四数九里香组织培养（简报）

林　茜，高营营，韩晓华，张　露，黄天琨，林贵美

（1.广西植物组培苗有限公司，广西 南宁 530007；2.广西农业科学院 生物技术研究所，广西 南宁 530007）

四数九里香组织培养（简报）

林茜1，2，高营营1，韩晓华1，张露1，黄天琨1，林贵美1

（1.广西植物组培苗有限公司，广西 南宁 530007；2.广西农业科学院 生物技术研究所，广西 南宁 530007）

以四数九里香新生带腋芽茎段为外植体，研究取材时期、6-BA浓度及生长素种类对外植体生长的影响，探讨不同浓度活性炭对外植体褐化的影响。结果表明，四数九里香组织培养适宜的取材时期为4月；外植体腋芽诱导率在6-BA浓度为2.5 mg·L-1时表现较高；IBA是较适宜外植体生长的生长素；活性炭浓度为1.5 g·L-1可有效减轻外植体褐化；组织培养适宜的启动培养基为MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

四数九里香；组织培养；生长素；活性炭；褐化

1　材料

四数九里香Murraya tetramera新生带腋芽茎段。

2　方法

2.1取材时期分别于2013年3、4、5、8、11月中旬进行取材试验。

2.2外植体消毒于连续晴朗的午后，取生长健壮植株的新生茎段，分割成约2 cm大小片段，以75%酒精表面消毒5 s后转入10%次氯酸钠溶液消毒2 min，无菌水冲洗3次，最后置于0.1%氯化汞中消毒6 min，无菌水冲洗4次，在无菌滤纸上将茎段表面的水分吸干，将茎段切成1 cm左右以备接种。

2.3腋芽诱导培养外植体初代接种于MS + 6-BA 0.5 mg·L-1（单位下同） + IBA 0.1+活性炭0.5 g·L-1+ 蔗糖30 g·L-1培养基。本实验所有培养基均含蔗糖30 g·L-1，光照时间14 h·d-1，培养15 d左右。

2.46-BA浓度梯度试验将诱导良好、长势一致的带腋芽茎段分别转入附加不同浓度6-BA （0.5、1.5、2.5、3.5）的MS + IBA 0.1 + GA30.3 + 活性炭0.5 g·L-1培养基中。每浓度试验20瓶，培养30 d。

2.5生长素种类试验挑选长势较好材料分别转入下面培养基：MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + NAA 0.1 +活性炭0.5 g·L-1；MS + 6-BA 2.5 + GA30.3 + IBA 0.1 + 活性炭0.5 g·L-1。每试验20瓶，培养30 d。

2.6不同浓度活性炭试验以MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1为基本培养基，添加不同浓度活性炭（0.5、1.0、1.5 g·L-1）进行抑制褐化试验，每浓度试验20瓶，培养15 d，观察不同浓度活性炭对外植体褐化的影响。

3　结果与分析

3.1不同取材时期对外植体生长的影响不同月份取材在相同的处理方法及培养条件下培养7 d左右，大部分嫩茎段的腋芽诱导效果良好，诱导率达90%以上，但之后生长速度出现较明显差异（表1）。4月处理的外植体腋芽诱导后生长速度较快，培养30 d外植体新生部分长达2.5 cm，生长较好。其他月份取材的外植体生长较差，30 d时新生长度仅为1.0 cm左右。说明4月天气回暖后，室外植株生理状态最好，取材处理后，在培养基上恢复生长速度快，长势好。因此，四数九里香组织培养较适宜的取材时间为4月。

表1　不同取材时期对外植体生长的影响Table 1　Effects of different sampling time on the explants growth

3.2不同 6-BA浓度对外植体生长的影响由表 2可知，外植体在含不同浓度 6-BA的培养基上腋芽均表现伸长生长趋势，30 d时含2.5 mg·L-16-BA培养基上外植体的新生嫩茎段伸长最明显，新生部分最长达4.0 cm，增殖系数约为2.5，6-BA浓度低于或高于该浓度，伸长长度均劣之。

表2　不同6-BA浓度对外植体生长的影响Table 2　Effects of different 6-BA concentration on the explants growth

3.3不同生长素种类对外植体生长的影响试验表明，外植体在两类培养基上的生长速度有差别，在含有生长素IBA培养基上的出芽数与芽生长长度均优于含生长素 NAA的培养基（表3）。说明IBA是四数九里香组织培养较适宜的生长素。

3.4不同浓度活性炭（AC）对外植体褐化的影响试验发现，在四数九里香组织培养的各个阶段均有褐化现象发生，严重阻碍外植体正常生长。通过活性炭浓度梯度试验发现，当活性炭浓度为0.5或1.0 g·L-1时对褐化的发生几乎无抑制作用，而当AC浓度调高到1.5 g·L-1时，对褐化抑制作用较明显（表4）。

表3　不同生长素种类对外植体生长的影响Table 3　Effect of different types of auxins on the explants growth

4　结语

四数九里香Murraya tetramera为芸香科九里香属植物，落叶小乔木，叶有浓郁香气。生长于广西百色、德保和云南东部砚山、富宁、文山、西畴，常见于石灰岩山地山顶阳光充足地带［1］。以根、叶入药，辛、微苦、性微温，可鲜用或阴干备用，具祛风解表、行气止痛、活血散淤、抗炎、镇痛、解热之功效，用于治疗感冒发热、支气管炎、哮喘、胃痛、风湿痹痛、跌打淤肿、皮肤搔痒、毒蛇咬伤、湿疹、疟疾等症［2—3］。但多年来广西石灰岩山地的物种、群体及其栖息环境遭人为或自然的破坏，导致资源萎缩、物种濒危，甚至呈灭绝趋势。通过植物组织培养技术对广西石灰岩特有珍稀药用植物进行组培快繁，不仅可达到良种保存的目的，且可确保药源的供应量。近年来，对四数九里香进行组织培养的研究鲜见报道。本文根据木本植物及芸香科植物组织培养的特点，借鉴相关成功培养基配方，对四数九里香组织培养的培养基配方进行针对性研究［4—8］。结果表明，4月为四数九里香外植体最佳取材时期，组织培养适宜培养基为MS + 6-BA 2.5 + IBA 0.1 + GA30.3 + 蔗糖30 g·L-1+ 活性炭1.5 g·L-1。

表4　不同活性炭浓度对外植体褐化的影响Table 4　Effect of different AC concentration on the browning of explants

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Tissue Culture of Murraya tetramera

LIN Qian1，2， GAO Ying-ying1， HAN Xiao-hua1， ZHANG Lu1， HUANG Tian-kun1， LIN Gui-mei1
（1.Guangxi Plant Tissue Culture Co. Ltd.， Nanning， 530007， Guangxi China； 2.Biotechnology Institute of Guangxi Academy of Agricultural Sciences， Nanning 530007， Guangxi China）

Stems with newborn axillary bud used as explant， sampling times， concentrations of 6-BA，type of auxins were researched as important factor affecting growth of explants. Also， the effect of activated carbon on browning of explants was studied. Appropriate sampling time for tissue culture of Murraya tetramera was April， appropriate 6-BA concentration for the shoots induction from explants was 2.5 mg·L-1， appropriate auxin was IBA and 1.5 g·L-1activated carbon could reduce the browning of explants. The results showed that the initial media was MS + 6-BA 2.5 mg·L-1+ IBA 0.1 mg·L-1+ GA30.3 mg·L-1+ AC 1.5 g·L-1in tissue culture of M. tetramera.

Murraya tetramera； tissue culture； auxin； activated carbon； browning

10.3969/j.issn.1009-7791.2015.01.014

Q943

B

1009-7791（2015）01-0070-02

2015-01-05

林茜，硕士，研究实习员，从事植物组织培养研究。E-mail： lgm998@126.com