猴耳环消炎胶囊质量标准研究

彭亮，李诒光，陈杰，饶毅，魏惠珍，眭荣春

(江西中医药大学，江西 南昌 330006)

·中药工业·

猴耳环消炎胶囊质量标准研究

彭亮，李诒光*，陈杰*，饶毅，魏惠珍，眭荣春

(江西中医药大学，江西 南昌 330006)

目的：研究建立猴耳环消炎胶囊的质量标准。方法：采用薄层鉴制法(TLC)为对猴耳环消炎胶囊中没食子酸进行定性鉴别；采用高效液相色谱法同时对猴耳环消炎胶囊中没食子酸和槲皮素进行定量测定。色谱柱为Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为乙腈-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脱；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长为254 nm；进样量为5 μL。结果：薄层斑点清晰，分离效果好。没食子酸在0.602～18.1 μg线性关系良好(r=0.999 5)，平均回收率为98.9%，RSD值为1.8%；槲皮素在0.016 9～0.507 μg线性关系良好(r=0.999 6)，平均回收率为99.5%，RSD值为1.5%。结论：建立的方法简便可行、准确，可为猴耳环消炎胶囊的质量控制提供参考。

猴耳环消炎胶囊；质量标准；薄层鉴别；高效液相色谱法；没食子酸；槲皮素

猴耳环为豆科植物猴耳环Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.干燥略带小枝的叶，又名蛟龙木、洗头木等，属多年生乔木，是一种能治疗多种热毒症候，珍稀且独特的南方药材[1]。民间传统以猴耳环枝叶煮水来洗疮、化脓性伤口及湿疹等，其去腐生新功能独特。猴耳环消炎胶囊为猴耳环药材单方制剂，收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第6册(WS3-B-1249-92)，具有清热解毒、凉血消肿、收湿敛疮、止泻等作用[2]，用于上呼吸道感染、急性咽喉炎、急性扁桃体炎、急性胃肠炎等，亦可用于细菌性痢疾。现代研究表明，猴耳环主要含有黄酮类、酚酸类等成分，如没食子酸、槲皮素等[3-4]。其中，没食子酸具有抗炎、抑菌、抗病毒等功能；槲皮素具有抗氧化、清除自由基、增强免疫功能等作用[5-6]，与猴耳环消炎胶囊的药理作用相同，是其主要有效成分[7]。目前，尚没有对猴耳环消炎胶囊进行质量标准研究的文献报道。为有效控制猴耳环消炎胶囊的质量，本文首次建立了该胶囊中没食子酸的薄层鉴别方法，并建立了同时测定没食子酸和槲皮素的高效液相色谱法，为猴耳环消炎胶囊质量标准的制定提供参考。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪(包括Agilent ChemStation B.03.01软件、G1379A在线真空脱气机、G1311A四元泵、G1367A自动进样器、G1316A柱温箱、G1315B DAD检测器)；SK5200LH超声波清洗器(上海科导超声仪器有限公司)；AB204-N型精密分析天平(METTLER TOLEDO上海衡器有限公司)；HH-4数显恒温水浴锅(江苏省金坛市荣华仪器制造有限公司)。

1.2 试药

猴耳环消炎胶囊由贵州良济药业有限公司、广州莱泰制药有限公司、广州市花城制药厂提供，规格：0.4g/粒；猴耳环药材由安徽省亳州市中信中药饮片厂提供，经鉴定为豆科植物猴耳环Archidendronclypearia(Jack)Nielsen.；没食子酸对照品、槲皮素对照品(中国食品药品检定研究院，批号分别为110831-201204，100081-200907)；薄层色谱用硅胶G(青岛海洋化工厂)；乙腈为色谱纯(山东禹王实业有限公司化工分公司)；水为娃哈哈饮用纯净水；甲醇等其他试剂均为分析纯。

2 没食子酸的薄层鉴别

取猴耳环消炎胶囊内容物及缺猴耳环阴性样品各2 g，分别加水100 mL，回流提取30 min，滤过，滤液用乙酸乙酯振摇提取2次，每次30 mL。合并乙酸乙酯液，减压回收至干，残渣加甲醇1 mL使其溶解，作为供试品溶液和阴性对照溶液。取猴耳环药材1 g，加水100 mL，同法制成猴耳环对照药材溶液。另取没食子酸对照品，加甲醇制成质量浓度为5 mg·mL-1没食子酸对照品溶液。照薄层色谱法(《中华人民共和国药典》2010年版一部附录ⅥB)试验，吸取上述供试品溶液和对照品溶液各2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲酸乙酯-甲酸(5∶5∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%三氯化铝溶液，于105 ℃烘约5 min，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品色谱中，在与对照品和药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无此斑点，见图1。

注：1.没食子酸对照品；2.猴耳环对照药材；3.阴性供试品；4～6.猴耳环消炎胶囊供试品(广州莱泰制药，批号分别为140101，140601，140702)图1 猴耳环消炎胶囊薄层鉴别色谱图

3 没食子酸和槲皮素定量测定

3.1 对照品溶液的制备

取没食子酸、槲皮素对照品适量，精密称定，置25 mL量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，制成混合对照品溶液(每mL中分别含没食子酸0.602 0 mg、槲皮素0.016 9 mg)。

3.2 供试品溶液的制备

取本品内容物约1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50 mL，称定重量，回流提取1.5 h，取出，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜过滤，取滤液，即得。

3.3 色谱条件与系统适应性试验

色谱柱Odyssil C18(250 mm×4.6 mm，5μm)；流动相为乙腈(A)-0.2%磷酸水溶液(B)，梯度洗脱(0～7 min，8% A；7～17 min，8%～24% A；17～27 min，24%～27% A)；流速为1.0 mL·min-1；柱温为30 ℃；检测波长为254 nm；进样量为5 μL。结果表明，混合对照品溶液和供试品溶液的色谱图中没食子酸、槲皮素色谱峰无拖尾，分离度良好，见图2～3。

图2 混合对照品色谱图

图3 供试品色谱图

3.4 线性关系考察

精密吸取3.1项下制备的混合对照品溶液1、5、10、20、30 μL，注入液相色谱仪中，按上述色谱条件测定，记录色谱图。以对照品进样量(μg)为横坐标X，以峰面积为纵坐标Y，绘制标准曲线，并进行线性回归。得回归方程，没食子酸：Y=620.26X+747.48(r=0.999 5)；槲皮素：Y=755.66X+4.467 5(r=0.999 6)。结果表明：没食子酸对照品进样量在0.602～18.1 μg与峰面积有良好线性关系；槲皮素对照品进样量在0.016 9～0.507 μg与峰面积有良好线性关系。

3.5 精密度试验

取3.1项下的混合对照品溶液，连续进样6次，每次5 μL，按3.3项下色谱条件测定峰面积，没食子酸的平均峰面积为294.6，RSD为0.75%；槲皮素的平均峰面积为79.9，RSD为1.1%，表明仪器精密度良好。

3.6 稳定性试验

取猴耳环消炎胶囊(贵州良济药业有限公司，批号：20121008)，按3.2项下方法制备供试品溶液，分别在供试品溶液制备后0、2、4、8、12、24 h，按3.3项下色谱条件测定。结果没食子酸的平均峰面积的RSD为0.59%；槲皮素的平均峰面积的RSD为1.6%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

3.7 重复性试验

取猴耳环消炎胶囊(贵州良济药业有限公司，批号：20121008)6份，按3.2项下方法制备供试品溶液，按3.3项下色谱条件进样测定。结果没食子酸的平均质量分数为121.7 mg·g-1，RSD为0.31%；槲皮素的平均质量分数为2.63 mg·g-1，RSD为2.3%，表明该方法重复性良好。

3.8 加样回收试验

取已知含量猴耳环消炎胶囊(广州花城制药厂，批号：20140501)约0.5 g，共6份，精密称定。分别精密加入一定量的没食子酸对照品和槲皮素对照品，按3.2项下方法制备供试品溶液，按3.3项下色谱条件测定，计算回收率，见表1。没食子酸平均回收率为98.9%，RSD为1.8%；槲皮素平均回收率99.5%，RSD为1.5%，表明该方法的准确度良好。

表1 没食子酸和槲皮素加样回收率试验结果(n=6)

3.9 样品测定

取10批猴耳环消炎胶囊，按3.2项下方法制备供试品溶液，按3.3项下色谱条件测定，将测得的没食子酸和槲皮素的峰面积值各自代入线性回归方程中，计算各样品中没食子酸和槲皮素的含量，结果见表2。

表2 猴耳环消炎胶囊中没食子酸和槲皮素含量(n=3) mg/粒

4 讨论

4.1文献报道，没食子酸与槲皮素在254、360 nm处均有较强吸收[8-9]，但本品在360 nm处槲皮素峰面积较小，故选择检测波长为254 nm，可与其他杂质峰完全分离。

4.2由于没食子酸与槲皮素极性差别较大，必须采用梯度洗脱。同时，在流动相中加入磷酸可明显改善没食子酸和槲皮素色谱峰的峰形。

4.3猴耳环消炎胶囊中的槲皮素含量较低，不同厂家的有效成分波动较大，提示成品的工艺还有待完善，成品质量有待提高。

[1] 《全国中草药汇编》编写组.全国中草药汇编[M].北京：人民卫生出版社，1986：613-615.

[2] 广东省食品药品监督管理局.广东省中药材标准：第一册[S].广州：广东科学技术出版社，2004：197-199.

[3] 苏妙贤，唐之岳，黄伟欢，等.猴耳环化学成分研究[J].中药材，2009，32(5)：705-707.

[4] 李镜友，罗巧红，张曼，等.HPLC法测定不同采收期猴耳环中没食子酸的含量[J].中药材，2009，32(6)915-916.

[5] 柯发敏，张开莲.没食子酸的研究进展[J].泸州医学院学报，2011，34(4)：440-442

[6] 宋玉乔，姚凌云，曹蔚，等.槲皮素药理作用研究近况[J].西北药学杂志，2002，2(17)：40-42.

[7] 刘永刚，王晓东，张小兵.猴耳环质量标准研究[J].中国药师，2008，11(1)：29-31.

[8] 李艳芳，夏泉，许风清，等.HPLC法同时测定热淋清制剂中没食子酸和槲皮素的含量[J].中国实验方剂学杂志，2008，14(12)：15-17.

[9] 梁泰刚，刘伟，赵承孝，等.HPLC法同时测定养心草中没食子酸、槲皮素和山柰酚的含量[J].光谱实验室，2009，26(4)：881-884.

QualityStandardofHouerhuanAnti-inflammatoryCapsules

PENGLiang，LIYiguang*，CHENJie*，SUIRongchun

(JiangxiUniversityofTraditionalChineseMedicine，Nanchang330006，China)

Objective：To establish the quality standards for Houerhuan anti-inflammatory capsules.Methods：The gallic acid was identified by TLC，the contents of gallic acid and quercetin were determined by HPLC.The chromatographic separation was performed on Odyssil C18column(250 mm×4.6 mm，5 μm)，the mobile phase was acetonitrile-0.2% H3PO4in gradient elution.The flow rate was 1.0 mL·min-1，and the column temperature maintained at 30℃.The detection wavelength was 254 nm，and the injection volume was 5 μL.Results：TLC spots were clear，and good separated.The linearity of gallic acid was good in the range of 0.602-18.1 μg(r=0.999 5)，and the average recovery was 98.9%(RSD=1.8%).The linearity of quercetin was good in the range of 0.016 9-0.507 μg(r=0.999 6)，and the average recovery of 99.5%(RSD=1.5%).Conclusion：The established method is simple，accurate and can provide reference for quality control of Houerhuan anti-inflammatory capsules.

Houerhuan anti-inflammatory capsules；quality standard；TLC；HPLC；gallic acid；quercetin

2014-12-10)

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李诒光，主任中药师，研究方向：中药质量评价与开发；E-mail：lyg@jzjt.com 陈 杰，副教授，研究方向：中药质量评价与开发；E-mail：813680107@qq.com

10.13313/j.issn.1673-4890.2015.7.015