乌龙养血胶囊中芍药苷的含量测定

马玉珠+王菊平

【摘 要】 目的：建立乌龙养血胶囊中芍药苷的含量测定方法，并对原标准砷进行修订。方法：采用高效液相方法，在色谱柱为Diamonsil Columns C18，甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）为流动相，检测波长为230nm的条件下检测芍药苷的含量。结果：芍药苷在50～250μg范围内呈良好的线性关系，Y=35883X-249249，r=0-9992。RSD为1-19%（n=6）。结论：本法灵敏、准确、简便易行、重现性好，可作乌龙养血胶囊质量控制的指标之一。

【关键词】 芍药苷；高效液相；乌龙养血胶囊

【中图分类号】R284-1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）18-0007-03

The Content determination of Paeoniflorin in Wulong Yangxue capsule

MA Yuzhu WANG Juping

Songlu pharmaceutical Co.Ltd. of Hulunbuir， Hulunbei 162650，China

Abstract：Objective To establish the method for assay of Wulong Yangxue capsule.Methods The sample was analyzed by High performance liquid chromatography HPLC and with Diamonsil Columns C18 column. The amount of paeoniflorin of radix paeoniae rubra was detected with methanol-water-glacial acetic acid （25∶ 75∶ 0-2） as mobile phase and detected wavelength of 230nm.ResultsPaeoniflorin in the range of 250-50μg good linear relationship ， Y=35883X -249249， the correlation coefficient r=0-9992.RSD was 1-19% （n=6）.Conclusion The method was sensitive， accurate ， simple and reproducible， as one of the indicators of the quality control of Wulong Yangxue capsule.

Keywords：Paeoniflorin； HPLC； Wulong Yangxue capsule；

乌龙养血胶囊由人参、冬虫夏草、灵芝、琥珀、熊胆、鹿茸、黄芪、葛根、红花、绞股蓝、川芎、玫瑰花、海藻、当归、丹参、赤芍、刺五加、枸杞子、地龙、山楂、天麻、何首乌等组成，具有补气养血的功效。临床用于气血亏虚所致的身倦乏力、胸闷、多梦、神疲等症。药理研究发现，乌龙养血胶囊具有改善脑血循环、降低血脂、调节机体免疫功能；对神经内分泌系统具有明显的双向调节作用，可改善大脑皮层和植物神经系统的功能[1]。

研究采用高效液相方法测定乌龙养血胶囊中的芍药苷的含量，并对执行过程中发现的砷盐检查项存在的问题进行修订，进一步完善乌龙养血胶囊的质量标准。

1 仪器与材料

1-1 仪器 岛津高效液相色谱仪（LC-10ATvp输液系统、SPD-10Avp检测器、lcsolusion lite 色谱工作站）；UV-2401PC SHIMADZU紫外分析仪；METTLER-240电子分析天平（上海梅特勒）；AS超声仪（天津奥特赛斯思仪器有限公司）。

1-2 材料 芍药苷对照品（批号：110736-200630，中国药品生物制品检定所）；乌龙养血胶囊（呼伦贝尔松鹿制药有限公司）；D101型大孔吸附树脂（批号：990320，天津农药厂）；流动相甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2-1 色谱条件 色谱柱：Diamonsil Columns C18（250 mm×4-6 mm，5μm）；柱温：35℃；流速：1-0ml/min；流动相：甲醇-水-冰醋酸（25∶ 75∶ 0-2）；检测波长：230 nm；进样量：20 μl。理论塔板数按芍药苷峰计应不低于2000。

2-2 标准溶液的制备 精密称取干燥24 h后的芍药苷对照品适量，加甲醇制成每0-1mg/ml的溶液，即得。

2-3 样品溶液的制备 精密称取乌龙养血胶囊内容物3 g，研细，置具塞三角烧瓶中，加甲醇50 ml，称重，放置1 h，超声提取30 min，放冷，称重，加甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液10 ml，置水浴上蒸干，残渣加水3～5ml使溶解，加入D101型大孔吸附树脂柱上，用50%甲醇50 ml洗脱，收集洗脱液，置水浴上蒸干，残渣加甲醇溶解，定量转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，即得。

2-4 阴性溶液的制备 按照乌龙养血胶囊处方，按照“2-3”项制备缺少赤芍的阴性溶液。

2-5 线性关系的考察[2] 精密称取芍药苷对照品6-64 mg，加甲醇溶液定容至25ml，分别吸取1-0、2-0、3-0、4-0、5-0 ml用甲醇溶液稀释至5ml，摇匀，分别取20 μl注入高效液相色谱仪。以对照品溶液浓度（mg/ml）为横坐标，以峰面积积分值为纵坐标，计算回归方程，Y=33775805X -249249，r=0-9996，表明芍药苷进样量在50～250μg范围内呈良好的线性关系。见表1。

表1 线性关系的考察结果

2-6 干扰试验 将芍药苷对照品溶液、供试品溶液、赤芍阴性对照溶液分别注入液相色谱仪中，进行色谱扫描，结果显示其他药味不干扰芍药苷的检测。见图1。

2-7 精密度试验 取芍药苷对照品溶液20μl，重复进样5次，测定芍药苷的面积积分值。由表2可知，芍药苷面积积分值的相对标准偏差RSD为1-19%（n=5）<2%，说明仪器的精密度良好。

表2 精密度试验结果

2-8 稳定性试验 取乌龙养血胶囊（批号：130905）的样品溶液，分别于0、2、6、8、12h注入高效液相色谱仪，进样量20μl。由表3可知，峰面积RSD为0-91%，表明样品溶液在12h内具有良好稳定性。

表3 稳定性试验结果

2-9 重复性试验 取批号为130905的乌龙养血胶囊样品，精密称量，按照“2-3”项平行处理6份作为供试品溶液，注入液相色谱仪，进样量为20 μl。由表4可知，乌龙养血胶囊中芍药苷的含量为0-888 mg/g，对标准偏差RSD为0-72%（n=6），RSD<2%，重复性试验结果显示方法稳定可靠。

表4 重复性试验结果

2-10 回收率试验 精密称取已知含量的乌龙养血胶囊6份（批号：130905，含量为0-888mg/g）约1-5g，精密称定，置具塞三角烧瓶中，精密加甲醇20ml，分别精密加入对照品溶液（浓度为71-5μg/ml）20 ml，按照“2-3”项制备供试品溶液。分别进样20μl，测定。计算出加样回收率，平均为97-54%，RSD为0-57%。见表5。

2-11 样品测定 按本文拟定方法测定其中芍药苷的含量，结果见表6。

表5 回收率测定结果

表6 样品含量测定结果（n=6）

3 砷盐的检查

乌龙养血胶囊质量标准中砷盐的检查为“氢氧化钙炽灼灰化”，该方法灰化不完全，有机成份干挠严重，影响砷斑颜色判定。现采用硫酸、硝酸氧化并炽灼灰化，所以采用此方法得到较好的分析，避免了有机成分灰化不完全而干扰检测。具体方法如下：取供试品0-4g，缓缓炽灼至完全炭化，放冷，加硫酸1ml，使恰湿润，用低温加热至硫酸除尽后，加硝酸1ml蒸干，至氧化氮蒸气除尽后，放冷，在500～600℃炽灼使完全灰化。取遗留的残渣，加盐酸5ml与水21ml，依法检查，含砷量不得过百万分之五。

4 讨论

乌龙养血胶囊的处方总量266g，其中赤芍为11g，而赤芍药材标准要求含量芍药苷（C23H28O11）不低于1-8%[3]。因此，乌龙养血胶囊中芍药苷的理论含量为0-744mg/g。考虑生产工艺复杂，且受药材来源、生产贮存等因素的影响，暂定本品含赤芍以芍药苷（C23H28O11）计，每1g不得少于0-7mg。研究采用高效液相法测定乌龙养血胶囊药品赤芍中芍药苷的含量，经方法学考察，该方法准确、灵敏、简便、快速，可作乌龙养血胶囊质量控制的指标之一。参考文献

[1] WS-5951（B-0951）-2002.乌龙养血胶囊[S].

[2] 张春华，严云良.医药数理统计[M].北京：科学出版社，2001.

[3] 国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[S].北京：中国医药科技出版社，2010：147-148.

（收稿日期：2015-06-09）