响应面法优化南美白对虾复合生物保鲜工艺的研究

王　玲，田　凤，徐　路，陶苗苗

（广东海洋大学食品科技学院，广东湛江524088）

响应面法优化南美白对虾复合生物保鲜工艺的研究

王玲，田凤，徐路，陶苗苗

（广东海洋大学食品科技学院，广东湛江524088）

在单因素实验的基础上，利用Box-Behnken中心组合实验设计及响应面（RSM）分析，研究三种复合生物保鲜剂对南美白对虾冷藏保鲜效果的影响。以冷藏6d的南美白对虾细菌总数为考核指标，并采用Design-Expert软件对复合生物保鲜剂与细菌总数之间建立的二次回归模型进行分析，获得三种复合生物保鲜剂的最优浓度组合。结果表明：三种复合生物保鲜剂的最佳使用浓度为Nisin 0.04g/100mL、ε-PL 0.48g/100mL和TP 1.06g/100mL，细菌总数理论值为1.81×103CFU/g，三次平行验证实验细菌总数最多为1.98×103CFU/g，误差仅为9.39%，说明模型合适可信，可以用来分析和预测南美白对虾冷藏保鲜期间的细菌总数。该复合生物保鲜剂可以相互补充，协同抗菌，有效延长南美白对虾的货架期。

南美白对虾，复合生物保鲜，响应面优化

南美白对虾（Penaeus vannamei）学名凡纳滨对虾，是世界三大对虾养殖品种之一，且产量位居三大对虾之首。南美白对虾因其营养丰富，味道鲜美，矿物质和维生素含量丰富等特点，深受国内外消费者喜爱。由于南美白对虾的蛋白质和水分含量较高，使它在捕捞后极易被微生物感染而腐败变质［1］，目前已有的对虾保鲜方法尽管有多种［2］，但都存在着不同程度的化学保鲜法安全性问题或深冻导致的食品品质改变等问题，因此，研究对虾的安全保鲜技术对于提高对虾品质，促进贸易具有重要意义。

生物保鲜剂是指从动物、植物、微生物中提取的天然的或利用生物工程技术改造而获得的保鲜剂。它具有抑菌性强、安全性和稳定性好、抑菌范围广等优点，某些生物保鲜剂还具有一定的营养特性，在保鲜的同时还能改善食品的品质，提高产品附加值［3］。但是，对虾食品中的微生物结构复杂，种类繁多，某一单一的生物保鲜剂由于其特定的抑菌谱的限制而难以达到全面抑菌的理想效果，通过不同保鲜剂之间的组合，不仅可以降低单一保鲜剂的用量，还可以使不同的生物保鲜剂相互补充，协同抗菌，全面抑制腐败菌的生长，以较安全、经济和高效的方式来延长南美白对虾的货架期。

响应曲面法（Response Surface Methodology，RSM）采用合理的实验设计，能以较少的实验次数和时间对实验进行全面的分析，精确地表述因子和响应值之间的关系，建立关系模型，确定各因子及其交互作用在实验过程中对非独立变量的影响，并可以有效、快速地确定多因素系统的最佳条件［4］。RSM现已广泛应用在工艺优化控制领域［5-6］。本研究在单因素实验的基础上，采用响应曲面法中的Box-Behnken设计，以南美白对虾冷藏6d后的细菌总数为考察指标，研究生物保鲜剂对南美白对虾的冷藏保鲜效果，将保鲜剂和细菌总数之间的关系函数化，定量分析预先筛选过的三种生物保鲜剂各自及彼此之间的交互作用对对虾细菌总数的影响，并获得三种保鲜剂的最佳浓度组合，在节约成本的同时延长对虾的货架期。

1　材料与方法

1.1材料与仪器

鲜活南美白对虾在夏季（水温27℃）虾塘捕捞，加氧保活运送至实验室后加冰猝死，挑选体长10cm左右，单体重15g左右的对虾去头洗净，分组，每组180g左右；南美白对虾冷藏期间的腐败菌G-菌：希瓦氏菌属（Shewanella spp.）、假单胞菌属（Pseudomonas spp.）、气单胞菌属（Aeromonas spp.）、黄杆菌属（Flavobacterium spp.）、不动杆菌属（Acinetobacter spp.）、肠杆菌属（Enterobacteriaceae spp.）；G+菌：乳酸菌（Lactic acid bacteria）、葡萄球菌属（Staphylococcus spp.）、棒状杆菌属（Corynebacterium spp.）、微球菌属（M icrococcus spp.） 以上细菌均由本实验室之前从（4±1）℃冷藏的南美白对虾中分离并经鉴定而得；乳酸链球菌素（Nisin） 活力≥1200U/g，浙江银象生物技术有限公司；聚赖氨酸（ε-PL） 纯度≥95%，河南豫中生物技术有限公司；茶多酚（TP） 多酚含量≥98%，河南豫中生物技术有限公司；食品保鲜袋聚乙烯PE，脱普日用化学品（中国）有限公司；NaCl、柠檬酸、冰醋酸、牛肉膏蛋白胨培养基（牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠5g，蒸馏水1000m L，pH7.0～7.2）、营养琼脂、平板计数琼脂国药集团化学试剂有限公司。

SW-CJ-2F型双面垂直超净工作台、HPX-9162MBE型电热恒温培养箱、HH.S11-2型电热恒温水浴锅均为上海博讯实业有限公司；101-3-BS-Ⅱ型电热鼓风干燥箱上海跃进医疗器械有限公司；LS-B50L型高压蒸汽灭菌锅上海华线医用核子有限公司；HZQ-F160型恒温振荡培养箱常州诺基仪器有限公司；722S型可见分光光度计上海仪电科学仪器有限公司。

1.2实验方法

1.2.1三种生物保鲜剂对冷藏南美白对虾腐败菌的最小抑菌浓度（MIC）的测定采用宋丹［7］的二倍稀释法稍作改进，分别测定不同保鲜剂对南美白对虾冷藏保鲜期腐败菌的M IC。先将Nisin、ε-PL和TP分别配制成较高浓度的母液，然后在比色皿中用无菌牛肉膏蛋白胨培养基以二倍法稀释成连续的5个浓度，接入细菌浓度为5×105CFU/m L的菌悬液1m L，120r/m in、（30±1）℃条件下振荡培养12h，期间每隔2h在600nm波长处测定一次光密度（OD值），每次均以无菌培养基为标准调零，观察光密度的变化，以OD值不变的最小浓度为该保鲜剂对该腐败菌的最小抑菌浓度。实验重复三次，结果取平均值。

1.2.2单因素实验以1.2.1中生物保鲜剂对冷藏南美白对虾腐败菌的最小抑菌浓度为依据，将三种保鲜剂以不同的方法分别配制成不同的浓度梯度，具体为：用pH为2.0的柠檬酸溶液将Nisin配制成浓度为5%的母液，然后用无菌蒸馏水稀释成0.02、0.03、0.04、0.05和0.06g/100m L 5个浓度梯度；将ε-PL用无菌蒸馏水配制成浓度为5%的母液，然后同样的方法继续稀释成0.2、0.3、0.4、0.5和0.6g/100m L 5个浓度梯度；将TP用无菌蒸馏水加热溶解配制成浓度为2%的母液，然后同样的方法稀释成5个浓度梯度：0.8、0.9、1.0、1.1和1.2g/100m L 5个浓度梯度。接着将经预处理并分组的南美白对虾分别于上述各浓度梯度的保鲜液中浸泡5m in，捞起适当沥干水后用食品保鲜袋包装，于（4±1）℃条件下冷藏，时间为6d，然后按国标GB/T 4789.2-2010［8］的方法测定细菌总数。用无菌蒸馏水代替保鲜液作空白对照。实验重复三次，结果取平均值。

1.2.3响应面法优化南美白对虾复合生物保鲜剂的使用浓度根据单因素实验结果对Nisin、ε-PL和TP三种生物保鲜剂的使用浓度进行三因素三水平Box-Behnken实验设计，见表1，以保鲜剂浸泡5m in、捞起沥干水并（4±1）℃冷藏6d后的南美白对虾细菌总数为响应值（实验重复三次，结果取平均值），采用Design-Expert 7.1.6软件对数据进行回归分析，建立数学模型，并用最小二乘法拟合，参照文献［9］建立二次多项式方程为：

式中：Y为响应值（细菌总数）；A0为常数项，Ai为线性系数，Aii为二次项系数，Aij为交互项系数；Xi和Xj为自变量编码值。

表1　Box-Behnken实验因素水平编码表Table 1　Factors and levels of Box-Behnken

2　结果与讨论

2.1生物保鲜剂对冷藏南美白对虾腐败菌MIC的影响

三种生物保鲜剂Nisin、ε-PL和TP对南美白对虾冷藏保鲜期间分离到的10个属的腐败菌的最小抑菌浓度如表2所示。

表2　生物保鲜剂对冷藏南美白对虾腐败菌的MIC（g/100mL）Table 2　MIC of biological preservative to refrigerated P.vannamei spoilage bacteria（g/100mL）

从表2可以看出，每种生物保鲜剂都有其特定的抑菌谱，并且对不同细菌的MIC存在着较大差异。Nisin主要能抑制腐败菌中的G+，对G+的M IC均不高于0.03g/100m L，且对表中ε-PL和TP难以抑制的棒状杆菌有较好的抑制作用；ε-PL的抑菌谱较广，能抑制对虾腐败菌中除棒状杆菌以外的所有G+和除黄杆菌以外的所有G-；TP对部分G+和部分G-有抑制作用，对腐败菌中的G-的M IC稍高于G+，但对G-的黄杆菌的抑制效果较好。

从以上结果可以看出，将这三种生物保鲜剂复合使用，可以使它们的抑菌性能相互补充，发挥协同抗菌的作用，将冷藏南美白对虾中10个属的腐败菌进行全面抑制，用较安全和较经济的靶向抑菌的保鲜方法来延长南美白对虾的货架期，减少保鲜期因微生物导致的腐败造成的损失［10］。

2.2单因素实验

2.2.1空白对照实验将南美白对虾经预处理后用无菌蒸馏水浸泡5min，捞起沥干水后用食品保鲜袋包装，在（4±1）℃条件下进行冷藏保鲜，每天取样检测其细菌总数，结果见图1所示。

图1　对虾冷藏过程中细菌总数的变化Fig.1　Changes in bacterial amountof Penaeus Vanmamei during refrigerated storage

由图1可知，空白处理的南美白对虾初始含菌量为2.8×104CFU/g，在（4±1）℃条件下冷藏1d后，细菌总数减少为3.4×103CFU/g，这可能是因为南美白对虾在温暖的养殖水体环境中携带的某些嗜温菌在冷藏时生长受到了抑制，在这种环境下能够存活的只有一些耐低温的细菌。此后，随着冷藏时间的延长，细菌总数不断增加，至第6d，南美白对虾的细菌总数已经上升到2.4×107CFU/g，虾肉完全腐败变质，不能食用。

2.2.2Nisin对冷藏南美白对虾细菌总数的影响按1.2.2中的方法，Nisin对南美白对虾处理6d后的细菌总数影响结果如图2所示。

图2　不同浓度的Nisin对细菌总数的影响Fig.2　The effectof different concentrations of nisin to the total number of bacteria

由图2可知，在冷藏过程中，随着Nisin浓度的增加，细菌总数逐渐减少。当Nisin浓度增加为0.04g/ 100m L后，随着浓度的继续增大，细菌总数下降的趋势变得平缓，可能是由于浓度为0.04g/100m L的Nisin溶液已将腐败菌中的G+全部抑制，如果继续增大Nisin浓度，只会使溶液的pH逐渐降低，从而使pH耐受性差的细菌生长受到抑制。从前面的表2已经知道，Nisin不会对肠杆菌以外的其他G-产生抑制作用，所以细菌总数下降缓慢，因此选择0.04g/100m L为Nisin的最佳浓度。

2.2.3ε-PL对冷藏南美白对虾细菌总数的影响按1.2.2中的方法，ε-PL对南美白对虾处理6d后的细菌总数影响结果如图3所示。

图3　不同浓度的ε-PL对细菌总数的影响Fig.3　The effectof different concentrations ofε-PL to the total number of bacteria

从图3可以看出，随着ε-PL浓度的增加，南美白对虾的细菌总数呈先减少后增加的趋势，在ε-PL浓度为0.4g/100m L时，细菌总数值最少。当ε-PL浓度低于0.4g/100m L时，随着浓度的增加，被抑制的细菌种类逐渐增多，所以细菌总数下降较快；当ε-PL浓度增加到0.4g/100m L后，细菌总数反而有所增加，可能是由于ε-PL本身是一种营养物质，它分解产生的L-赖氨酸可为细菌的生长提供营养物质，促进细菌生长。所以，ε-PL的最适浓度为0.4g/100m L。

2.2.4TP对冷藏南美白对虾细菌总数的影响按1.2.2中的方法，TP对南美白对虾处理6d后的细菌总数影响结果如图4所示。

图4　不同浓度的TP对细菌总数的影响Fig.4　The effectof different concentrations of TP to the total number of bacteria

由图4可见，随着TP浓度的不断提高，细菌总数逐渐减少，当TP浓度增加到1.0g/100m L后，细菌总数减少变得缓慢。由前面表2中TP对冷藏南美白对虾腐败菌的M IC可知，1.0g/100m L的TP溶液已能将抑菌谱内的腐败菌全面抑制，且TP具有轻微的苦涩味［11］，浓度太高会影响南美白对虾的口感，也不利于节约成本，所以选择1.0g/100m L为TP的最佳浓度。

2.3响应面实验优化南美白对虾复合生物保鲜剂浓度及配比

2.3.1Box-Behnken实验结果单因素实验结果显示，Nisin浓度0.04g/100m L、ε-PL浓度0.4g/100m L和TP浓度1.0g/100m L为冷藏南美白对虾保鲜剂单独作用时的最佳浓度，在此浓度下既能保证细菌总数较低，又能避免盲目增加保鲜剂的用量造成的成本增加。按照表1的实验设计的因素水平编码表，对Nisin、ε-PL和TP的浓度作变换，以（4±1）℃冷藏6d后的南美白对虾的细菌总数为响应值，对17个实验点进行实验，中心点实验5次以估计误差，优化南美白对虾复合生物保鲜剂浓度的响应面设计方案与实验结果见表3。

表3　复合生物保鲜剂浓度的响应面实验方案与结果Table 3　The design and results of RSM of composite biological preservative

利用Design-Expert 7.1.6软件对表3中的实验数据进行回归拟合，得到细菌总数对Nisin、ε-PL和TP三个因素的二次多项回归模型为：

表4　回归模型的方差分析Table 4　The variance analysis of regressionmodel

2.3.2模型的显著性检验上式回归模型的方差分析见表4。从表4可知，该模型极显著（p=0.0002），说明用此模型来优化南美白对虾复合生物保鲜剂浓度是合适的，失拟项（p=0.0762＞0.05）不显著，表明模型与实验结果拟合度较好，实验误差小；变异系数（C.V）=4.21%，在可接受的范围内，说明模型的可信度较高；模型的校正决定系数R2Adj=0.9266，相关系数R2=0.9679，表明该模型能解释92.66%的响应值的变化，且预测值与实测值之间能较好的吻合，可以用此模型来代替实验真实点对细菌总数进行分析和预测。对模型回归方程系数的显著性检验表明，Nisin的一次项X1和二次项的一次项X2和二次项以及TP的一次项X3和二次项均显著，说明Nisin、ε-PL和TP都对南美白对虾的细菌总数有显著的影响，由一次项的F值可知影响的大小顺序为TP＞ε-PL＞Nisin；二次项X1X3、X2X3显著，说明Nisin和TP、ε-PL和TP的交互作用是影响南美白对虾细菌总数的重要因素。

2.3.3复合生物保鲜剂及各用量的响应面分析根据回归方程用Design-Expert软件进行响应面作图，各实验因素（Nisin、ε-PL和TP）之间的交互作用和响应值（细菌总数）与各因子之间的关系如图5～图7所示。根据Guoyi Chi等［12］的观点，响应面图的等高线为椭圆形表示两因素交互作用显著，而圆形则表示不显著，所以由响应曲面图及其等高线形状可以看出不同生物保鲜剂交互作用的强弱。

图5　Nisin和ε-PL的交互作用对细菌总数的影响Fig.5　Effectof interaction between Nisin andε-PL on total bacteria

图5表示TP浓度为1.0g/100m L时Nisin和ε-PL的交互作用对南美白对虾细菌总数的影响。由图5可以看出，Nisin和ε-PL共同作用的等高线为圆形，说明交互作用不显著，两者复合的抑菌效果与单独作用之和没有显著差异。但Nisin对G+的抑制效果较好，尤其是对ε-PL和TP均不能抑制的棒状杆菌属有较好的抑制作用，所以虽然Nisin和ε-PL的协同抗菌作用不显著，但对于全面抑制冷藏南美白对虾的腐败菌仍具有重要作用，故仍然选择Nisin作为复合生物保鲜剂之一。

图6　Nisin和TP的交互作用对细菌总数的影响Fig.6　Effectof interaction between Nisin and TP on total bacteria

图6表示ε-PL浓度为0.4g/100m L时Nisin和TP的交互作用对南美白对虾细菌总数的影响。由图6可以看出，Nisin和TP的等高线为椭圆形，说明Nisin和TP在抑菌效果上有显著的交互作用，复合使用这二种生物保鲜剂能产生协同抗菌效应，达到更好的抑菌效果，这也与报道的Nisin与其他生物保鲜剂混合使用能产生远大于自身抑菌作用的保鲜效果相吻合［13］。

图7　ε-PL和TP的交互作用对细菌总数的影响Fig.7　Effect of interaction betweenε-PL and TP on total bacteria

图7表示Nisin浓度为0.04g/100m L时ε-PL和TP的交互作用对南美白对虾细菌总数的影响。由图7可知，ε-PL和TP的等高线呈椭圆形，说明交互作用显著，曲面存在细菌总数最少的最低点。当ε-PL和TP的浓度均较低时，随着浓度的增加，细菌总数逐渐减少，到达最低点后，细菌总数又逐渐增多，可能是由于ε-PL分解产生的L-赖氨酸为细菌的生长提供了营养物质，促进了细菌的生长，所以细菌总数反而有所增加。

通过对回归方程求解得出南美白对虾复合生物保鲜剂的最佳浓度配比是：Nisin0.04g/100m L、ε-PL 0.48g/100m L和TP1.06g/100m L，用此复合生物保鲜剂处理的南美白对虾（4±1）℃冷藏6d后的细菌总数理论值为1.81×103CFU/g，处于国标GB2733-2005［14］规定的一级鲜度以内，说明理论上该复合保鲜剂的保鲜效果较好，能明显延长南美白对虾的货架期。

2.3.4实验模型的验证和比较为检验响应曲面法优化所得南美白对虾复合生物保鲜剂使用浓度的可靠性，将上述三种生物保鲜剂按最佳浓度和配比配制混合溶液后浸泡经预处理过的南美白对虾5m in，捞起后适当沥干水分后用食品保鲜袋包装于（4±1）℃冷藏6d，按国标GB/T 4789.2-2010的方法测定细菌总数，实验重复3次。结果表明，用该复合生物保鲜剂冷藏保鲜的南美白对虾平行实验3次测得的细菌总数分别为1.91×103CFU/g、1.85×103CFU/g和1.98×103CFU/g，均与理论值的1.81×103CFU/g接近，而且细菌总数均处于国标GB2733-2005规定的海虾一级鲜度范围内，说明用响应面法对南美白对虾复合生物保鲜剂的使用浓度及配比进行优化是可行的。该复合生物保鲜剂不仅可以抑制南美白对虾冷藏期间的所有腐败菌，相互之间还具有协同抗菌的作用，减少了单一保鲜剂的用量，既节约了成本，又能明显延长南美白对虾的货架期。

3　结论

采用Box-Behnken的中心组合设计及响应面（RSM）分析，在单因素实验的基础上，建立三种复合生物保鲜剂与细菌总数之间的二次多项式数学模型，经验证该模型是合适可行的，能用于分析和预测南美白对虾冷藏6d后的细菌总数。通过模型的响应曲面图及其等高线，对不同生物保鲜剂及其相互作用进行了探讨，得到复合生物保鲜剂的最佳用量和配比为Nisin0.04g/100m L、ε-PL0.48g/100m L和TP1.06g/100m L，细菌总数理论值为1.81×103CFU/g，三次平行验证实验中细菌总数最多的一次为1.98× 103CFU/g，与理论值较接近，误差仅为9.39%。因此，利用响应面分析法优化南美白对虾复合生物保鲜剂最佳用量和配比的方法是可行的，不仅可以避免盲目增加保鲜剂的用量，降低成本，还可以明显延长南美白对虾的货架期，有利于促进对虾贸易的发展。

［1］K V Lalitha，PK Surendran.Microbiological changes in farm reared freshwater prawn（Macrobrachium rosenbergii de Man）in ice［J］.Food Control，2006，17（10）：802-807.

［2］López-Caballero M E，Martínez-Alvarez O，Gómez-Guillén M C，etal.Quality of thawed deepwater pink shrimp（Parapenaeus longirosiris）treated withmelanosis-inhibiting formulations during chilled storage［J］.Journal of Food Science，2007，42（9）：1029-1038.

［3］龚婷，陆利霞，熊晓辉.生物保鲜技术在水产品保鲜中的应用研究［J］.食品工业科技，2008，29（4）：311-313.

［4］Nuran Bradley.The response surfacemethodology［D］.America：Indiana University of South Bend，2007：1-6.

［5］Olfa Ghorbel-Bellaaj，Noomen Hmidet，Kemel Jellouli，et al. Shrimp waste fermentation with Pseudomonas aeruginosa A2：Optimization of chitin extraction conditions through Plackett-Burmanandresponsesurfacemethodologyapproaches［J］. International Journal of Biological Macromolecules，2011，48（4）：596-602.

［6］Fabienne Guerard，Maria Teresa Sumaya-Martinez，Delphine Laroque，et al.Optimization of free radical scavenging activity by response surface methodology inthehydrolysis of shrimp processing discards［J］.Process Biochemistry，2007，42（11）：1486-1491.

［7］宋丹.丹皮酚体外抑菌作用研究［J］.医药导报，2012，31（9）：1135-1137.

［8］GB 4789.2—2010，食品微生物学检验菌落总数测定［S］.

［9］R FWeskaa，JM Moura，L M Batista，et al.Optimization of deacetylation in the production of chitosan from shrimp wastes：Useof responsesurfacemethodology［J］.Journal of Food Engineering，2007，80（3）：749-753.

［10］Stanley Brul，Peter Coote，Suus Oomes，et al.Physiological actions of preservative agents：prospective of use of modern microbiological techniques in assessing microbial behaviour in food preservation［J］.International Journal of Food Microbiology，2002，79（1-2）：55-64.

［11］Masataka Narukawa，Chiaki Noga，Yohei Ueno，et al. Evaluation of the bitterness of green tea catechins by a cellbased assay with the human bitter taste receptor hTAS2R39［J］. Biochemical and Biophysical Research Communications，2011，405（4）：620-625.

［12］Guoyi Chi，Shuangquan Hu，Yanhui Yang，et al.Response surface methodology withpredictionuncertainty：Amultiobjectiveoptimisationapproach［J］.ChemicalEngineering Research and Design，2012，90（9）：1235-1244.

［13］Seyed Mehdi Razavi Rohani，Mehran Moradi，Tooraj Mehdizadeh，et al.The effect of nisin and garlic（Allium sativum L.）essential oil separately and in combination on the growth of Listeriamonocytogenes［J］.LWT-Food Science and Technology，2011，44（10）：2260-2265.

［14］GB 2733-2005，鲜、冻动物性水产品卫生标准［S］.2005.

Study on optim ization of Penaeus vannamei to composite of biologicalpreservation technology by response surface method

WANG Ling，TIAN Feng，XU Lu，TAO M iao-m iao
（College of Food Science and Technology，Guangdong Ocean University，Zhanjiang 524088，China）

On the basis of sing le factor experiment，the aim was to study the influence of three kinds of compound biological p reservative on effect of cold p reservation of P.vannamei through the analysis of Box-Behnken central composite design and response surface methodology（RSM）.Using the total number of bacteria of P.vannamei which had been cold stored for 6 days as evaluation index，and using Design-Expert software to analyze the quad ratic reg ression modelof com pound biologicalp reservatives and the totalnumber of bac teria，and then op timal concentration combinations of three kinds of com pound biologicalp reservative were ob tained. The results showed that the op timal concentration of the three kinds of compound p reservative were Nisin 0.04g/100m L，ε-PL 0.48g/100m L and TP 1.06g/100m L.The total number of bacteria was 1.81×103CFU/g.The largestnumberwas 1.98×103CFU/g in the three parallelverification of totalbacteria tests，errorwas only 9.39%，which meant the modelwas app rop riate and credib le.It could be used to analyze and p redic t the totalnumber of bac teria of the P.vannamei when itwas cold stored.The com pound biologicalp reservative could be mutually com p lementary and synergistic antibac terial，which could extend the shelf life of P.vannamei effectively.

Penaeus vannamei；com posite biologicalp reservation；RSM op tim ization

TS255.46

A

1002-0306（2015）06-0337-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.06.065

2014-06-23

王玲（1965-），女，硕士研究生，副教授，主要从事食品加工技术及食品微生物学方面的研究。

国家自然科学基金项目（31070701）。