龙眼壳总黄酮的HPLC图谱分析

韩淑琴，李志锐，吴丽

（1.中山职业技术学院，广东中山，528404；2.华南农业大学食品学院，广东广州510642）

龙眼壳总黄酮的HPLC图谱分析

韩淑琴1，李志锐1，吴丽2

（1.中山职业技术学院，广东中山，528404；2.华南农业大学食品学院，广东广州510642）

采用HPLC法以芦丁标准品为对照品，对经超声-微波协同萃取，并且经过AB-8大孔径树脂柱层析纯化的龙眼壳总黄酮进行定性分析。色谱柱条件为：C18柱，流动相为甲醇-水（25∶75），波长254 nm，流速0.5 mL/min，柱温为室温，进样量为2 uL的条件下进行检测。结论：龙眼壳样品中总黄酮含量达23.43 mg/g，龙眼壳总黄酮的主要成分为芦丁，在龙眼壳总黄酮初步纯化样品中芦丁含量达到63.95%。

龙眼壳；总黄酮；高效液相色谱

龙眼（longgan）俗称“桂圆”，是我国南亚热带名贵特产，历史上有南“桂圆”北“人参”之称［1］。在我国龙眼主要分布于广西、广东、福建等省。中山市位于中国华南地区广东省珠江三角洲中南部，珠江出海口西岸，中山市适宜龙眼生长，有5 000多亩的龙眼种植面积。目前国内外针对龙眼的研究主要集中在龙眼肉和龙眼核的活性成分方面，对龙眼壳的研究较少，且尚且停留在龙眼壳总体成分的研究阶段。有文献表明龙眼的茎、叶、花、果、壳中均含有丰富的黄酮类物质［2-4］，本文采用高效液相法对经大孔径树脂柱层析纯化后的龙眼壳总黄酮进行分析。

1材料与方法

1.1 材料与试剂

龙眼壳、AB-8大孔树脂、无水乙醇、甲醇、芦丁标准品（中国药品与生物制品检定所）等，所用化学试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

美国惠普HP-1100高效液相色谱仪；玻璃层析柱；CW-2000型超声-微波协同萃取仪：中国上海新拓微波溶样测试技术有限公司；DHG-9245A型电热鼓风干燥箱：上海一恒科学仪器有限公司；RE-5299型旋转蒸发仪：上海耀裕仪器。

1.3 方法

1.3.1 龙眼壳总黄酮样品溶液制备

取市售石峡龙眼的果壳，低温烘干后粉碎，精确称取龙眼壳粉末20 g，用70%乙醇溶液，以固液比1∶25的比例浸泡1 h，采用超声微波协同萃取法，提取总时间为60 s，其中超声微波每作用20 s暂停10 s，提取得到龙眼壳总黄酮粗提物，回收乙醇处理后，将龙眼壳总黄酮粗提物用30%乙醇溶液定容至10 mL，将上述龙眼壳总黄酮溶液通过AB-8大孔径树脂进行柱层析纯化，采用浓度为80%的乙醇溶液30 mL进行洗脱，接收洗脱液，洗脱液定容至50 mL，得龙眼壳总黄酮初步纯化样品，冷藏备用。

1.3.2 高效液相色谱柱条件

色谱柱条件为：C18柱，流动相为甲醇-水（25∶75），波长254 nm，流速0.5 mL/min，柱温为室温，进样量为2 uL的条件下进行检测。

1.3.3 标准曲线的制备

1.3.3.1 芦丁标准品溶液制备

称取50mg芦丁标准品，用适量30%甲醇溶解后定容至100 mL容量瓶，摇匀。精密吸取标准品溶液1.0、2.0、4.0、5.0和7.0 mL至10.0mL碘量瓶中，加30%甲醇稀释定容至刻度，摇匀，即得0.05、0.1、0.2、0.25和0.35 mg/mL的溶液。

1.3.3.2 线性关系考察

在上述色谱条件下，将各浓度标准品溶液分别进样2 uL，测峰面积。以峰面积为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线，计算回归方程。

1.3.4 芦丁标准品检测

精确吸取经微孔滤膜过滤后的芦丁标准品溶液2 μL进样，在上述高效液相色谱条件下分析测定芦丁标准品。

1.3.5 样品检测

精确吸取经微孔滤膜过滤后的龙眼壳总黄酮样品溶液2 μL进样，在上述高效液相色谱条件下分析测定龙眼壳总黄酮样品。

2结果与分析

2.1 标准品线性关系

在实验设定色谱条件下，分别进样标准溶液，测各浓度标样所得峰面积。则以峰面积为纵坐标，标准品浓度为横坐标，绘制标准曲线，进而计算回归方程。

芦丁标准曲线方程为：Y=1 347.3X-27.63，R2= 0.999 1。则由数据可以分析得出标准品具有良好线性关系。

2.2 标准品与样品HPLC测定分析

根据2.1中的回归方程计算得龙眼壳总黄酮初步纯化样品中芦丁浓度和含量结果见表1。

由图1、2可以确定龙眼壳总黄酮中主要成分为芦丁，且经AB-8大孔径树脂柱层析纯化后样品中芦丁含量达63.95%，浓度达9.37 mg/mL，则根据1.3.1中龙眼壳用量20 g及所得初步纯化龙眼壳总黄酮样品液体积50 mL，计算可得龙眼壳样品中总黄酮含量为23.43 mg/g。

图1 芦丁标准品HPLC色谱图Fig.1Rutin standard HPLC Atlas

图2 龙眼壳黄酮样品HPLC色谱图Fig.2Longgan shell flavones HPLC Atlas

表1 样品的HPLC检测结果Table 1The HPLC test resuLts of the sample

3结论

采用HPLC法对经AB-8大孔径树脂柱层析纯化后的龙眼壳总黄酮提取液中有效成分进行定性定量分析。在色谱柱为C18柱，流动相为甲醇-水（25∶75），波长254 nm，流速0.5 mL/min，柱温为室温，进样量为2 uL的条件下进行检测。结果表明：龙眼壳样品中总黄酮含量达23.43 mg/g，龙眼壳总黄酮的主要成分为芦丁，在龙眼壳总黄酮初步纯化样品中芦丁含量达到63.95%。

［1］刘玉英.我国的龙眼［J］.中国土特产，2000（2）：25

［2］叶自行，许建楷.龙眼高产技术问答［M］.广州：广州科技出版社，2001：56

［3］廖娜.龙眼科化学成分的研究.硕士论文［D］.南宁：广西师范大学，2006

［4］陆海峰，赵进，李琳，等.超声波提取龙眼叶总黄酮及其鉴别［J］.微量元素与健康研究，2007，24（4）：48-49

Analyse the Longan Shell Total Flavanone by HPLC

HAN Shu-qin1，LI Zhi-rui1，WU Li2
（1.Zhongshan Polytechnic，Zhongshan 528404，Guangdong，China；2.South China AgricuLtural University College of Food Science，Guangzhou 510642，Guangdong，China）

Using HPLC method with rutin standard as the

ubstance to analyse the longan shell total flavanone sample which extracted by ultrasonic-microwave way and purified by AB-8 Large aperture resin column.The data of the chromatographic column were：C18 column，Mobile phase is methanol：water（25∶75），Wavelength 254 nm，flow rate 0.5 mL/min，room temperature，Sample size：2 uL.Result：the total flavanone concentration is 23.43 mg/g in longan shell sample，and Rutin is the main component of the longan shell total flavanone，the concentration reached 63.95%.

longan shell；total flavanone；HPLC

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.09.027

2014-01-14

中山市科技计划项目（项目编号：20123A340）

韩淑琴（1980—），女（汉），讲师，硕士，主要研究方向：天然产物有效成分提取与应用。