶解15min，放置至室温，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得供试品溶液。取处方量药材（不含淫羊藿）按心脉康合剂生产方法制备缺淫羊藿的阴性对照合剂3批，混合均匀，作为阴性对照品溶液。

2.3方法学考察

专属性试验：分别精密量取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照品溶液各20μL，在拟订色谱条件下分别注入色谱仪，记录色谱图，见图1。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相同位置上有相同时间的保留峰，阴性对照品溶液色谱则无此峰。淫羊藿苷保留时间约为32.4min，理论板数以淫羊藿苷峰计算为12500。

线性关系考察：分别精密量取按2.2项下对照品溶液1.0，5.0，10.0，20.0，30.0μL，注入色谱仪，以色谱峰面积（Y）为纵坐标、进样量（X，μg）为横坐标进行线性回归，得回归方程Y=2 306 468X-37 400，r=1.000 0（n=5）。结果，淫羊藿苷进样量在0.062 6～1.879 8μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验：取同一对照品溶液，重复进样6次，每次10μL，记录峰面积。结果峰面积平均值为1 406 601，RSD为0.2%（n=6），表明仪器精密度良好。

重复性试验：取同一批样品（批号140109）6份，按2.2项下方法制备供试品溶液，进样20μL，依法测定。结果合剂中淫羊藿苷含量分别为0.432，0.429，0.427，0.430，0.429，0.435 g/L，平均0.430 g/L，RSD为0.7%（n=6），表明方法重复性好。

稳定性试验：取同一供试品溶液，分别于0，1，4，12，24，48，72 h时进样20μL，依法测定。结果淫羊藿苷峰面积的RSD为1.0%（n=7），表明供试品溶液至少在3 d内稳定。

检测限与定量限确定：精取对照品溶液，用甲醇逐级稀释，记录色图谱。信噪比为3时测得检测限为2.50 ng，信噪比为10时测得定量限为12.52 ng。

加样回收试验：精密量取2mL已知含量的样品9份（批号140109），分别精密加入按2.2项下方法制备的对照品贮备液0.5，2.0，4.0mL各3份，再按样品测定项下方法配制成供试品溶液50mL，进样20μL测定，计算回收率。结果见表1。

表1　淫羊藿苷加样回收试验结果（n=9）

2.4样品含量测定

取3批样品，按2.2项下方法制备供试品溶液。分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各20μL，按色谱条件进样测定，记录峰面积，计算样品中淫羊藿苷的含量。结果批号分别为140109，140308，140809的样品含量分别为0.430，0.427，0.434 g/L，平均含量为0.430 g/L。

3　讨论

淫羊藿作为主要组分广泛应用于多种制剂中，在本合剂组方中，淫羊藿即为主要成分。淫羊藿苷是淫羊藿中的主要成分，也是其主要活性成分之一，测定其含量对于控制本品质量，更好地保证临床疗效有重要意义。

淫羊藿检测方法比较成熟，对其定量检测通常采用高效液相色谱（HPLC）法，含淫羊藿中成药或制剂中淫羊藿苷的HPLC法含量测定报道已较多［1-7］，主要流动相为甲醇-水（磷酸溶液）、乙腈-水（磷酸溶液），但因各制剂处方组成差异，流动相比例各不相同，采用的洗脱方式也多种多样，以充分消除样品中其他成分的干扰。本研究中在建立心脉康合剂中淫羊藿苷含量测定时，对药典及文献中报道的方法进行了研究测试，最终选定流动相组成、磷酸溶液浓度、比例及洗脱方式，筛选出的色谱条件对本制剂中淫羊藿苷的测定具有较强的专属性，能达到基线分离、峰形对称、阴性对照无干扰，不足之处可能在于洗脱时间较长，但简便的样品处理方式抵消了这种不足。

为了消除中药制剂中主要成分测定过程中的干扰，提高目标检测物的可检测性，中药制剂样品处理方式非常重要。含淫羊藿固体制剂的前处理方法大多为超声提取［4-7］，其次是回流提取［4］，对液体制剂多直接用溶剂稀释［4］。由于本制剂为液体制剂，不存在被检成分能否完全溶出的问题，因此在样品制备时首先选择了操作简便的直接溶剂稀释法。研究表明，取适量合剂样品进行适当稀释后，在线性范围内可对合剂中的淫羊藿苷进行准确检测，无需浓缩或提取过程［4］。

综上所述，本研究中建立的淫羊藿苷含量测定方法简便、快速、结果准确、重复性好，可用于心脉康合剂的质量控制。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）［M］.北京：中国医药科技出版社，2010：306.

［2］邢婧，任红，汪轩，等.HPLC法同时测定淫羊藿-川芎药对8种化学成分的含量［J］.药物分析杂志，2015，35（6）：960-965.

［3］杨炳川，杨浩然，方应权，等.HPLC法测定复方玄驹胶囊中淫羊藿苷的含量［J］.中国药房，2015，35（6）：1 282-1 283.

［4］黄朝情，彭玉德，黄文华，等.12种中成药中淫羊藿组分的质量考察［J］.中国药房，2011，22（43）：4 086-4 088.

［5］刘源，石继伟.高效液相色谱法测定安神补脑片中淫羊藿苷含量［J］.中国药业，2014，23（1）：14-15.

［6］鲍蕾蕾，陈海飞，卞俊，等.高效液相色谱法测定健步关节胶囊中淫羊藿苷含量［J］.中国药业，2012，21（20）：42-43.

［7］王巨存，冯鑫，赵薇，等.HPLC法测定壮骨止痛颗粒中淫羊藿苷的含量［J］.药物分析杂志，2011，31（4）：742-744.

Determ ination of Icariin in Xinmaikang M ixture by RP-HPLC

Bai Rong1，Gong Xiaoqian2，Qiu Haiyun2，Tao En3
（1.Renhe Hospital of Three Gorges University，Yichang，Hubei，China 443001；2.Three Gorges Center for Food and Drug Control，Yichang，Hubei，
China 443000；3.The Affiliated Hospital of Hubei University for Nationalties，Enshi，Hubei，China 445000）

Objective To establish a reverse phase-high performance liquid chromatography（RP-HPLC）method for the determination of icariin in Xinmaikang Mixture，so as to provide

for its quality control.M ethods The HPLC analysis was carried out on the Diamonsil C18column（250 mm×4.6 mm，5μm）.The mobile phase was consisted of acetonitrile-0.05%phosphoric acid（25∶75）with the flow rate of 1.0 mL/min.The detection wavelength was 270 nm.Results The linear range of icariin was 0.062 6μg～1.879 8μg（r=1.000 0），the RSDs of precision，stability and reproducibility tests were lower than 2.00%，with an average recovery rate of icariin 99.35%，RSD=0.79%（n=9）.Conclusion This method is sensitive，simple and accurate with good repeatability and good linearity.It can be used for the quality contnet of icariin in Xinmaikang Mixture.

Xinmaikang Mixture；icariin；reverse phase-high performance liquid chromatography

R284.1；R286.0

A

1006-4931（2015）24-0158-03

白荣（1962-），女，大学本科，副主任药师，研究方向为医院药学、药物分析及药物制剂，（电子信箱）brlk933@ 163.com。

2015-08-13）