风叶止咳口服液止咳、平喘、化痰的实验研究

陆赛卫，玄振玉

(苏州玉森新药开发有限公司，江苏 苏州 215123)

·基础研究·

风叶止咳口服液止咳、平喘、化痰的实验研究

陆赛卫，玄振玉*

(苏州玉森新药开发有限公司，江苏 苏州 215123)

目的：探讨风叶止咳口服液止咳、平喘、化痰、抗炎的功能。方法：采用小鼠氨水引咳法及豚鼠枸橼酸引咳实验，观察风叶止咳口服液的止咳作用；采用在体豚鼠喷雾致喘法及离体豚鼠气管螺旋条实验，观察平喘效果；采用小鼠酚红排泌实验及大鼠毛细管排痰实验，观察祛痰作用；采用小鼠耳壳肿胀法实验，观察抗炎作用。结果：1)风叶止咳口服液能显著延长小鼠(豚鼠)浓氨水(枸橼酸)引咳的潜伏期，减少咳嗽次数；2)可有效促进小鼠气管酚红排泌，增加大鼠毛细管排痰量，有明显祛痰作用；3)对组胺引起的豚鼠离体气管平滑肌痉挛有显著解痉作用，且减轻乙酰胆碱和组胺所致豚鼠呼吸困难，并延长引喘潜伏期；4)对二甲苯所致小鼠耳廓炎症有明显抑制作用。结论：风叶止咳口服液具有良好的止咳、平喘、化痰、抗炎作用。

风叶止咳口服液；止咳；平喘；化痰；抗炎

风叶止咳口服液是苏州玉森新药开发有限公司研发的中药六类新药，有清宣肺气、祛痰、止咳、平喘的功能。主治感冒咳嗽，风热、痰热咳喘痰多，表寒里热咳嗽气喘等证。适用于急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作时中医辨证属风热、痰热、表寒里热型咳喘。笔者根据风叶止咳口服液的功能和主治，进行较全面地药效学研究，观察其镇咳、祛痰、平喘、抗炎以及其他有关药理作用，进而评价风叶止咳口服液的有效性，为临床研究提供参考。

1 材料与仪器

1.1 药品

受试药物：按照风叶止咳口服液处方比例称取矮地茶、苦杏仁、薄荷、陈皮、鱼腥草提取挥发油，蒸馏后的水溶液另器收集；药渣与枇杷叶、麻黄、竹茹、炙甘草加水煎煮2次，每次1.5 h，合并煎液，滤过，滤液和蒸馏后的水溶液合并，浓缩至适量。加入乙醇使其沉淀，静置，取上清液减压回收乙醇，并浓缩至一定体积，加入挥发油和聚山梨酯的混合物，即得质量浓度为5.35 g·mL-1(以生药计)的提取物，避光冷藏保存。实验设低、中、高3个剂量组，临用时用蒸馏水稀释成所需浓度。大鼠、豚鼠给药质量浓度分别为0.32、0.64、1.28 g·mL-1(以生药计)，临用时原浸膏加水配制。10 mL·kg-1灌胃，相当于60 kg人体临床用量的3倍、6倍、12倍；小鼠给药质量浓度分别为0.54、1.07、2.14 g·mL-1(以生药计)，临用时原浸膏加水配制。10 mL·kg-1灌胃，相当于60 kg人体临床用量5倍、10倍、20倍。

阳性对照药物：急支糖浆(太极集团重庆涪陵制药厂，规格：100 mL/瓶，批号：88071328)实验给药剂量：大鼠、豚鼠每天9 mL·kg-1(相当于临床日服剂量的6倍)，小鼠每天15 mL·kg-1(相当于临床日服剂量的10倍)；氨茶碱(山东新华制药股份有限公司，批号：1108103，规格0.1×100片)实验给药剂量：豚鼠每天0.1 g·kg-1；阿司匹林(山东鲁抗辰新药业有限公司生产，批号：1101062012，规格：25 mg×100片)实验给药剂量：大鼠每天0.1 g·kg-1，小鼠每天0.2 g·kg-1；0.9%氯化钠溶液组：灌胃给予与药物组等体积的0.9%氯化钠溶液；磷酸组胺；氯化乙酰胆碱(SCRC国药集团化学试剂有限公司，批号：Lot.No.WL20100603，规格：5.0 g×1瓶)；酚红；氯化铵；浓氨水；二甲苯；钠石灰；枸橼酸；碳酸氢钠。

1.2 动物

Wistar大鼠40只，雌雄各半，体重180～220 g，SPF级；豚鼠40只，雌雄兼用，体重150～200 g；豚鼠40只，雌雄兼用，体重(300±20)g，普通级；昆明种小白鼠200只，雌鼠80只，雄鼠120只，体重18～22 g，SPF级。由山东鲁抗医药有限公司实验动物中心提供，实验动物许可证号：scxk(鲁)20120002。

1.3 仪器

离体组织器官恒温灌流系统(HV-4，成都泰盟科技有限公司)；生物机能实验系统(BL-420，成都泰盟科技有限公司)；紫外-可见分光光度计[UV-2102C型，尤尼柯(上海)仪器有限公司]；超声喷雾器(402A，江苏鱼跃医疗设备有限公司)；分析天平(RS-232，上海恒平科学仪器有限公司)；玻璃毛细管(华西医科大学仪器厂)；针头(上海顺昌医疗器械有限公司，规格：0.6×25)；塞多利斯电子天平(BS124S，北京赛多利斯仪器系统有限公司)。

2 数据处理

应用Excel软件录入数据并建立数据库，用SPSS13.0统计软件处理数据，组间均数比较采用Dunnet-t检验。

3 方法

3.1 止咳实验

3.1.1 小鼠氨水引咳法 取健康小鼠于第1次给药前24 h进行筛选，筛选后再分组。咳嗽标准：腹肌收缩，同时张大嘴，有时可有咳声。若潜伏期小于1 min，且在1 min内出现3次以上典型咳嗽者为“有咳嗽”敏感动物，否则淘汰。取合格小鼠50只，雌雄各半，随机分为5组：空白对照组、急支糖浆组、风叶止咳口服液低、中、高剂量组。灌胃给药，剂量按小鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。第3天给药1 h后，同上剂量重复给药1次。于末次给药后0.5 h，将小鼠置于4000 mL玻璃钟罩内，应用超声喷雾器将氨水(28%)喷入钟罩，喷雾5 S，然后观察记录小鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数(3 min)[1-3]。

3.1.2 豚鼠枸橼酸引咳法 取300 g左右健康豚鼠，雌雄兼用，预先筛选。将豚鼠分别放入玻璃钟罩内，超声雾化器喷入17.5%枸橼酸雾化气5 s。喷雾停止后，观察6 min内豚鼠咳嗽次数，少于10次者不予选用。取合格的豚鼠40只，次日随机分为5组：空白对照组、急支糖浆组、风叶止咳口服液低、中、高剂量组。灌胃给药，剂量按豚鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。第3天给药1 h后，同上剂量重复给药1次。于末次给药后0.5 h，进行引咳实验，喷雾1 min，然后观察记录5 min内豚鼠的咳嗽潜伏期及咳嗽次数[4-5]。

3.2 平喘实验

3.2.1 豚鼠喷雾致喘法 取体重150～200 g豚鼠，放入玻璃钟罩内，应用超声雾化器恒速、恒量喷入2%氯化乙酰胆碱(Ach)和0.1%磷酸组胺混合液15 s，观察引起豚鼠呼吸急促、抽搐及跌倒翻滚时间，并以跌倒翻滚时间小于120 s为哮喘合格豚鼠。取哮喘合格的豚鼠40只，随机分为5组：空白对照组、氨茶碱组、风叶止咳口服液低、中、高剂量组。每组8只，灌胃给药，剂量按豚鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。第3天给药1 h后，同上剂量重复给药1次。于末次给药后0.5 h，依上述方法喷雾引喘，以5 min内豚鼠跌倒翻滚开始的时间为引喘潜伏期，超过5 min者按300 s计[6-7]。

3.2.2 离体气管螺旋条实验法 取体重(350±20)g豚鼠，按文献[1]方法制备豚鼠离体气管螺旋条(2 mm宽，3～4个气管环长)，上端与张力换能器相连，下端挂于通气钩上，置于盛有10 mL(37.0±0.5)℃克-亨液的麦氏浴管内，其中通以95%O2和5%CO2，负荷为2 g，每0.5 h更换1次营养液。平衡1 h后加入组胺(0.1 mg·mL-1)0.5 mL，气管收缩达峰值后，立即依次加入按豚鼠给药浓度的风叶止咳口服液低、中、高剂量各0.5 mL，观察不同浓度风叶止咳口服液对组胺所致气管条张力增加的影响，然后用(37.0±0.5)℃克-亨液冲洗气管螺旋条3～5次。基线恢复正常后，复加入组胺(0.1 mg·mL-1)0.5 mL，依次加入0.9%氯化钠溶液及5 mg·mL-1氨茶碱各0.5 mL，观察记录5 min内张力的变化[8-10]。依下式计算气管收缩抑制率：

气管收缩抑制率(%)=(给组胺后气管的张力-用药后的气管的张力)/给组胺后气管的张力×100%

3.3 祛痰实验

3.3.1 酚红法 酚红最大吸收峰的波长为560 nm。取体重18～22 g小白鼠50只，雌雄各半，随机分成5组：空白对照组、急支糖浆组、风叶止咳口服液低、中、高剂量组。灌胃给药，剂量按小鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。第3天给药1 h后，同上剂量重复给药1次。于实验前禁食12 h，不禁水。于末次给药后0.5 h，由腹腔注射2.5%酚红溶液0.2 mL/10 g体重，0.5 h后脱颈处死小鼠，剪开颈中皮肤，分离气管，剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管，放入盛有2.5 mL 0.9%氯化钠溶液的试管中，再加入1 mol·L-1的氢氧化钠溶液0.1 mL，离心后振摇，放置1 h。取上清液置比色管中，用分光光度计测OD值[11-12]。

3.3.2 大鼠毛细管排痰量法 取体重180～220 g大鼠40只，雌雄各半，每组8只，随机分成5组：空白对照组、急支糖浆组、风叶止咳口服液低、中、高剂量组。灌胃给药，剂量按大鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。于实验前禁食12 h，不禁水。于末次给药后0.5 h，乌拉坦(1.0 g·kg-1)腹腔注射麻醉后，仰位固定。剪开颈正中部皮肤，分离出气管，在甲状软骨下缘正中的软骨环之间用尖锐的注射针头扎一个小孔，然后插入一根玻璃毛细管，使其刚好接触气管底部表面，借以吸取气管后部的痰液。当毛细管内痰液充满时，立即另换一根。以毛细管吸取痰液的重量作为评价药物的祛痰效果。记录给药前2 h的正常分泌量，灌胃给药后(在给药1 h后，再按同等剂量重复给药1次)继续再观察4 h痰液分泌量。比较给药前后平均每小时分泌量，并作统计学分析[13-14]。

3.4 抗炎实验

取雄性小鼠40只，随机分为5组：空白对照组、阿斯匹林组、风叶止咳口服液高、中、低剂量组。灌胃给药，剂量按小鼠给药浓度，每日给药1次，连续给药3 d。第3天给药1 h后，同上剂量重复给药1次。末次给药0.5 h后，以二甲苯棉球，在小鼠右耳壳正反两面均匀涂抹(每面为5 s，每鼠用量为0.2 mL)，15 min后，将小鼠颈椎断裂，沿耳廓基线剪下两耳，对齐，用打孔器冲下圆耳片(直径为7 mm)，用扭力天平称重，以两耳重量差值为炎症肿胀度[15-16]，依下式计算用药组的肿胀抑制率：

肿胀抑制率(%)=(0.9%氯化钠溶液对照组肿胀度均值-用药组肿胀度均值)/0.9%氯化钠溶液对照组肿胀度均值×100%。

4 结果

4.1 风叶止咳口服液对氨水致小鼠咳嗽的影响

结果显示，与0.9%氯化钠溶液组相比，风叶止咳口服液高、中、低剂量组咳嗽潜伏期均延长，高剂量组与0.9%氯化钠溶液组比较差异极具统计学意义(P<0.01)；与0.9%氯化钠溶液组相比，风叶止咳口服液高、中、低剂量组咳嗽次数均明显减少，差异极具统计学意义(P<0.01)；急支糖浆对照组与0.9%氯化钠溶液对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。提示风叶止咳口服液对氨水导致的小鼠咳嗽止咳效果优于阳性对照药急支糖浆。见表1。

表1 风叶止咳口服液对氨水致小鼠咳嗽的治疗作用

注：与0.9%氯化钠溶液对照组比较，*P<0.05，**P<0.01。下同。

4.2 风叶止咳口服液对枸橼酸致豚鼠咳嗽的影响

结果显示，与0.9%氯化钠溶液组相比，风叶止咳口服液高、中、低剂量组咳嗽潜伏期均延长，其作用随剂量加大而增强，高剂量组与0.9%氯化钠溶液组比较差异有统计学意义(P<0.05)；风叶止咳口服液高、中剂量组咳嗽次数明显减少(P<0.01或P<0.05)，其作用随剂量加大而增强，且呈量效依赖关系。结果见表2。

表2 风叶止咳口服液对枸橼酸致豚鼠咳嗽的治疗作用

4.3 风叶止咳口服液对豚鼠喷雾引喘时间的影响

结果显示，与0.9%氯化钠溶液组相比，风叶止咳口服液高、中、低剂量组豚鼠引喘潜伏期均延长，高、中剂量组与0.9%氯化钠溶液组比较差异有统计学意义(P<0.05)，低剂量组引喘出现潜伏期与对照组比较有一定延长趋势，但未见显著性差异。风叶止咳口服液能有效延长组胺和乙酰胆碱联合诱发的豚鼠哮喘潜伏期，有较好的平喘作用。结果见表3。

4.4 风叶止咳口服液对豚鼠离体气管的影响

结果显示，风叶止咳口服液高、中、低剂量组对组胺导致的豚鼠离体气管螺旋条的痉挛均有显著的松弛作用，与0.9%氯化钠溶液组比较差异极具统计学意义(P<0.01)。其中，中剂量组与氨茶碱对照组松弛作用相当。提示风叶止咳口服液具有显著的平喘作用。见表4。

表3 风叶止咳口服液对豚鼠喷雾引喘时间的影响

表4 风叶止咳口服液对豚鼠离体气管的影响

4.5 风叶止咳口服液对小鼠酚红分泌的影响

结果显示，风叶止咳口服液高、中剂量组OD值均较0.9%氯化钠溶液对照组增大，酚红排泌量明显增加，差异有统计学意义(P<0.01)，高剂量组酚红排泌量多于急支糖浆对照组。见表5。

表5 风叶止咳口服液对小鼠酚红分泌量的影响

4.6 风叶止咳口服液对大鼠毛细管排痰量的影响

结果显示，风叶止咳口服液高、中剂量组明显增加大鼠毛细管的排痰量，较急支糖浆对照组增多，与0.9%氯化钠溶液组比较差异极具统计学意义(P<0.01)；与给药前相比差异极具统计学意义(P<0.01或P<0.05)。提示风叶止咳口服液有显著的祛痰效果。见表6。

4.7 风叶止咳口服液对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影响

结果显示，风叶止咳口服液高、中、低剂量组均有显著抑制二甲苯导致的小鼠耳壳肿胀的作用，高、中剂量组与0.9%氯化钠溶液对照组比较，P<0.01。其中以高剂量组作用最强，肿胀抑制率为52.4%，低于阿司匹林组(58.8%)；中、低剂量组抑制率分别为48.5%、33.2%，表明风叶止咳口服液抗炎作用随剂量增加而增强。见表7。

表6 风叶止咳口服液对大鼠毛细管排痰量的影响

注：用药前后比较，△P<0.05，△△P<0.01。

表7 风叶止咳口服液对二甲苯致小鼠耳壳肿胀的影响

5 讨论

风叶止咳口服液是国家级名医验方，从我国传统中药中提取而来，其配方符合传统中医药理论。方中以矮地茶、枇杷叶为君药，其性平和，入肺经，既清宣肺气，止咳祛痰，又避免性味太偏，有损娇脏之弊，而收宣降肺气，归于和平之功；同时臣以麻黄、薄荷、苦杏仁，宣达皮毛，肃降肺气，以止咳平喘；陈皮、竹茹清降肺胃之气，和中化痰，蠲除水饮；佐以鱼腥草清解肺热；使以炙甘草，调和诸药。统观全方，寒温并用，辛凉清润而无燥热之弊，宣降肺气而无攻伐之过，以维持肺脏之阴阳平衡，宣降协调，既达到清宣肺气，止咳、祛痰、平喘之功又照顾了肺为娇脏，不耐寒热，喜润恶燥之特点。经长期临床应用，证明其治疗风热、痰热和表寒里热型咳喘疗效确切。

本药效实验表明，风叶止咳口服液能显著延长小鼠(豚鼠)浓氨水(枸橼酸)引咳的潜伏期，减少咳嗽次数；可有效促进小鼠气管酚红排泌，增加大鼠毛细管排痰量，有明显祛痰作用；对组胺引起的豚鼠离体气管平滑肌痉挛有显著解痉作用，且减轻乙酰胆碱和组胺所致豚鼠呼吸困难并延长引喘潜伏期；对二甲苯所致小鼠耳廓炎症，有明显抑制作用；对小鼠常压缺氧耐受力无明显影响。以上结果表明风叶止咳口服液具有良好的止咳、平喘、化痰、抗炎作用，优于对照药物急支糖浆，因而该药能显著改善急、慢性支气管炎咳嗽、咳痰、喘息等临床症状，减轻呼吸道的阻力，为其在临床广泛应用提供了药效学依据 。

[1] 李仪奎.中药药理实验方法学：第2版[M].上海：上海科学技术出版社，2006.

[2] 杨文奇，甘雨，乔世带，等.清肺止咳平喘颗粒的药效学试验研究[J].实用中医内科杂志，2009，23(12)：36-37.

[3] 陈醒民，蔡金芳，邓伦平，等.复方止咳颗粒药效学实验研究[J].亚太传统医药，2010，6(6)：20-22.

[4] 王学洋.枇杷止咳胶囊的药效学研究[J].中国医药指南，2012，10(29)：76-77.

[5] 郑仁礼，彭波，陈敏，等.复方护肺颗粒镇咳祛痰平喘的药效学作用[J].中国医药药学杂志，2012，32(8)：610-612.

[6] 罗文敏，尹军强，郑先玉，等.桂龙咳喘片止咳化痰平喘药效学的研究[J].时珍国医国药，2011，22(10)：2464-2465.

[7] 张士勇，程军，彭代银，等.杏苏止咳糖浆的药效学研究[J].医药导报，2012，31(1)：8-10.

[8] 李荣，张珍祥.川芎嗪在豚鼠离体气管螺旋条中的作用[J].中国病理生理杂志，2002，18(5)：521-525.

[9] 刘晋华，李玉萍，尤光甫.清肺消咳颗粒药效学实验研究[J].中国实验方剂学杂志，2008，14(1)：33-38.

[10] 王晓秋.小儿咳喘舒颗粒的药效学研究[J].齐鲁药事，2008，27(6)：370-372.

[11] 吕献青，焦立红，王志成，等.桑通颗粒的主要药效学研究[J].辽宁中医杂志，2010，37(7)：1378-1379.

[12] 李丽，刘洪艳，金鑫，等.双银咳喘宁颗粒药效学研究[J].实验动物学，2012，29(5)：16-19.

[13] 周丽娟，罗雅琪，杨炀.慢支康胶囊药效学的实验研究[J].四川中医，2013，31(5)：51-54.

[14] 刘月英，宣丽颖，宝鲁尔，等.化痰五味散的药效学研究[J].中华中医药学刊，2011，29(3)：587-588.

[15] 耿晓招，谢达莎，刘良丽，等.参芪肺宝药效学研究[J].时珍国医国药，2011，22(7)：1613-1614.

[16] 钟志勇，郑佳琳，钟海潮，等.克咳片药效学研究[J].中成药，2013，35(8)：1609-1614.

ExperimentalStudiesonAntitussive，AntiasthmaticandExpectorantEffectsofFengyeZhikeOralLiquid

LUSaiwei，XUANZhenyu*

(SuzhouYouseenNewDrugR&DCo.，Ltd.Suzhou，Jiangsu215125，China)

Objective：To study the expectorant，anti-tussive，anti-asthmatic and anti-inflammatory effects of Fengye Zhike Oral Liquid．Methods：The antitussive effect of Fengye Zhike oral liquid was observed by using ammonia induced cough in mice and guinea pigs citric acid induced cough，The antiasthmatic effect was tested by using in vivo guinea pig asthma induced by spraying and in isolated guinea pig trachea spiral strip.The expectorant effect was observed by phenol sulfonphthalein excretion test and rat capillary expectoration method..The mouse auricle swelling test was applied to observe the anti-inflammatory effect.Results：The Fengye Zhike Oral Liquid showed (1)to prolong significantly mice (guinea pig) concentrated ammonia (citric acid) induced cough incubation period，decrease the frequency of cough；(2)to effectively promote mouse tracheal phenol red excretion in rats，increased capillary discharge sputum volume；(3)to have significant spasmolytic effects on histamine induced in guinea pig isolated tracheal smooth muscle spasm，and relieve acetylcholine and hista-mine induced dyspnea in guinea pigs and prolong the incubation period of the induced asthma；(4)to inhibit xylene induced mouse auricle swelling.Conclusion：Fengye Zhike oral liquid has significant anti-tussive，anti-asthmatic，expectorant and anti-inflammatory effects.

Fengye Zhike oral liquid，antitussive；antiasthmatic；expectorant；anti-inflammatory

2014-08-07)

*

玄振玉，教授，硕士生导师；E-mail：xuanzhenyu@163.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.5.009