C57小鼠和C57BL/6 FMR1 KO小鼠剖宫产手术及其仔鼠生长情况的比较研究

2015-09-26杨燕燕刘德强谢金东王训立福建中医药大学实验动物中心福州350122

福建畜牧兽医 2015年1期

林玮　杨燕燕　刘德强　谢金东　王训立福建中医药大学实验动物中心　福州　350122

林玮杨燕燕刘德强谢金东王训立*福建中医药大学实验动物中心福州350122

目的 C57BL/6小鼠和C57BL/6 FMR 1 KO小鼠剖宫产手术及其仔鼠生产情况的比较。方法将C57和FMR 1两种小鼠分成两组，每组雌雄按1：1配对，通过剖宫产手术取得仔鼠，C57母鼠作为代乳母鼠，分别比较两种小鼠的妊娠时间、成功受孕时间、7 d成活率、产仔数、离乳率。结果 FMR 1小鼠在成功受孕时间、7 d成活率、离乳率上与C57小鼠存在显著差异。结论通过剖宫产净化手术获得FMR 1小鼠，为后续开展保种和育种工作提供重要保障。

FMR 1剖宫产手术离乳率基因敲除

实验动物科学技术是生命科学的基础和条件，也是衡量现代生物医学研究水平的重要依据，因而受到各国的普遍重视［1］实验动物剖宫产净化技术是实验动物种群微生物与寄生虫质量控制最为经典的技术，主要是利用胎盘具有屏障作用，可阻止病原微生物侵入，可切断母仔纵向传播疾病的途径，来净化被微生物污染的啮齿类动物［2］，是小鼠进行“生物净化”、维持种群微生物级别最简单而有效的手段［1］。特别是对它的微生物等级产生疑问时，通过实验动物剖宫产净化技术可取得SPF级甚至无菌级KO小鼠，为后续开展保种和育种工作提供重要保障。

1　材料和方法

1.1实验动物2010年自美国Baylor医学院引进，在福建中医药大学实验动物中心已稳定传代四年；上海斯莱克实验动物有限责任公司处购买C57 （C57BL/6）小鼠20只，雌雄各半，体重23～25 g，许可证号：SCXK（沪）2012-0002；FMR1基因敲除小鼠（C57BL/6 FMR1 KO）代乳的母鼠为已产过2胎、仔鼠成活率高并且仔鼠生长发育良好的C57雌鼠。剖宫产手术全程在手术隔离器中完成，手术隔离器购买于苏州冯氏实验动物设备有限公司，型号为1000 cm×800 cm×1400 cm。

1.2方法将C57和FMR1两种小鼠分成两组，每组雌雄按1∶1配对，饲养在福建中医药大学实验动物中心三楼的屏障系统内，18～24℃，日温差不超过3℃，湿度在50%～65%。估算代乳母鼠的分娩时间，要求在剖宫母鼠手术前1～2 d内的为宜。将雌雄小鼠交配之日定为妊娠的0.5 d，将19.5 d定为小鼠的分娩期，同时配合触诊法判断是否可以进行剖宫产净化手术。手术中，先经颈椎脱臼法处死孕鼠后，固定好四肢，用碘酊消毒腹部，沿腹中线开腹，用止血钳分别将子宫颈和两侧输卵管夹紧，用剪刀沿血管钳固定处外端切断子宫颈、输卵管和子宫阔韧带，使子宫游离。提起3把止血钳将子宫浸入0.5%过氧乙酸3 s后再放入无菌生理盐水中冲洗3 s，除去止血钳、切开子宫剥离胎鼠，及时擦去胎鼠口、鼻及身上的黏液，促其呼吸，断脐带。

1.3数据分析采用统计学（SSPS16.0）比较两种小鼠的产仔数和代乳成活率。

2　结　果

2.1成功受孕、妊娠时间比较在妊娠时间上，FMR1与C57小鼠相比较无显著性；而在成功受孕的时间上存在着差距。见表1。

表1　FMR1和C57妊娠时间和成功受孕时间比较

2.2仔鼠成活情况比较FMR1小鼠的产仔数比C57小鼠偏低，但无显著性差异。在剖宫产手术成功后，将所得的仔鼠分别进行代乳喂养，两种仔鼠在7 d时的成活率和离乳率存在显著性差异。见表2。

3　讨　论

适宜的剖宫取胎条件是提高娩出仔鼠和离乳仔鼠成活率的关键［3］，整个手术过程尽量在3min内完成，且手术的温度要保持在36～38℃［4］。FMR1小鼠在成功受孕时间上与C57小鼠存在极显著差异，这可能是由于FMR1小鼠是利用基因敲除技术将X染色体上的FMR1基因定点灭活制备而成的动物模型，其X染色体可能受到损伤，使其很难受孕成功，甚至出现无法受孕成功的情况。因此，在判断剖宫产手术时间的时候，不能单纯以阴栓的脱落为受孕成功的标准，在FMR1母鼠腹部隆起后，要配合触诊法确定剖宫产手术的时间。

在成功进行剖宫产手术后，开始代乳喂养时，FMR1仔鼠在7 d的成活率和离乳率低于C57小鼠，且存在显著性差异。这可能是由于FMR1小鼠在基因敲除后，主要表现为巨睾症、记忆力缺失、行为异常和智力低下［5-7］，使其后代仔鼠在幼年时更容易出现死亡。

对小鼠进行剖宫产净化手术是提高实验小鼠微生物等级的最有效方法，同时也是小鼠在分娩难产时，最直接的延续后代的挽救措施。而小鼠在第一胎的时候，又特别容易发生难产甚至是吃仔的现象，而小鼠的剖宫产净化技术能很好地预防和控制这些问题的发生。通过剖宫产净化手术的FMR1小鼠，在开展保种和育种工作中的应用，有待进一步研究。

［1］魏溥.医学生物化学［M］.2版.北京：世界图书出版公司，1995：58-74.

［2］刘淑霞，刘殿峰，杨淑萍.实验小鼠的净化及监测［J］.中国生物制品学杂志，2000，13（4）：245-246.

［3］周淑佩，王连英，张云凤，等.大、小鼠剖宫取胎的适宜条件［J］.北京大学学报，2001，33：89-91.

［4］前岛一淑.实验动物的无菌技术［M］.北京：科学技术出版社，1983：66.

［5］Leah Selby，Chunzhao Zhang，Qian-Quan Sun.Major Defects in Neocortical GABAergic Inhibitory Circuits in M ice Lacking the Fragile X Mental Retardation Protein［J］.Neuroscience Letters，2007，412（3）：227-232.

［6］Chen L，Yun SW，Seto J，et a1.The fragile X mental retardation protein binds and regulates a novel class ofmRNAs containingUrichtarget sequences［J］.Neuroscience，2003，120（4）：1005-1017.

［7］Dolen G，Osterweil E，Rao B S S，et al.Correction of fraglle X Syndrome in m ice［J］.Neuron，2007，56（6）：955-962.

Com pare the situations about the caesarean section and production rates on C57m ice and C57BL/6 FMR1 KO m ice

Lin WeiYang YanyanLiu DeqiangXie JindongWang Xunli*
（Laboratory Animal Center，Fujian University of Tradition Chinese Medicine，Fuzhou 350122）

Objective∶compare the situations about the caesarean section and production rates on C57 mice and C57BL/6 FMR1 KO mice.Methods∶mice C57 and mice C57BL/6 FMR1 KO are divided into two groups and in each group，male and female are paired in 1∶1 matching.The experiment tries to get newborn mice by caesarean section，in which mice C57 are nursemice.Through the experiment，the author tries to compare the gestation periods，successful pregnancy time，survival rates of 7 d，litter sizes and weaning rates. Conclusion∶themice FMR1，got from purification caesarean operation prompt the guarantee for the following storage and breeding.

Caesarean Section Weaning rate Gene knockout