如何用RP—HPLC测定硝苯地平片的含量

李宝媛

【摘 要】目的：分析如何采用RP-HPLC测定硝苯地平片中各种成分的含量，旨在为同行日后工作提供参考。方法：采用电子天平C18色谱柱来检测硝苯地平片中的乙腈-甲醇含量，且就这些含量的比例做了说明。结果：硝苯地平线性范围为0.05～0.55mg·ml-1范围内呈现出良好的流性关系。结论：以反相高效液相色谱法分析硝苯地平片中的含量有着精密度高、准确性好、可靠且灵活的优势，可以适用其中各种不同成分的测量。

【关键词】RP-HPLC；硝苯地平片；含量；测定；色谱柱；色相

硝苯地平片在当今临床诊疗中很常见，是钙通道阻滞治疗中的常见药物，有着抑制心肌对钙离子社区的作用，而且能有效降低心肌兴奋引起的收缩偶联ATP酶的作用。就我国2005年颁布的《中华药典》将其列为心绞痛、高血压临床诊疗的主要药物。因此，这里我们有必要利用RP-HPLC对其含量进行测定。

1.一般资料

硝苯地平片在目前的临床诊疗中，主要用于心绞痛和高血压治疗中。在心绞痛的临床诊疗中，这一药物主要应用在不稳定性心绞痛、慢性稳定型心绞痛诊疗中；高血压诊疗中常常都将这种药物作为降压药使用。硝苯地平片的主要含量也就是硝苯地平，它的化学名称为2，6-二甲基-4（2-硝基苯基）-1，4-二氢-3，5-吡啶二甲酸二甲酯。，其化学分子式为：分子式：C17H18N2O6。目前我国医疗工作中所采用的硝苯地平片用化学方式结构表示如下：

1.1仪器的选择

在本次试验中所选择的仪器主要为高效液相色谱仪、紫外检测器以及电子天平。这些设备在选择之前都对设备的型号、种类做了严格的检查。高效液相色谱仪在选择中主要以waters2695型号为主，紫外线检测器则为waters2487为主的，电子天平选择了CP225D型号。

1.2药物选择

本次试验中选择的硝苯地平片的规格为10mg·片。该硝苯地平片与我国2005年颁发的《中华药典》中的药物相同，在甲醇、乙腈检测条件下表现出色谱纯的现象，在其他试剂检测之后表现出分析纯，水主要选择了蒸馏水。

2.检测方法和结果

2.1溶液的制备

首先，配备对照溶液，在具体工作中提前利用电子天平称取硝苯地平片10mg并置放在已经准备好的50ml的容量瓶中，并且在瓶中加入5ml的甲醇，采用振摇的方式让甲醇迅速的溶解，并且检查流动相的稀释程度。

其次，配备供试品溶液。此次的配备提前提取硝苯地平片20片，出去外皮包衣之后进行称量，然后对称量好的硝苯地平片研磨。精密称取这些研磨得出的细粉，加入到100mL的量瓶当中，然后加入10ml的甲醇，也采用振摇的方式让甲醇迅速的溶解，添加流动相稀释至刻度之后然后摇匀，过滤。

2.2色谱条件

经过大量的问下查阅得出，这些溶液的色谱条件如下：流动相主要表现出水-甲醇的流动比，其比值为40：60，在这一比例下流动相表现的最为突出和明显，此时流动相的波长为235nm，流速为10m·min-1。此时的温度为恒温状态，即30℃。在这些条件下，色谱条件理论值为4200，具体的色谱图如图2所示。

2.3耐用性和系统适用性

取供试品溶液，在不同品牌的色谱柱（SunFireC184.6mm×250mm，5.0μm或GeminiC184.6mm×250mm，5.0μm），不同的液相色谱仪（WaterS2695系统EmpoWer工作站、LC-20ATVP），不同流动相系统，不同的pH等试验条件下，进行分析比较，考察方法的耐用性，测定结果见表1。

2.4线性关系考察

精密量取硝苯地平对照品25mG，置250mL量瓶中，加25mL甲醇溶解后，以流动相定容至250mL摇匀，即得对照品储备液。量取对照品储备液2，3，4，5，6，7mL，分别置50mL量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，制成系列溶液。

2.5回收率试验

精密称取硝苯地平片处方量的80%，100%，120%的硝苯地平对照品各3份，分别置预先按硝苯地平的其他处方量的100mL量瓶中，加10mL甲醇溶解后，以流动相定容至100mL摇匀，按“含量测定”项下方法测定，按外标法计算。低、中、高3种浓度的回收率（n=3）分别为99.8%（RSD=1.0%），99.9%（RSD=0.64%），100.7%（（RSD=0.93%）；回收率平均值（n=9）为100.1%。

2.6含量测定

精密称取硝苯地平样品25mG于250mL量瓶中，加入25mL甲醇溶解，以流动相定容至250mL。精密量取供试品溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图。另取硝苯地平对照品溶解于甲醇中（约1mG·mL-1），以流动相稀释至0.1mG·mL-1，同法测定。按外标法以峰面积计算，测得3批样品中硝苯地平含量分别为标示量的98.1%101.7%，98.8%。

3.讨论

3.1本品遇光极不稳定

由于分子内部发生光歧化作用，降解为硝基苯吡啶衍生物及亚硝基苯吡啶衍生物，分别为4-（2-硝基苯基）-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸二甲酯（Ⅰ）和4-（2-亚硝基苯基）-2，6-二甲基吡啶-3，5-二羧酸二甲酯（Ⅱ），后者对人体极为有害，注意生产及检验过程中均应注意避光，故本品在供试品液及对照品液制备以后避光测定，防止光化性光的破坏。

3.2检测波长的选择

鉴于硝苯地平杂质结构与主成分结构类似，在UV图谱中吸收情况基本一致或相近，进一步通过液质联用试验分析对照品与自制样品杂质的一致性，结果确定主峰、杂质峰及大部分离子峰m/z相同，结合紫外分光光度计记录紫外吸收曲线图，最终确定最大吸收波长235nm为检测波长。

3.3流动相的选择

分别选用水-乙腈-甲醇（50：25：25）、甲醇-水（3：2）为流动相系统，均未达到理想的效果，终因主成分保留时间过长等原因；最终选择了水-乙腈-甲醇（30：35：35）为流动相，其基线稳定，漂移和噪音极小，提高了检测灵敏度。

4.结束语

本品采用紫外-可见分光光度法进行含量测定，受辅料干扰较大，尤其在短波长处更甚，在分次定量转移时易造成損失；采用高效液相色谱法进行含量测定，检测灵敏度高，易区分结构相似的杂质，可省略掉稀释试验步骤，缩短检验时间，尽可能避免遇光分解，大大提高试验效率。 [科]

【参考文献】

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[2]范国荣，林梅，安登魁.硝苯地平血药浓度测定的高效液相色谱法[J].中国临床药学杂志，2010（04）.

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