大豆种质对胞囊线虫1号小种抗性
2015-10-21张彦威等
张彦威等
摘要:本研究以15份大豆种质为材料,采用抗病基因型鉴定和人工接种鉴定的方法,探讨了Satt309和Sat_210标记对胞囊线虫1号小种抗性的选择效率。结果表明,Satt309对胞囊线虫1号小种抗性的选择效率为50%,Sat_210对胞囊线虫1号小种抗性的选择效率为87.5%,Satt309和Sat_210的标记组合可以提高对胞囊线虫1号小种抗性的选择效率,达100%;获得8份抗胞囊线虫1号小种的大豆种质,分别是Peking、高作选1号、齐黄28、齐黄30、齐黄33、齐黄29、齐黄31和沧豆11。
关键词:大豆胞囊线虫病1号小种;分子标记;抗性鉴定
中图分类号:S565.103.3文献标识号:A文章编号:1001-4942(2015)05-0086-03
SSR Marker Assisted Identification on
Resistance of Soybean Cultivars to Soybean Cyst Nematode Race 1
Zhang Yanwei,Li Wei,Guo Junxian,Hu Ban,Zhang Lifeng,Wang Caijie,Zhang Jun,Xu Ran*
(Crop Research Institute,Shandong Academy of Agricultural Sciences,Jinan 250100,China)
AbstractTaking 15 soybean cultivars as materials,the selection efficiency of Satt309 and Sat_210 for the resistance to SCN race 1 was studied by the methods of resistance genotype identification and artificial inoculation identification. The results showed that the selection efficiency of Satt309 and Sat_210 were 50% and 87.5% respectively,and the combination of Satt309 and Sat_210 could improve the selection efficiency to 100%.Eight soybean cultivars were confirmed with the resistance to SCN race 1 including Peking,Gaozuoxuan 1,Qihuang 28,Qihuang 30,Qihuang 33,Qihuang 29,Qihuang 31 and Cangdou 11.
Key wordsSCN race 1;Molecular marker;Resistance identification
大豆胞囊线虫病(soybean cyst nematode, SCN)是世界大豆生产的毁灭性病害,也是我国大豆的主要病害之一,以黄淮海和东北大豆产区受害较为严重,严重地块减产50%以上,甚至绝产。选育和推广抗线虫的大豆品种是最经济有效的防治措施。然而,由于大豆胞囊线虫病是土传病害,存在着土壤病原物分布不均、病害点片发生等特点,造成大豆杂交后代材料抗病性鉴定不准确,对抗病植株选拔的准确性差,也导致育种效率低。
分子标记技术从二十世纪七十年代中期开始孕育,八九十年代蓬勃发展起来,并广泛应用在植物抗病育种中,在加速育种进程中起着重要作用。目前已发现3个隐性基因rhg1、rhg2和rhg3和1个显性基因Rhg4控制大豆胞囊线虫病抗性,其中rhg1在很多抗病种质中均存在,被认为是抗大豆胞囊线虫病害的主效基因位点。
本研究选用与rhg1紧密连锁的Satt309和Sat_210标记,对15份大豆种质进行基因分型,结合温室人工接种鉴定SCN 1号小种抗性,分析标记的选择效率,以期为分子标记辅助鉴定SCN 1号小种抗性提供理论依据。
1材料与方法
1.1材料
供试品种是本课题组保存的优良大豆种质,包括Peking、齐黄35、高作选1号、6063、齐黄31、菏豆18、徐豆14、皖宿135、齐黄33、沧豆11、济087129、诱变30、齐黄30、齐黄28、齐黄29。
1.2方法
1.2.1大豆种质对SCN抗性的人工接种鉴定2014年在山东省农业科学院温室盆栽种植大豆材料,试验病土为胞囊线虫1号小种病土,取自山东省农业科学院作物研究所试验农场。病土充分混合后装入直径为12 cm的塑料钵,每个品种10钵,每钵留苗1株,出苗后30~ 40 d调查每株根系胞囊数目,取平均值进行抗病等级分级。大豆对胞囊线虫病的抗性分级采用国家标准:GB/T19557.4-2004(表1)。
1.2.2大豆种质对SCN 抗性的SSR辅助鉴定利用Tiangen公司的基因组DNA提取试剂盒提取样品基因组DNA,经分光光度计检测OD260/OD280,调整到适合浓度备用。选择与rhg1抗病基因连锁的SSR标记Satt309和Sat_210进行基因型分析,引物序列在www.soybase.org查询获得(表2)。PCR程序:95℃ 5 min;95℃ 30 s,55℃ 30 s,72℃ 30 s,35个循环;72℃ 10 min。扩增产物利用8%非变性聚丙烯酰胺电泳分离,银
染显色观察结果。
1.2.3数据分析利用Microsoft Excel 2010进行数据处理及统计分析。endprint
2结果与分析
2.1大豆种质对SCN抗性的人工接种鉴定
人工接种鉴定结果(表3)表明:Peking、高作选1号、齐黄28、齐黄30、齐黄33等5份品种表现为高抗SCN 1号生理小种;齐黄29、齐黄31、沧豆11等3份品种表现为中抗SCN 1号生理小种;徐豆14、皖宿135、齐黄35、诱变30、菏豆18等5份品种表现为感SCN 1号生理小种;6063、济087129等2份品种表现为高感SCN 1号生理小种。
2.2大豆种质对SCN抗性的SSR标记辅助鉴定
利用SSR标记Satt309对15份大豆种质进行分析(图1),与抗性对照Peking带型相同的种质6份,即徐豆14、皖宿135、诱变30、齐黄28、齐黄29、齐黄30,其中齐黄28、齐黄29、齐黄30等3份种质表现为抗SCN 1号生理小种,选择效率50%;与抗性对照Peking带型不同的种质8份,其中菏豆18、济087129、齐黄35、6063等4份种质表现为感SCN 1号生理小种,选择效率50%。
利用SSR标记Sat_210对15份大豆种质进行分析(图2),与抗性对照Peking带型相同的种质8份,即齐黄31、齐黄33、沧豆11、齐黄35、高作选1号、齐黄28、齐黄29、齐黄30,其中沧豆11、高作选1号、齐黄28、齐黄29、齐黄30、齐黄31、齐黄33等7份种质表现为抗SCN 1号生理小种,选择效率87.5%;与抗性对照Peking带型不同的种质6份,其中徐豆14、皖宿135、诱变30、荷豆18、济087129、6063等6份种质表现为感SCN 1号生理小种,选择效率100%。
利用Satt309和Sat_210同时进行分析(图1,图2),与抗性对照Peking带型相同的种质3份,即齐黄28、齐黄29、齐黄30,均表现为抗SCN 1号生理小种,选择效率100%;与抗性对照Peking带型不同的种质3份,即6063、菏豆18、济087129,均表现为感SCN 1号生理小种,选择效率100%。
3结论与讨论
Satt309是目前抗SCN分子标记辅助育种中应用最广泛的选择效率最高的SSR标记,但在本研究中,由于徐豆14、皖宿135、诱变30等3个感病品种与重要抗源Peking存在相同等位变异而降低了其选择效率,同时齐黄31、齐黄33、沧豆11、高作选1号等4个抗病品种存在与抗源Peking不同的等位变异也使Satt309的选择准确性减低。卢为国等在对大豆SCN 1号生理小种抗性的研究中发现,与Sat_210共分离的rhgR1-1位点能够解释20%以上的SCN 1号小种抗性。本研究利用2个SSR分子标记辅助鉴定了15份大豆种质对SCN 1号生理小种的抗性,获得8份抗SCN 1号小种的种质,即Peking、高作选1号、齐黄28、齐黄30、齐黄33、齐黄29、齐黄31和沧豆11。利用Sat_210结合Satt309进行双标记可以提高对SCN 1号小种抗性的选择效率,达100%。
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