高效液相色谱法同时测定茵栀黄颗粒中4种成分

叶其旺

庆元县中医院药剂科，浙江 庆元 323800

高效液相色谱法同时测定茵栀黄颗粒中4种成分

叶其旺

庆元县中医院药剂科，浙江 庆元 323800

目的：建立方法，同时测定茵栀黄颗粒中绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷的含量。方法：选用KromasilC18（4.6 mm×250 mm，5 μm）柱；以乙腈-0.1%甲酸水溶液（37∶63）为流动相；流速为1.0 mL/min；柱温为35℃；检测波长程序：0～7.5 min为350 nm（绿原酸）、7.5～14 min为238 nm（栀子苷）、14～20 min为360 nm（金丝桃苷）、20～25 min为280 nm（黄芩苷）。结果：绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷均具有良好的线性关系，线性范围分别为：0.3424～5.136 μg、0.276～4.14 μg、0.184～2.76 μg、2.48～37.2 μg；4种成分的平均加样回收率分别为98.1%（RSD=0.71%）、98.1%（RSD=1.07%）、98.0%（RSD= 1.14%）、97.6%（RSD=0.95%）。结论：本含量测定方法准确高效，简便快速，适用于茵栀黄颗粒的质量评价。

茵栀黄颗粒；绿原酸；栀子苷；金丝桃苷；黄芩苷；高效液相色谱法（HPLC）

茵栀黄颗粒是由茵陈提取物、栀子提取物、黄芩提取物和金银花提取物为主要原料制成的颗粒，具有清热解毒、利湿退黄等功效，常用于肝胆湿热所致的黄疸，对新生儿生理性和病理性黄疸具有较好的疗效［1～2］。茵栀黄颗粒多以黄芩苷和栀子苷的含量作为评价指标，略有不足，因此，为更全面评价产品质量，本试验建立方法，对制剂中的绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷进行同时测定。

1　仪器与试药

1.1仪器安捷伦1260型高效液相色谱仪；检测器G1314B；四元泵 G1311C；柱温箱 G1316A；工作站G2170BA；AB265-S电子分析天平（梅特勒）；Millipore Simplicity型超纯水器（Millipore）；KQ-250E型超声波清洗器（江苏昆山市超声仪器有限公司）。

1.2试药对照品绿原酸（110753-201415）、栀子苷（110749-201316）、金丝桃苷（111521-201406）和黄芩苷（110715-201318）购自中国食品药品检定研究院（供含量测定用）；色谱纯乙腈、甲酸，分析纯甲醇购自国药集团化学试剂公司，水为超纯水；茵栀黄颗粒（鲁南厚普制药有限公司，批号：00914055、00914056、00914057）。

2　方法与结果

2.1色谱条件［3～5］色谱柱：Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）柱；流动相：乙腈-0.1%甲酸水溶液（37∶63）；流速：1.0 mL/min；柱温：35℃；检测波长程序：0～7.5 min为350 nm（绿原酸）、7.5～14 min为238 nm（栀子苷）、14～20 min为 360 nm（金丝桃苷）、20～25 min为280 nm（黄芩苷）。

2.2溶液的配制

2.2.1混合对照品溶液分别取绿原酸、栀子苷、金丝桃苷、黄芩苷对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成浓度分别为：绿原酸0.1712 mg/mL、栀子苷0.138 mg/mL、金丝桃苷0.092 mg/mL、黄芩苷1.24 mg/mL的混合溶液，即得。

2.2.2供试品溶液［6］取茵栀黄颗粒约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。

2.2.3阴性对照溶液依照处方及工艺，自行分别制备不含金银花提取物，不含黄芩提取物，不含茵陈和金银花提取物的阴性样品，按2.2.2项下方法制备，即得。

2.3方法学考察

2.3.1系统适应性试验取上述混合对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，采集色谱图，结果见图1～5。供试品溶液色谱图中，绿原酸、栀子苷、金丝桃苷、黄芩苷的保留时间与相应对照品溶液色谱图一致，阴性对照溶液在相应对照品出峰位置上无干扰。

2.3.2线性考察取2.2.1项下对照品溶液，分别进样2、4、8、15、20、30 μL，按2.1项下色谱条件进行测定，分别记录峰面积。以峰面积（Y）对进样量（μg）进行线性回归，绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷的回归方程分别为：Y=6.22× 106X+1.95×104，r=0.9997；Y=4.35×106X+3.61×103，r=0.9998；Y=5.08×106X+3.43×103，r=0.9998；Y=3.88× 106X+3.69×103，r=0.9998。结果表明，绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷分别在0.3424～5.136 μg、0.276～4.14 μg、0.184～2.76 μg、2.48～37.2 μg范围内线性关系良好。

图1　对照品溶液色图谱

图2　供试品溶液色谱图

图3　金银花、茵陈提取物阴性对照图谱

图4　栀子提取物阴性对照图谱

图5　黄芩提取物阴性对照图谱

2.3.3精密度试验取2.2.1项下对照品溶液，按2.1项下色谱条件连续测定6次，记录峰面积。结果绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷峰面积RSD分别为1.62%、1.84%、1.33%、1.51%，结果表明仪器具有较好的精密度。

2.3.4重复性试验取茵栀黄颗粒，按2.2.2项下方法平行制备供试品溶液6份，按2.1项下色谱条件进行测定，计算含量和RSD。结果绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷的平均含量分别为4.25 mg/g（RSD=2.04%）、3.47 mg/g（RSD=2.33%）、2.32 mg/g（RSD=1.94%）、30.2 mg/g（RSD=1.76%），结果表明本测定方法具有较好的重复性。

2.3.5加样回收率试验见表1。取茵栀黄颗粒6份，各约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，分别精密加入对照品溶液（绿原酸0.2128 mg/mL、栀子苷0.1731 mg/mL、金丝桃苷0.1165 mg/mL、黄芩苷1.5073 mg/mL）10 mL和甲醇15 mL，密塞，称定重量，其余操作按2.2.2项下方法进行，制得供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算加样回收率。

表1　加样回收率试验结果

2.4样品含量测定见表2。取茵栀黄颗粒，按2.2.2项下方法制备供试品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定，计算绿原酸、栀子苷、金丝桃苷和黄芩苷的含量。结果4种成分的平均含量分别为 4.14 mg/g、3.66 mg/g、2.18 mg/g、33.47 mg/g。

表2　含量测定结果　mg/g

3　讨论

茵栀黄颗粒含有4种提取物：茵陈提取物、栀子提取物、黄芩提取物、金银花提取，原质量标准测定黄芩苷和栀子苷，仅对黄芩提取物和栀子提取物进行质量控制，本试验在此基础上，又选取了绿原酸和金丝桃苷，对金银花提取物和茵陈提取物进行质量控制，力求更全面评价制剂的质量。

为提高分析效率，本试验对4种成分进行了同时测定，鉴于4种成分的最大吸收波长不同，为提高检测的准确性和灵敏度，本试验采用可变波长程序，实现了在最大波长处对4种成分进行检测。因此本试验所建立的含量测定方法具有准确高效，简便快速的特点。

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（责任编辑：刘淑婷）

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0256-7415（2015）09-0206-03

10.13457/j.cnki.jncm.2015.09.096

2015-05-16

叶其旺（1968-），男，主管药师，主要从事临床药学工作。