AQP1 P57kip2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

程栋梁 刘平★ 郭家龙 林称意 曾敏

AQP1 P57kip2在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义

程栋梁 刘平★ 郭家龙 林称意 曾敏

目的 探讨水通道蛋白1（AQP1）和P57kip2在食管鳞状细胞癌组织中的表达和分布特点，及二者在食管鳞癌表达中的相关性及与肿瘤转移的关系。方法 采用免疫组织化学方法（SP法）检测75例食管鳞癌患者手术标本癌组织及癌旁组织中AQP1和P57kip2的表达水平，并与淋巴结转移数进行分析。结果 鳞癌组织中AQP1阳性表达率70.7%（53/75），明显高于癌旁组织29.3%（22/75）（χ2=25.626，P＜0.01）；有淋巴结转移的鳞癌组织中AQP1阳性表达率87.5%（28/32），高于无淋巴结转移58.1%（25/43），差异有统计学意义（P＜0.05）；P57kip2在鳞癌组织中阳性表达率33.3%（25/75）低于正常组织77.3%（58/75）（P＜0.05），且与食管鳞癌组织淋巴结转移有关（P＜0.05）；AQP1和P57kip2在食管鳞癌中的表达呈负相关（r=-0.849，P＜0.01）。结论 AQP1高表达可能与食管癌的发生发展有关；AQP1和P57kip2联合检测可作为评估食管癌转移与预后的指标。

食管鳞癌 水通道蛋白1 P57kip2表达

食管癌是我国最常见的一种消化道肿瘤，其预后差、病死率高，淋巴结转移和血液转移是影响食管癌预后的重要因素。现有研究表明［1］，水通道蛋白1（AQP1）在血管内皮细胞和毛细血管上皮细胞中高表达，与细胞的增殖分化相关。P57kip2是细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子（CKI）中发现的重要因子，其在某些肿瘤中存在基因异常和蛋白表达下降，提示其与肿瘤发生发展有着密切的联系［2］。作者通过检测AQP1和P57kip2在食管鳞癌和正常组织中的表达，探讨二者表达与肿瘤发生发展的关系。

1　临床资料

1.1一般资料 收集2013年1月至2014年1月本院食管癌手术标本75例。纳入标准：（1）术前患者均未进行放化疗或中医中药治疗。（2）无其他部位良恶性肿瘤病史。（3）患者均经术后病理检查确诊为鳞状细胞癌。（4）癌组织标本取肿瘤中央部位的组织，癌旁正常组织标本取距离肿瘤边缘＞5cm的正常食管组织，对于姑息性手术标本（肿瘤距离切缘＜5cm）予以剔除。

1.2主要试剂 （1）AQP1兔抗人多克隆抗体、SABC免疫组化试剂盒、DAB试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。（2）即用型兔抗人P57kip2单克隆抗体（福州迈新公司）。（3）超敏即用型SP通用型免疫组织化学试剂盒（北京中山生物技术有限公司）。（4）DAB显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。

1.3AQP1检测方法 标本经常规甲醛固定、包埋，制作蜡块，用于免疫组织化学染色。读片采用双盲法，由两位高年资病理科医师分别阅片。对已知AQPl表达阳性的食管正常组织作为阳性参照，PBS代替一抗作为阴性对照，细胞质或细胞膜见到清晰的黄色或棕黄色颗粒为阳性细胞。参考相关文献［3］的方法，按照细胞的着色密度和强度建立判定评分标准：（1）阳性细胞的着色强度：阴性：0分。轻度：1分。中度：2分。强着色：3分。（2）阳性细胞的数量：0分：无阳性细胞。1分：阳性细胞1%～25%。2分：26%～50%。 3分：＞50%。（3）着色强度和密度之和作为结果判定的最后得分：0～2分：阴性。3～4分：弱阳性。5～6分：强阳性。

1.4P57kip2检测方法 免疫组化标本制作方法同上。结果以已知P57kip2表达阳性的正常食管组织作为阳性对照，以细胞核或细胞质染色为棕黄色或棕褐色颗粒为阳性反应细胞，以PBS代替一抗作为阴性对照。判断标准［4，5］：每张切片随机观察5个高倍视野（×400）。（1）按着色强度计分：0 分：无着色。1 分：淡黄色。2 分：棕黄色。3分：棕褐色。（2）按阳性细胞数所占比例计分： 0分： 阳性细胞数0%～10%。1 分：11%

1.5统计学方法 采用SPSS 18.0软件。计量资料以表示，用t检验；计数资料用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1食管癌和正常食管组织AQPl和P57kip2的表达 免疫组化染色显示，AQPl的阳性反应呈棕黄色，主要表达于淋巴管上皮细胞和毛细血管上皮细胞，食管鳞癌细胞本身不表达AQP1。P57kip2的阳性反应呈浅棕色至棕褐色，主要位于细胞核。见图1。

图1　食管癌和正常食管组织AQPI和P57kip2的表达

2.2食管组织中AQPl和P57kip2表达与临床病理的关系 见表1、表2。

表1　食管鳞癌与正常食管组织中AQP1和P57kip2的表达（n）

表2　淋巴结转移与无转移鳞癌组织中AQP1和P57kip2的表达（n）

2.3AQPl和P57kip2表达的相关性分析 AQP1和P57kip2在食管鳞癌中的表达负相关，见表3。

表3　食管鳞癌组织中AQP1和P57kip2表达的相关性分析（n）

3　讨论

食管癌是目前我国最高发的消化道肿瘤之一［6］，改善食管癌的预后关键依赖于早期诊断。但是目前对于食管癌的早期诊断存在一定的困难，因此急需寻找有价值的检测指标。肿瘤的形成和进展是由多种复杂因素参与、多个阶段发展复杂的动态过程。恶性肿瘤最主要的临床特征是癌细胞相对的无限增殖和转移扩散，癌细胞比正常细胞更需要水分子的快速跨膜转运。水通道蛋白（AQPs）是哺乳动物细胞内广泛分布的通道蛋白之一，目前共发现13种水通道蛋白，其中水通道蛋白1（AQP1）是研究得较深入的水通道蛋白。AQPl是一个广泛表达在心肌细胞膜和毛细血管内皮的通道蛋白［7］，多项研究表明［8～11］，AQP1在肿瘤细胞增殖、肿瘤转移和新生血管的生成中发挥重要作用，并影响肿瘤的分化和患者的预后。本资料结果与上述研究相符合，AQP1在食管鳞癌组织中的表达明显高于正常食管组织，二者差异有统计学意义，提示AQP1可能对食管鳞癌的进展过程有促进作用。

Hu等［8］的体外实验和体内研究中发现，AQPl表达阳性的肿瘤细胞其迁移能力、运动特性等均高于AQPl表达阴性的肿瘤细胞，且前者具有更强的侵袭性，由此作者推测，上述结果可能与AQP1表达的上调导致出入细胞的水分增多有关。本资料结果显示：食管鳞癌组织中AQP1阳性表达率高于正常食管组织。进一步统计发现，有淋巴结转移的鳞癌组织中AQP1阳性表达率高于无淋巴结转移的食管癌。上述结果表明，AQP1在食管鳞癌的发生和进展过程中可能发挥着重要的作用。近年来，关于水通道蛋白调节剂国内外进行了比较广泛的研究［12］，目前已经证实重金属化合物、乙酰唑胺、托吡酯等在动物实验中能有效的调节水通道蛋白的表达。因而研究和应用AQP1调节剂可能改善食管癌患者预后。

P57kip2是在细胞周期素依赖蛋白激酶抑制因子（CKI）中新发现的一种重要因子。Kavanagh等［13］研究认为，多种肿瘤的发生发展过程中均存在P57kip2表达下降或不表达，提示P57kip2可能在多种肿瘤的发生中起重要作用。近年来的研究也表明，P57kip2在皮肤血管瘤［2］、非小细胞肺癌［14］、乳腺癌［15］、子宫内膜肉瘤［16］、子宫内膜癌［4］等良恶性肿瘤中存在表达下降的现象。进一步研究证实，P57kip2表达的下降与肿瘤的分化程度、转移情况等存在相关性。本次资料结果显示，P57kip2在正常食管组织的表达明显高于食管鳞状细胞癌组织，且与肿瘤淋巴结转移存在相关性，提示其在食管鳞癌的发生和发展过程中起作用，并可能与肿瘤的侵袭转移及预后相关。P57kip2表达强度越高，发生侵袭和转移的风险越小，相对预后也越好。通过对P57kip2低表达的食管鳞癌进行一定的干预措施，促进其正常表达，可能会对肿瘤的增殖分化和侵袭转移起到抑制作用，进而达到改善肿瘤预后的目的。

综上所述，AQP1和P57kip2在食管鳞癌发生、侵袭转移过程中具有一定作用，通过联合检测AQP1和P57kip2在食管癌中的表达可以为食管鳞癌的治疗和预后评估带来新的理念。AQP1抑制剂的临床研究可能为食管癌的综合治疗提供一种新的方向。

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7 程栋梁，王志维，刘平，等.AQP1在大鼠急性心肌缺血再灌注损伤中的表达.武汉大学学报（医学版），2009，30（5）：599～602.

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13 Kavanagh E，Joseph B. The hallmarks of CDKN1C（P57，Kip2）in cancer. Biochim Biophys Acta， 2011，1816（1）：50～56.

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16 魏鑫，许珞.子宫内膜间质肉瘤P57kip2的表达及临床意义研究.滨州医学院学报，2013，36（5）：321～325.

Objective To investigate the expression and distribution of aquaporin-1（AQPl）and P57kip2in esophageal squamous cell carcinoma（ESCC） and to explore the correlation between AQPl and P57kip2in ESCC.Methods lmmunohistoehemical method（SP method）was used to detect the expression of AQPl and P57kip2in 75 cases of ESCC tissue and the normal tissue of the ESCC patients.And node metastasis were statistically comparative analysis. Results The positive rate of AQP1 was 70.7%（53/75）in ESCC，signifi cantly higher than that in the normal tissue of the ESCC patients 29.3%（22/75）（P＜0.05）.The expression of AQP-1 was associated with lymph node metastasis in ESCC patients（P＜0.05）.The positive rate of P57kip2was33.3%（25/75）in ESCC，77.3%（58/75）in the normal tissue of the ESCC patients，There were signifi cant differences（P＜0.05）.There was a negative correlation between the expression of AQPl and P57kip2in ESCC. Conclusion The high expression of AQP1 and the low express of P57kip2may be concerned with the genesis and the development of human ESCC.The combined detection of AQPl and P57kip2expression may be used in assessing the metasasis and predicting the clinical prognosis of ESCC.

ESCC aquaporin-1 P57kip2expression

湖北省自然科学基金项目（2011CDC051）作者单位：442000 湖北省十堰市太和医院

～25%。2 分：26% ～50% 。3分：＞50%。将两项得分结果相加： 0～2分：阴性；3～4分：弱阳性；5～6分：强阳性。