苦石莲胶囊中Neocaesalpin L的含量测定△

唐炳兰，莫单丹，袁经权，刘振杰，周小雷

(广西药用植物研究所 天然药物化学组分研究室，广西 南宁 530023)

·中药工业·

苦石莲胶囊中Neocaesalpin L的含量测定△

唐炳兰，莫单丹，袁经权，刘振杰，周小雷*

(广西药用植物研究所 天然药物化学组分研究室，广西 南宁 530023)

目的：建立测定苦石莲胶囊中Neocaesalpin L含量的反相高效液相色谱法。方法：色谱柱为伊力特ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相为乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脱；检测波长为210 nm；柱温为30 ℃；流速为0.8 mL·min-1。结果：Neocaesalpin L在0.74～3.16 μg线性关系良好，r=0.999 9，Neocaesalpin L平均回收率为96.76%，RSD=1.59%(n=9)。结论：该方法简单，专属性强，重复性好，可有效控制苦石莲胶囊的质量。

苦石莲胶囊；Neocaesalpin L；含量测定；高效液相

苦石莲胶囊是广西药用植物研究所根据民间验方自制的单方制剂，具有消炎、抗菌、抗病毒、护肝等功能[1-3]，常用于感冒和肝炎的防治。苦石莲系豆科云实属植物喙荚云实(南蛇簕)CaesalpiniaminaxHance的种子，性凉，味苦。有清热解毒、化湿、散瘀止痛之功能，主治风热感冒、痢疾、淋浊、痈肿、疮癣、跌打损伤、毒蛇咬伤等。为瑶药经典老班药中“七十二风”中的南蛇风[4-5]。化学成分主要有二萜类、黄酮类、挥发油成分、植物甾醇类。现代药理研究表明，其中所含的二萜类化合物具有抗肿瘤、抗病毒等多种生物活性，是其发挥药效的重要物质基础[6]。本文前期对苦石莲的化学成分做了系统的研究，发现其富含卡山烷二萜类化合物Neocaeslpin L。药理研究发现，Neocaeslpin L有较好的抗流感病毒和抗疟疾活性[3]，是苦石莲的有效成分之一。目前文献尚未见到关于高效液相色谱测定苦石莲含量的报道，为了更好地控制本品质量，本文采用反相高效液相色谱梯度洗脱法对苦石莲胶囊中Neocaeslpin L含量进行测定，并考察该方法的准确性[7-8]。

1 仪器与试药

1.1 仪器

安捷伦1200型高效液相色谱仪；KQ-5200型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；FA2004电子分析天平(上海舜宇恒平科学仪器公司)；101-1型电热鼓风干燥箱(上海沪南科学仪器联营厂)；W201型恒温水浴锅(上海申生科技有限公司)。

1.2 试药

Neocaesalpin L对照品(自制，经NMR、HPLC测定，纯度>98%)；苦石莲胶囊(广西药用植物园制药厂，批号分别为20120407，20120418，20120502)；甲醇、乙腈为色谱纯；其他试剂均为分析纯；水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：伊力特ODS C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：乙腈-0.5%磷酸水梯度洗脱(乙腈在0～25 min为20%→50%，26～30 min为50%→20%)；检测波长：210 nm；柱温：30 ℃；流速：0.8 mL·min-1；进样量为对照品7 μL，样品10 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取Neocaesalpin L对照品2.43 mg，置于10 mL容量瓶中，甲醇定容到刻度，摇匀，制成质量浓度为0.243 mg·mL-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取苦石莲胶囊内容物约2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤，滤渣再加甲醇40 mL，超声提取30 min，过滤。合并2次滤液，水浴蒸干，用甲醇溶解并转移到10 mL容量瓶中，并定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 系统适应性试验

分别取对照品溶液7 μL、供试品溶液和不含苦石莲的阴性溶液10 μL进样测定。在选定色谱条件下，样品中Neocaesalpin L与其他组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度>1.5，理论塔板数按Neocaesalpin L峰计算不低于5000。供试品溶液与对照品溶液在同一时间出现色谱吸收峰一致，而阴性在此保留时间上未检出有吸收峰，结果见图1。

A．缺苦石莲的阴性样品；B.Neocaesalpin L对照品；C.供试品；1.Neocaesalpin L。图1 苦石莲胶囊高效液相色谱图

2.5 线性关系考察

分别精密量取对照品溶液3、5、7、9、11、13 μL进样，按2.1色谱条件测定。以进样量(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标进行回归，Neocaesalpin L的回归方程：Y=1 408.96X+3.283，r=0.999 9。结果表明，Neocaesalpin L进样量在0.739～3.159 μg时，进样量与峰面积之间有良好的线性关系。

2.6 精密度试验

取同一份Neocaesalpin L对照品溶液，精密吸取7 μL，重复进样6次，按2.1色谱条件测定峰面积，计算Neocaesalpin L对照品RSD=0.20%(n=6)，表明该试验方法精密度良好。

2.7 稳定性试验

取同一供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、12 h进样10 μL，测定Neocaesalpin L峰面积，Neocaesalpin L峰面积RSD=1.14%(n=6)，表明供试液在12 h内稳定。

2.8 重复性试验

取同一批号样品内容物约2 g，精密称定，按2.3项方法制备6份供试品溶液，精密吸取10 μL进样，按2.1色谱条件测定峰面积，结果平均质量分数为0.928 7 mg·g-1，RSD=1.85%(n=6)。

2.9 加样回收率试验

取已测含量的同一批样品约1 g，精密称定，共9份，分别精密加入样品的80%、100%、120%的Neocaesalpin L对照品(质量浓度为0.302 mg·mL-1)各3份，按2.3项下方法制备成供试溶液。分别精密吸取10 μL进样，测定Neocaesalpin L峰面积，计算回收率，Neocaesalpin L平均回收率96.76%，RSD=1.59%。结果见表1。

表1 Neocaesalpin L加样回收率测定结果

2.10 样品测定

取3批样品(批号分别为20120407，20120418，20120502)，按2.3项下制备方法制备供试品溶液，每一批制备3份，按2.1色谱条件和方法测定峰面积，按外标法计算Neocaesalpin L含量，结果见表2。

表2 苦石莲胶囊中Neocaesalpin L的含量测定结果

3 讨论

3.1 指标成分的选择

本试验选择二萜类化合物Neocaesalpin L作为苦石莲胶囊的质量控制指标，是因为Neocaesalpin L在苦石莲中含量较高，且具有较好的抗流感病毒和抗疟疾活性。

3.2 供试品溶液制备方法的优化

本试验对样品超声处理和加热回流2种提取方法进行了考察，结果显示,超声提取的效率优于回流提取，且超声方法简便快捷，提取完全。提取时间分别考察了15、30、60、90、120 min，结果30 min的提取效率最高。料液比分别考察了2∶20、2∶40、2∶50、2∶60、2∶70、2∶80，结果表明，料液比为2∶40时提取率最高，故选择加入甲醇40 mL。提取次数分别考察了提取1、2、3次，结果显示，提取2次苦石莲中的Neocaesalpin L成分基本能提取完全。综上所述，采用超声提取法，提取时间为30 min，甲醇加入量为40 mL，提取2次，苦石莲中Neocaesalpin L成分的提取率高，干扰峰减少，重复性良好。

3.3 流动相的优化

在选择流动相过程中，本试验曾采取甲醇-磷酸水、乙腈-磷酸水等度洗脱，但分离效果均不理想，经反复试验后发现以乙腈-磷酸水梯度洗脱时，能使Neocaesalpin L和相邻物质达到较好的分离，峰形较好。检测波长选择方面，对Neocaesalpin L在200～400 nm进行紫外扫描，确定最大吸收波长，结果在210 nm Neocaesalpin L有最大吸收，故选择检测波长为210 nm。

[1] 唐炳兰，缪剑华，程燕，等.壮瑶五验方抗病毒、抗菌、解热、镇痛、消炎作用研究[J].广西医科大学学报，2008，25(3)：378-380.

[2] 邹忠杰，龚梦娟.苦石莲提取物抗炎镇痛作用的实验研究[J].时珍国医国药，2009，2(12)：3016-3017.

[3] 郭美仙，刘明，施贵荣，等.苦石莲对小鼠急性实验性肝损伤的保护作用[J].时珍国医国药，2009，20(11)：2786-2787.

[4] 国家中医药管理局.中华本草：第四分册 [M].上海：上海科学技术出版社，1998：374-375.

[5] 戴斌.中国现代瑶药学[M].南宁：广西科学技术出版社，2009：235-237.

[6] 黄明堦，陈燕丹，魏道智.苦石莲化学成分及药理活性研究进展[J].中国现代中药，2010，12(1)：11-14.

[7] 覃华亮，韦怡.HPLC测定蒲地蓝消炎片中紫堇灵的含量[J].中国现代中药，2015，17(1)：58-60.

[8] 尹红卫，潘苏华.HPLC测定复方银杏叶刺梨胶囊中银杏黄酮醇苷的含量[J].中国现代中药，2015，17(1)：54-57.

Determination of Neocaesalpin L inCaesalpiniaminaxCapsule

TANG Binglan，MO Dandan，YUAN Jingquan，LIU Zhenjie，ZHOU Xiaolei*

(NaturalMedicineResearchLaboratoryofChemicalCompositionInstituteofGuangxiMedicinalPlant，Nanning530023，China)

Objective：To establish an RP-HPLC method for quantitative determination of neocaesalpin L inCaesalpiniaminaxcapsule.Methods：The separation was performed on a Elite ODS C18Column (250 mm×4.6 mm，5 μm) acetonitril-0.5% H3PO4was used as the mobile phase.The detection wavelength was at 210 nm.The temperature was maintained at 30 ℃.The flow rate was 0.8 mL·min-1.Results：The concentration of neocaesalpin L was linear within the range of 0.74-3.16 μg (r=0.999 9).The average recovery and RSD of the method were 96.76% and 1.59% (n=9).Conclusion：The method is accurate，specific，reproducible which can effectively be used in quality control of neocaesalpin L inCaesalpiniaminaxcapsule.

Caesalpiniaminaxcapsule；Neocaesalpin L；content determination；HPLC

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.9.018

2015-06-04)

广西壮族自治区中医药管理局中医药科技专项(GXYZ1112)；桂科转(1298009-22)；南宁市科技攻关与新产品试制(201101088C)

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周小雷，高级工程师，研究方向：天然药物化学；E-mail：zhouxiaolei123@163.com