六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药动学研究

2015-10-19彭险峰黄计军叶晓岚李俊健姜美华区煜荣

中国饲料 2015年16期

彭险峰，黄计军，叶晓岚，李俊健，任阳，姜美华，区煜荣

（广州英赛特生物技术有限公司，广东广州 510663）

研究发现，六氢β-酸较适合于作为替代饲用抗生素的新型促生长剂的先导化合物开发，并且其分子酯化后，饲料加工过程中的稳定性大大提高。六氢β-酸月桂酸酯是其中的一种酯化物（彭险峰和覃宗华，2014）。目前该酯的口服药动学及生物利用度研究尚未见报道。本试验进行了六氢β-酸月桂酸酯在健康鸡体内的药动学及生物利用度研究，为其进一步研究和应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 试药与试剂六氢β-酸月桂酸酯，批号：20140910，含量：53.0%，广州英赛特生物技术有限公司研制。甲醇、乙酸、乙腈均为色谱级，其他试剂均为分析试剂。六氢β-酸月桂酸酯标准品，溶解于适量乙醇，配制成1000 μg/mL的标准储备液，置-20℃备用。

1.2 仪器设备 LC-15C岛津高效液相色谱仪（LC-15C二元泵，自动进样器，SPD-15C紫外检测器，LC solution色谱工作站），日本岛津公司；CT14RD台式离心机，上海天美科学仪器有限公司；氮吹仪，YSC-24型，成都雅源科技有限公司；FA2104型电子分析天平，上海民桥精密科学仪器有限公司；IKA-MS3旋涡混合仪，德国IKA公司；色谱柱为Hanbon&Science Benatach-NH2 C18（4.6×250 mm，5 μm）。

1.3 试验动物体重为（2.0±0.1）kg的岭南快大黄肉鸡（12只）、102型肉鸡饲料（不含抗生素），均由广东省农业科学院畜牧研究所提供。试验期间按常规饲养，自由饮水和采食。

1.4 给药及采样试验前16 h禁食，自由饮水，给药后禁饲4 h。动物称重后随机分为2组，每组6只鸡，分别单剂量灌胃六氢β-酸月桂酸酯（40 mg/kg体重）和静脉注射六氢β-酸月桂酸酯（1 mg/kg体重）。鸡侧卧保定，给药前采一次空白血样。分别于给药后 0.083 （仅静注）、0.17、0.25、0.5、1、2、4、6、8、10、12 h 采血约 2 mL，立即移入加有抗凝剂的离心管中，4000 r/min离心10 min，分离血浆，置于-20℃冰箱保存，待测。

1.5 血浆样品处理精密吸取0.75 mL待测血浆于离心管中，加入80%正己烷0.75 mL，漩涡混匀 30 s，8000 r/min离心 10 min，取上清液 0.60 mL，氮气吹干，残渣用 60 μL正己烷复溶，12000 r/min离心10 min后进行HPLC分析。

1.6 检测色谱条件流动相为正己烷-异丙醇（60∶40，V/V）；检测波长为 315 nm，流速 0.8 mL/min；柱温：25 ℃；进样量：20 μL。

1.7 标准曲线分别取一定量的六氢β-酸月桂酸酯储备液添加到6个10 mL具塞离心管中，分别加入适量空白血浆，配制成含一定浓度的六氢β-酸月桂酸酯血浆标准工作液（0.05、0.1、0.2、0.5、1、2 μg/mL），按 1.5 方法进行处理后测定，记录色谱图与峰面积，采用峰面积外标法定量。

1.8 数据处理血液药时数据采用药动学软件WinNonLin 5.2.1的非房室模型统计矩分析方法处理，药动学参数用“平均值±标准差”表示。

2 结果

2.1 标准曲线和线性范围空白血浆中添加六氢β-酸月桂酸酯后，按本试验方法进行检测，六氢β-酸月桂酸酯添加量为0.05～2 μg/mL，线性关系良好（Y=5562X+1008，R2=0.999）。在本试验条件下，最低检测量为1 ng，最低检测浓度为0.05 μg/mL。

2.2 精密度与回收率分别配制含六氢β-酸月桂酸酯0.05、0.2、1 μg/mL的标准血样，各浓度每批5个重复，连续3批，分别测定精密度及回收率。测得的回收率分别为（101.25±4.25）%、（99.73±3.16）%、（99.85±3.41）%，测得各浓度日内相对标准差（RSD）小于5%，日间的RSD小于10%，满足药动学试验检测要求。

2.3 口服或静脉注射六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药动学特征健康鸡单剂量灌胃或静脉注射给药六氢β-酸月桂酸酯后，六氢β-酸月桂酸酯的血浆药物浓度-时间曲线如图1所示。药时数据经药动学软件 WinNonLin 5.2.1的非房室模型统计矩分析方法处理后的药动学参数见表1。

图1 六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内的药时曲线

由表1可见，鸡灌胃六氢β-酸月桂酸酯（40 mg/kg体重）后，吸收缓慢，给药后1.0 h血药浓度达峰值，平均Cmax为0.04 μg/mL，说明六氢β-酸月桂酸酯在鸡体内吸收量较少；血浆中平均消除半衰期（T1/2）为 2.35 h，平均滞留时间（MRT）为3.55 h，提示其在鸡体内消除较快；曲线下面积（AUC）为 0.13 μg·h/mL，生物利用度为 0.4%，表明其吸收极少。静脉注射六氢β-酸月桂酸酯（1 mg/kg体重）后，5 min的血药浓度平均值为0.99 μg/mL，显著高于灌胃给药；血浆中平均消除半衰期（T1/2）为 1.10 h，平均滞留时间（MRT）为 1.27 h，消除较快；曲线下面积（AUC）为 0.82 μg·h/mL。