不同制霜方法制备巴豆霜饮片质量比较△

陈彦琳，金峰，杜杰，梁焕，任玉珍

(中国中药公司，北京 102600)

·中药工业·

不同制霜方法制备巴豆霜饮片质量比较△

陈彦琳，金峰，杜杰，梁焕，任玉珍*

(中国中药公司，北京 102600)

目的：研究不同制霜方法对巴豆霜饮片质量的影响，为炮制巴豆霜时选择合适的制霜方法提供依据。方法：采用《中华人民共和国药典》2010版巴豆霜标准项下收载的检测方法和文献报道的溶血实验法，对压榨法、稀释法、加热稀释法、提油返油法4种方法制备的巴豆霜进行薄层色谱鉴别、含量测定及溶血实验。结果：4种方法制备的巴豆霜中巴豆苷的含量排序：提油返油法>压榨法>加热稀释法>稀释法，其中提油返油法和稀释法制备的巴豆霜有明显溶血现象。结论：中华人民共和国药典收载的稀释法由于辅料淀粉的加入，巴豆有效成分含量降低且有溶血效应。相比而言，中华人民共和国药典规定的压榨法更适合作为巴豆制霜方法。

稀释法；压榨法；巴豆霜；质量比较

巴豆为大戟科植物巴豆CrotontigliumL.的干燥成熟果实。其含有机酸及甘油酯类、生物碱类及植物蛋白质类成分，生巴豆味辛，性热，有大毒，归胃大肠经。外用蚀疮，用于恶疮疥癣、疣痣。巴豆具有峻下积滞，逐水消肿，豁痰利咽之功能。用于寒积便秘、乳食停滞、下腹水肿、二便不通、喉风、喉痹[1]。

巴豆从汉时入药至今，有30多种炮制方法。巴豆制霜法最早载于宋《苏沈良方》：“以巴豆剥去壳，取净肉，去肉上嫩皮，纸包水湿，入慢火中煨极熟，取出，另以绵纸包之，缓缓捶去其油，纸湿则另换，以成白粉为度”，以后各代均沿袭使用巴豆仁或巴豆霜。

现代研究认为，巴豆中的脂肪油成分为巴豆的主要毒性成分，具有较强的泻下作用，但是通过炮制除去部分油脂，又可体现缓泻作用，因此，巴豆油是巴豆毒效兼具的主要成分。部分学者通过研究提出的方法还有稀释法[2]和提油返油法[3-4]等，其中压榨法和稀释法收入了《中华人民共和国药典》巴豆霜的制法项下。

另据文献报道，巴豆中含有的巴豆毒蛋白能够溶解兔、猪、蛇、鸡的红细胞[5]，被认为是巴豆的主要毒性成分，应尽量除去。通过实验发现，巴豆霜的溶血效应与其蛋白在炮制过程中发生变性失活有关，炮制过程中加热有助于降低巴豆霜溶血效应[6]。因此，在本次实验中，我们将溶血实验作为检查巴豆毒蛋白变性程度的方法纳入巴豆霜的质量检测。

近年来，我们与炮制设备专业厂家合作，经多次改进，完成了热压智能制霜机的研制。该设备具有快速压榨、实时称重等功能，能快速制备巴豆霜，将传统制霜炮制生产周期缩短为原来的1/30～1/15，降低3/4的原材料损耗。经中试验证，该设备运行良好，制备的巴豆霜质量稳定，使长期受设备限制难以推广的压榨法制霜问题得到解决。我们将该设备压榨法与中华人民共和国药典稀释法和文献报道的提油返油法等4种不同工艺制备的巴豆霜样品的质量进行比较研究。

1 材料

1.1 仪器与设备

Waters2695-2998高效液相色谱仪(四元高压梯度泵、自动进样器、柱温箱、2998PAD检测器、Empower Pro3工作站)；TB-215D型分析天平(北京赛多利斯科学仪器有限公司)；KQ2100DB型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FW-100型高速粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；热压智能制霜机(杭州海善制药设备有限公司)。

1.2 试剂与试药

巴豆苷、巴豆对照药材(中国食品药品检定研究院，批号分别为11856-201001，1141-200001)；戊巴比妥钠(urchem公司，批号：ws20050411)；乙醚、硫酸、冰醋酸(北京化工厂，批号分别为20111018，20100811，20110306，分析纯)；甲醇(Fisher Scientific，色谱纯)；水为双蒸水。

1.3 样品来源

巴豆原药材由北京华邈中药工程技术开发中心提供，经中国食品药品检定研究院中药标本馆张继馆长鉴定为大戟科植物巴豆CrotontigliumL.的干燥成熟果实。巴豆霜样品制备方法见表1，每个方法制备3批样品。

表1 样品制备方法

2 方法

2.1 薄层鉴别

按照《中华人民共和国药典》2010版一部“巴豆”项下鉴别方法进行薄层鉴别。

2.2 含量测定

按照《中华人民共和国药典》2010版一部“巴豆”项下脂肪油和巴豆苷测定方法测定药材中脂肪油和巴豆苷的含量。

2.3 溶血实验

2.3.1 2%红细胞混悬液的制备 家兔麻醉后(戊巴比妥钠，40 mg·Kg-1，耳缘静脉注射)，自颈总动脉取血，放入含玻璃珠的锥形瓶中振摇10 min，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠溶液约10倍量，摇匀，1000～1500 r·min-1离心15 min，弃去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠溶液按上述方法洗涤2～3次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化钠溶液配成2%的混悬液，供实验用。

2.3.2 样品处理方法 取样品1 g，加入10 mL 0.9%氯化钠研磨成浆，放置24 h(4 ℃)，3000 r·min-1离心20 min，取上清液在6 h内用于实验(1→10)，将上清液用0.9%氯化钠稀释一倍同时用于实验(1→20)。

2.3.3溶血检查法 取洁净试管若干支，编号，按表2所示依次加入2%红细胞混悬液、0.9%氯化钠溶液及受试样品，混匀后，立即置(37±0.5)℃的恒温箱中进行温育。每小时观察溶血和凝聚反应，连续观察3 h。

2.3.4 结果判断 溶血或部分溶血(+)：溶血澄明红色，管底无细胞残留或有少量红细胞残留；无溶血(-)：红细胞全部下沉，上清液无色澄明；凝集(o)：溶液中有棕红色或红棕色絮状沉淀，振摇后不分散。若凝聚物在试管振荡后又能均匀分散，或将凝聚物置于载玻片上，在盖玻片边缘滴加2滴0.9%氯化钠溶液，置显微镜下观察，凝聚红细胞能被冲散者为假凝集，若凝聚物不被摇散或在玻片上不被冲散者为凝集[5]。

表2 样品溶液加液量 /mL

3 结果

3.1 薄层检测结果

见图1。

注：1.提油返油法；2.加热稀释法；3.稀释法；4.巴豆油；5.压榨法；6.巴豆对照药材。图1 巴豆霜不同炮制方法薄层鉴别图

3.2 含量测定、溶血效应结果

见表3。

表3 不同炮制工艺巴豆霜脂肪油和巴豆苷含量(n=3)

4种方法所致溶血效应见表4、图2。

表4 不同炮制工艺巴豆霜溶血效应

注：D1.稀释法；D2.加热稀释法；D3.压榨法；D4.提油返油法。图2 不同炮制方法巴豆霜溶血实验结果

4 讨论

不同炮制工艺均可使巴豆霜脂肪油含量达到中华人民共和国药典规定标准，从薄层检测结果来看，各炮制品的斑点与巴豆对照药材一致。但是从含量测定结果来看，巴豆苷含量差别较大，采用稀释法制备的巴豆霜巴豆苷含量大约是压榨法制备的1/5。

该实验结果提示，巴豆制备巴豆霜必须经加热方能使巴豆中的巴豆毒蛋白灭活，降低溶血毒性。不同制霜方法中，如果采用淀粉稀释法，而不经加热处理，其溶血效应会依然保留；提油返油法由于可能有有机溶剂残留，导致血细胞变性，溶血和变色。

根据上述结果，稀释法对于巴豆中具有溶血毒性的蛋白没有消除作用，且降低指标性成分巴豆苷含量，使其不能满足不得少于0.8%的中华人民共和国药典标准。因此，从工艺上来说，稀释法主要是为了降低成本，能够达到含油量限度要求，而并未全面考虑药效成分保留的问题，既不符合传统炮制方法的经验，又不能达到减毒、增效的目的，该方法是否还要存留值得商榷。压榨法既能保存巴豆成分，又能除去巴豆毒蛋白的溶血毒性，是值得推广的制霜方法。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2010.

[2] 董春艳.巴豆霜的制备[J].时珍国医国药，2000，11(6)：513.

[3] 王毅，张静修.巴豆霜的新制法及其急性毒性试验[J].中药材，1993，16(4)：24.

[4] 姜玉娟，盛秀梅，朱凤琴，等.巴豆霜炮制新工艺研究[J].中医药信息，1999(3)：63.

[5] 国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草：第四卷[M].上海：上海科学技术出版社，1999.

[6] 陈彦琳，杜杰，白宗利，等.十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶(SDS)电泳比较加热前后巴豆霜蛋白成分的变化[J].世界科学技术—中医药现代化，2010，12(6)：21-24.

AComparativeStudyonQualityofCrotonisSemenPulveratumwithDifferentProcessingMethods

CHENYanlin，JINFeng，DUJie，LIANGHuan，RENYuzhen*

(ChinaNationalTraditionalChineseMedicineCorp.，Beijing102600，China)

Objective：There are four kind of processing method for processing Crotonis Semen Pulveratum.The first is squeezing fat，the second is adding starch to dilute the fat，the third is to heat the seed and then adding starch，the forth is extracting the fat and then dissolving part of fat，putting back in the residue.Comparing with the Pulveratum by the four methods，the squeezing way can keep 1.94% of croton glycosides，the diluting way made the content of croton glycosides very low，which could not to meet the Chinese Pharmacopoeia standards，the diluting way made the result of Hemolysis positive，and squeezing way or heat made it negative.According to the result，the squeezing way，which can keep active ingredient reaching standard，and reduce the toxicity，is more suitable to processing Crotonis Semen Pulveratum.

deliuting way；Squeezing way；Crotonis Semen Pulveratum；quality evaluation

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.11.021

2015-01-12)

国家中医药管理局中医药行业科研专项中药类项目(201107008)

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任玉珍，主任药师，研究方向：中药饮片质量控制；Tel：(010)61252955，E-mail：renjl@163.com