高效液相色谱法测定地表水中溴氰菊酯

韦英亮，盘杨桂

(广西分析测试研究中心，广西 南宁 530022)

溴氰菊酯 (deltamethrin)，又称敌杀死，是一种广谱性的杀虫剂，属于拟除虫菊酯类农药中的一种，是目前杀虫活性最高的杀虫剂之一。由于其生产价格低廉除虫效果好，因而被广泛应用于防治水稻棉花害虫及卫生用杀虫剂。由于近年来的大量应用，其使用后残留的毒副作用逐步显现[1-4]，在地表水及饮用水源中的残留及危害已日渐引起人们的重视。目前，生活饮用水标准检验方法农药指标[5]及部分文献[6-7]采用正相色谱柱对饮用水中的溴氰菊酯残留进行分离检测。但是在实际工作中，绝大多数的液相色谱仪都只配置了反相色谱柱，因此运用国标方法采用正相色谱法检测溴氰菊酯有一定困难，对实际工作造成了不便。气相色谱法[8-9]和气相色谱-质谱联用法[10-11]是检测溴氰菊酯的另外一种常用的方法，该方法虽然灵敏度高，但对样品的净化要求严格，同时，分析流程的时间较长，影响分析效率。

本实验采用反相色谱柱对地表水中的溴氰菊酯进行分离检测，通过对样品前处理及液相色谱条件等一系列实验步骤的优化，取得了令人满意的结果。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

仪器：岛津LC-20AD 高效液相色谱仪，带紫外检测器，二元梯度泵，LC-Solution 工作站，振荡器，氮吹浓缩仪，超纯水仪。

试剂：浓度为 100μg·mL-1的溴氰菊酯浓标；高效液相色谱纯甲醇；农残级正己烷；实验用水为Milli-Q 超纯水；分析纯 Na2SO4，使用之前在500℃马弗炉中烘4h。

1.2 标准使用液的配制

用甲醇将溴氰菊酯浓标稀释成浓度分别为0.025μg·mL-1﹑0.050μg·mL-1﹑0.250μg·mL-1﹑0.500μg·mL-1﹑1.00μg·mL-1的标准系列浓度，4℃冰箱保存。

1.3 样品前处理

取100mL 水样于分液漏斗中，加入20mL 正己烷，手摇震荡放气后，置于自动振荡器上震荡10min，静置待下层水澄清时， 将其收集于一干净烧杯中，上层萃取液经无水Na2SO4收集于氮吹管中；再将萃取后水样重新转移至分液漏斗中，按上述步骤再萃取1 次，合并萃取液，氮吹至近干，用甲醇准确定容至1mL，过 0.45μm 微孔滤膜，待测。

1.4 色谱条件

色谱柱：Shim-Pack XR-ODSⅡ (2.0mm×75mm，2.2μm)；检测器：紫外检测器；检测波长280 nm；流动相：甲醇+水= 95+5；流速0.3mL·min-1；柱温35℃；停止时间：3 min；进样体积：5μL。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的优化

2.1.1 流动相比例的优化

研究了不同配比的甲醇/水流动相体系对溴氰菊酯分离效果的影响，结果发现，采用甲醇+水=95+5 作为流动相分离体系，可取得较好的分离效果和灵敏度，同时也可获得比较适宜的保留时间。若降低流动相中水的比例，则出峰太快，保留时间过短，分析效果差；若进一步增加流动相中水的比例，同样分离效果不够理想，且峰型变宽，灵敏度降低。因此综合考虑，确定流动相比例为甲醇+水=95+5。不同比例流动相体系下溴氰菊酯色谱图见图1。

图1 不同比例流动相体系下的溴氰菊酯色谱图

2.1.2 流速的优化

流速的变化对保留时间有比较明显的影响，流速太慢，易导致色谱峰扩散；流速太快，则保留时间过短。采用 0.3mL·min-1的流速则可以满足各方面的要求，获得较为满意的分离效果。

2.1.3 柱温的优化

经对比试验，柱温对分离效果影响不大，但是，如果柱箱温度设置低于环境温度，则容易导致液相色谱仪长时间未就绪，影响分析效率；若柱箱温度设置较高，则会影响色谱柱的使用寿命，因此，本试验采用35℃的柱温。

2.2 萃取时间对萃取效率的影响

分别取4 组5.0μg·L-1水样进行试验，萃取时间分别为 2 min﹑5 min﹑10 min﹑15 min，萃取时间对回收率的影响结果如图2 所示。

图2 不同萃取时间对回收率的影响

结果表明，随着萃取时间的延长，萃取效率有所提高，萃取时间达到10min 时，萃取效率趋于稳定，且回收率均在95%，当萃取时间为15min 时，回收率虽然仍有所提高，但综合考虑工作效率﹑方法精密度和灵敏度等因素，本实验最后选定萃取时间为10min。

2.3 萃取次数对萃取效率的影响

试验取100mL 水样，分别用20mL 正己烷萃取1 次﹑2 次和3 次，每次萃取10min，结果显示，随着萃取次数的增加，萃取效率也随之增加，但增加幅度较小。综合考虑萃取效率与准确度等因素，本试验采用加入 20mL 萃取溶剂﹑萃取1 次的方法对样品进行前处理。萃取次数对萃取效率的影响结果如图3 所示。

图3 萃取次数对萃取效率的影响

2.4 校准曲线与方法出限

本试验配制 0.025～1.00μg·mL-1共 5 种不同浓度的溴氰菊酯标准溶液，每种浓度重复测定2 次，以峰面积平均值对相应浓度绘制标准曲线，结果表明线性关系良好，相关系数r=0.9996，回归方程：Y=0.000998X-0.00554，溴氰菊酯标准色谱图见图4。根据检出限的确定方法[12]，对浓度值为估计方法检出限值2～5 倍的样品进行n（n ≥7）次平行测定。将各测定结果换算为样品中的浓度（100mL 水样），计算出平行测定的标准偏差，按公式MDL= t(n-1，0.99)×S 计算方法检出限。式中，n 为样品的测定次数；自由度t为n-1，置 信度99%时的t分布（单侧），S为标准偏差。结果见表1。检出限低于GB 3838-2002 中集中式生活饮用水地表水待定项目的标准限值，能够满足地表水中溴氰菊酯测定的要求。

图4 溴氰菊酯标准色谱图

表1 溴氰菊酯的方法检出限

2.4 精密度与加标回收率试验

在已知含量的地表水样品中分别添加不同浓度的溴氰菊酯标准溶液，每个浓度的加标样品分别平行测定6 次，计算其精密度和加标回收率，结果见表2。由表2 可以看出，方法的平均回收率在88%～112%之间，精密度在 1.6%～10.6%之间，符合生活饮用水标准检验方法要求。

表2 精密度与回收率结果

3 结论

本实验采用高效液相色谱-反相色谱柱对地表水中的溴氰菊酯进行检测，具有分离效果较好﹑灵敏度高﹑分析速度快等优点，利用该分析方法对地表水中溴氰菊酯进行分析监测，结果令人满意，能够满足地表水中溴氰菊酯监测的要求。

[1] 胡春容.拟除虫菊酯农药的毒性研究进展[J].毒理学杂志，2005(3)：239-241.

[2] 黄建勋，梁丽燕，陈润涛，等.溴氰菊酯致突变性试验研究和评价[J].卫生毒理学杂志，2001(4)：234-236.

[3] 陆勋元，蒋永祥.气相色谱法同时检测和分析蔬菜中毒死蜱, 氯氰菊酯和氰戊菊酯的残留量[J].理化检验：化学分册，2006，42(9)：737-739.

[4] 郑伟华，赵建庄，马德英，等.溴氰菊酯的毒性和致突变性的研究进展[J].北京农学院学报，2004，19(1)：77-80.

[5] GB/T 5750.9-2006，生活饮用水标准检验方法 农药指标[S].

[6] 史亚俊，魏朝俊，贾临芳，等.正相高效液相色谱法测定梨中5 种菊酯类农药多残留[J]. 北京农学院学报，2009，23(4)：25-28.

[7] 王吉顺，刘济平，董训学.正相液相色谱法测定原药和乳油中的溴氰菊酯[J].农药，1993(3)： 30.

[8] 杨韶松，陈静，唐旭斌.气相色谱法测定溴氰菊酯在香料烟中残留量[J].理化检验：化学分册，2012，48(12)：1500-1501.

[9] 曹军，陈勇，杨瑞章，等.分散固相萃取分离-气相色谱法测定银鱼中拟除虫菊酯类农药残留量[J].理化检验：化学分册，2010(10)：1176-1178.

[10] 陈健航，叶瑜霏，程雪梅.分散固相萃取-气相色谱-质谱联用法检测葱﹑韭菜和姜中多种农药残留[J].质谱学报，2011，32(6)：341-349.

[11] 金珍，林竹光.气相色谱-负化学离子源/质谱法测定鱼肉中残留农药[J].理化检验：化学分册，2009，44(12)：1141-1144.

[12] HJ 168-2010，环境监测分析方法制修订技术导则[S].