牛结核分枝杆菌γ—干扰素在牛结核病检测中的优势

孙涛

牛结核病是由牛结核枝杆菌引起的一种人畜共患的慢性传染病。近年来，人结核病阳性检出率逐年上升，世界卫生组织在1993年4月宣布“全球结核病紧急状态”，1998年又重申“遏制结核病的行动刻不容缓”，并将每年3月24日定为“世界防治结核病日”。根报道，约有10.6%的人结核是由牛分枝杆菌引起的，牛结核病中的7%是由人结核杆菌引起。WHO同时指出，在那些还存在牛结核病的国家中，人类始终受到牛结核病的威胁，除非着手将其消灭，否则人类结核病的防治是不会成功的。因此，控制牛结核病的是关系到控制人类结核病能否成功的重要因素。

1 流行特点

牛结核分枝杆菌可以感染不同种属的温血动物，甚至包括一些禽类，其中牛是家畜中最易感的，特别是奶牛。该病主要通过呼吸道和消化道传播，也可通过交配传播。结核病牛可通过痰液、奶、粪便等向外排出結核杆菌污染环境，吸入被污染的飞沫是牛结核病传染的最主要方式，且少量牛分枝杆菌即可引起感染。采食有传染的粘液、粪便、尿液甚至牛奶都可引起感染。人类多因牛结核分枝杆菌或结核分枝杆菌感染而致病，其感染途径主要是食入未经检疫的畜产品，尤其是饮用未经巴氏消毒或煮沸的患有结核牛的奶而经消化道感染，犊牛感染牛结核分枝杆菌者最多。另外，经常与患结核病牛接触的人员，可由于病畜的咳嗽而经呼吸道感染结核病。牛结核病不仅古老，而且分布很广，世界各地都有发生。美国是世界上第1个消灭牛结核病的国家，美国早在1957年就宣布为无结核病牛群，但由于其他动物感染结核杆菌，特别是野生动物和观赏动物的结核病以及人类结核病的存在，有感染牛的可能性，所以美国的牛群仍在不断地接受检疫并被处于高度戒备之中。在广大的第三世界国家仍严重地流行，感染率在5%～10%不等，高者可达20%，严重影响着人类的健康和养牛业的发展。

近年来，我国奶牛养殖规模不断扩大，牛饲养量迅速增长，饲养模式呈现多元化，牛结核病的风险随之增加，控制和消灭牛结核病已经成为主要目标之一。控制牛结核病传播和蔓延的主要措施是对牛群实施检疫净化，及时检出和扑杀病牛，最终建立无结核病牛群。我国国务院发布了《关于促进奶牛持续健康发展的意见》，强调完善奶牛重大疫病防治和扑杀政策，将患结核病而强制扑杀的奶牛，列入畜禽疫病扑杀补贴范围。因此，牛结核病的最终净化必须依赖快速、敏感、特异的诊断方法。

2 检测方法

牛结核检测的方法主要有细菌学检测、免疫学检测、分子生物学诊断方法。传统的细菌学检测方法主要有抗酸染色法和细菌分离培养法，而抗酸染色后的镜检灵敏度很低，采样不合格的标本阳性率更低，极易出现漏诊，并无法区分耐药结核分枝杆菌；由于结核分枝杆菌生长缓慢分离率低，而且需要进行屠宰采样，固不适用于活畜检疫。免疫学检测主要有结核菌素皮内试验、比较结核菌素试验、血清学诊断、IFN-γ试验。目前，世界卫生组织推荐的牛结核病的检测诊断方法仍是结核菌素（PPD）变态反应试验。由于迟发性变态反应的滞后性，此方法不能在一段时间（30天）内重复进行，需要长时间才能出结果，操作繁琐，对奶牛的刺激较大，易造成产奶量下降。此外，由于提纯结核菌素皮肤试验个体差异较大，注射剂量和结核菌素批号对牛个体反应均有差异，会呈现不同的皮肤反应，其结果以皮肤厚度的增加数为准，易造成人为误差。IFN-γ试验是快速诊断牛结核病的检测方法，即在体外用禽型和牛型PPD刺激牛血，检测释放在牛血中的IFN-γ水平，显著提高了检测牛结核病的敏感性和特异性，而且由于减少了操作盒解释上的主观性，使结果更为客观、可靠。1991年澳大利亚健康委员会将该方法确定为检测牛结核病的正式方法。由于全血IFN-γ水平对结核分枝杆菌感染的检测具有高度的敏感性和特异性，该技术为结核病的早期诊断提供了新的方法，目前OIE已经将γ-干扰素试验列为国际贸易结核病检测指定使用的替代方法，而且有商品化的试剂盒供应，并获准用于欧盟、美国、新西兰、澳大利亚等国家的结核病控制计划。

3 试验原理

牛结核分枝杆菌皮内结核菌素试验的原理是机体受到结核杆菌刺激时，导致T淋巴细胞转变为淋巴母细胞，进而增殖分化为致敏淋巴细胞，使机体致敏。如再次接触结核杆菌时，致敏淋巴细胞即释放出各种淋巴因子，发生迟发型变态反应，出现以单核细胞浸润，以及由于巨噬细胞释出深酶体酶和淋巴细胞释出淋巴毒素所引起的组织坏死为特征的病理现象。皮内注射提纯结核菌素于健康动物，不出现显著的局部炎症反应。如果将其注入曾感染结核病的动物，便发生迟发型超敏感性应答，注射几小时后注射局部出现红斑、水肿及肿胀硬固等炎性反应。注射27～72小时反应程度最强，以后逐渐消退。

与皮内变态反应相比IFN-γ试验是使用两种单抗的夹心ELISA，提高了试验的特异性，克服了结核菌素皮内变态反应容易出现假阳性的不足；皮内变态试验一般需要72小时之后才能观察结果，比较费时，劳动强度大，而该试验只需要保定1次动物，省时省力；皮内变态反应结果判定人为因素影响较大，而该试验有商品化试剂盒提供，容易实现标准化、比较科学和客观。IFN-γ试验具有检测早期感染的能力，平行进行2种试验能够检测出更多数量的感染动物。基于上述种种优势，IFN-γ试验现在已在很多国家的结核病控制计划中用作繁殖试验来增强特异性，用作平行试验来增强敏感性。

结核菌素皮内变态反应被OIE列为国际贸易指定使用的试验，也是我国国家标准规定的检测方法。鉴于该方法也有其局限性，单靠结核菌素试验结果不可能从畜群中完全根除结核病。IFN-γ试验是OIE规定的国际贸易指定使用的替代试验，可以作为普查牛结核病的平行试验，以最大限度地检出被感染动物，也可作为牛结核病普查的繁殖试验对皮内变态反应结果进行确认，对今后牛结核病检疫工作具有巨大的推动意义。