血浆miR—155在急性心肌梗死伴高血压患者中的表达水平及临床意义

杨占甲

【摘  要】本文通过探讨血浆microRNA-155（miR-155）在急性心肌梗死伴高血压中的表达变化及临床意义得到以下结论：血浆miR-155在急性心肌梗死伴高血压患者血浆中表達升高且表达水平与冠状动脉狭窄程度相关，提示血浆miR-155可能作为生物标志物用于临床诊断及治疗评价。

【关键词】急性心肌梗死伴高血压;血浆微小155;实时荧光定量PCR

Abstract：This paper discusses the plasma mirna - 155（miR - 155）in acute myocardial infarction with hypertension expression changes and clinical significance of get the following conclusion：The plasma miR - 155 in patients with acute myocardial infarction with hypertension expression increased in plasma and the expression level and the degree of the coronary artery stenosis，prompt plasma miR - 155 May be used as biomarkers in clinical diagnosis and treatment of evaluation.

Key words：acute myocardial infarction with hypertension Plasma tiny 155 Real-time fluorescent quantitative PCR

miRNA是一类生物进化高度保守、长度为21-26核苷酸的小分子非编码单链RNA，通过对其靶基因的降解或转录后抑制调节基因表达，与生物个体发育、细胞分化增殖及肿瘤发生发展等生理病理方面具有重要生物学功能^[1]。

本实验应用荧光定量PCR技术检测急性心肌梗死伴高血压患者血浆miR-155的表达水平，同时通过Gensini评分系统评价冠状动脉狭窄程度，分析急性心肌梗死伴高血压患者血浆miR-155与狭窄程度关系，探讨血浆miR-155作为急性心肌梗死伴高血压诊断和预后生物学标记物的可能性。

1材料与方法

1.1标本收集

选取2011年2月至2011年9月郑州大学第一附属医院心内科急性心肌梗死伴高血压患者30例为测定组，其中男性20例，女性10例，平均年龄60±5.87岁，AMI组及健康者为对照组，其中AMI组男性17例，女性13例，平均年龄59.05±6.94;健康对照组，男性9例，女性7例，平均年龄58.81±5.63。所以入选病人参照2010年ACC/AHA发布的心血管诊疗指南标准诊断。所有患者均签署知情同意书，并获得所在医院伦理委员会批准。

1.2主要试剂及仪器

TRI REAGENTBD购自美国MRC Gene公司;RT反转录试剂盒购自日本TAKARA公司;荧光定量PCR试剂盒购自日本TAKARA公司;引物由广州锐博生物有限公司合成。普通PCR仪采用美国Bio-Rad公司;NanoDrop2000c紫外分光光度计采用美国赛默飞世尔公司;Lightcycler1.5荧光定量PCR仪采用瑞士罗氏公司。

2.方法

2.1 总RNA提取：TRI REAGENTBD试剂从200ul血清中提取总RNA，实验步骤严格按照实际说明书进行。NanoDrop2000c紫外分光光度计测定RNA的浓度和纯度。选取A260/A280比值在1.8-2.1之间的样品用于实验。

2.2 逆转录（RT）：按照逆转录试剂盒说明书配20ul反应体系，反应条件为42 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，转录得到cDNA用于qRT-PCR反应。

2.3 实时荧光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）：反应体积为合成cDNA作为模板，按照qRT-PCR试剂盒说明书进行操作，反应条件为95℃30sec，1个循环;95℃5sec，60℃20sec为40个循环。反应结束后计算机自动得出各毛细管Ct值。

2.4 相对表达量计算：血浆miR-155的相对表达量采用2^-ΔΔCt方法计算，使用均数±标准差（±s）表示。

2.5 统计学分析：SPSS 17.0软件采用Kruskal-Wallis秩和检验及AVONA方差分析对实验结果进行统计处理，以P<0.05有统计学意义。

3.结果

3.1血浆miR-155在ACS组与对照组血浆中的表达：在qRT-PCR结果中，miR-328，miR155与U6均显示出可靠的Ct值。结果如下：

（1）急性心肌梗死伴高血压组血浆miR-155表达水平为（16.34±6.26），急性心肌梗死组血浆miR-155表达水平为（2.61±1.53），健康组血浆miR-155表达水平为（1.00±0.00）。三组间采用Kruskal-Wallis秩和检验进行分析显示，血浆miR-155在急性心肌梗死伴高血压组的表达高于对照组（P <0.05）。

3.2 血浆miR-155表达水平与冠状动脉狭窄程度的关系

利用Gensini评分系统对冠状动脉危险程度分为三组，A组表达量为（14.03±1.37），B组表达量为（16.57±0.73），C组表达量为（19.20±1.51），血浆miR-155在高积分组的表达量高于低积分组（P<0.05）。

4 讨论

miRNAs是一类长度介于19-25个核苷酸的单链非编码RNA，通过特异性与靶基因mRNA的3非编码区结合^[2]，抑制靶基因的翻译或促进靶基因降解，进而调控靶基因的表达，在细胞的增殖、分化、凋亡等方面发挥着重要作用。

急性心肌梗死发病率日益上升，具有发病率和死亡率高的特点。高血压是导致AMI的危险因素之一，急性心肌梗死患者往往伴随高血压。本实验血浆miR-155在急性心肌梗死伴高血压患者血浆中表达升高且表达水平与冠状动脉狭窄程度相关，提示血浆miR-155可能作为生物标志物用于临床诊断及治疗评。

miRNA主要通过与靶基因的非编码区结合抑制翻译来调控基因的表达，目前miRNA参与发病机制中的具体靶基因仍不清楚，我们将进一步的探索miR155在AMI伴随高血压病理生理调控网络中的作用机制。

参考文献：

[1]He L，Hannon GJ.MicroRNAs：small RNAs with a big role in gene regulation.Nat Rev Genet，2004，5（7）：522-531.

[2]Bartel DP.MicroRNAs：genomics，biogenesis，mechanism，and function.Cell，2004，116（2）：281-297.