正丁胺对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响

陆琼　马玲

正丁胺对人肝癌细胞Bel-7402增殖的影响

陆琼1马玲2

目的 研初步检测正丁胺作用下人肝癌Bel-7402细胞的增殖情况。方法 体外培养人肝细胞癌Bel-7402细胞，予不同浓度正丁胺进行干预作为正丁胺干预组，无药物组作为空白对照组。绘制细胞生长曲线，并利用MTT体外检测法探讨该药物对Bel-7402细胞的半致死量，进行了初步的体外活性评价。结果 较低浓度的正丁胺能够促进肿瘤细胞增殖，正丁胺浓度高于2 mmol/L时，细胞增殖速度减缓。结论 当正丁胺达到一定浓度时才具有一定的体外肿瘤生长抑制作用。

正丁胺；肝癌细胞；细胞增殖

目前，肝细胞癌已经成为严重威胁人类健康和生命的最常见、恶性程度最高的恶性肿瘤之一，已成为癌症致死的第三大病因。据统计，肝癌患者中，低收入国家比例超过80%，中国的患者就占50%。当前，化疗是治疗恶性肿瘤的重要手段之一，而传统的具有抗肿瘤活性的铂类化疗药物具有严重的毒副作用且获得性耐药等特点限制了其在临床上的应用。为了克服这一缺点，许多高效低毒的铂配合物被合成，用于研究。正丁胺常作为铂配合物的一种惰性基团被应用于抗肿瘤药物研究[1]。本文简要探索了正丁胺对肝癌细胞的增殖与凋亡的影响，初步观察人肝癌Bel-7402细胞对该药物的敏感性。

1　材料与方法

1.1材料及细胞培养：

人肝癌细胞Bel-7402从中科院上海细胞库获得。RPMI1640培养基、胎牛血清从美国Gibco公司购买。将Bel-7402细胞接种于含有10%灭活胎牛血清的RPMI 1640培养液中，置于37℃、5%CO2细胞培养箱中培养，每2～3天换1次液，取对数生长期的细胞用于实验。

1.2细胞生长曲线制作及MTT法检测

取生长状态良好的Bel-7402细胞，用胰酶消化，台盼蓝计数法计算活细胞，制成浓度为5×105/mL的细胞悬液。精确地将细胞分别接种于96孔板的培养孔内，每组细胞做6个复孔，每孔接种200 µL，正丁胺干预组每孔分别加入相应浓度的正丁胺（0.25、 0.5、1、2、4、8、16、32 mmol/L），分别培养12、24、36、48、60小时，每组选取3孔细胞消化并计数，计算均值。根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数/mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。

每组剩下的3孔分别加入浓度为5 mg/mL的MTT溶液20 µL，于培养箱中继续孵育4小时后，终止培养，小心将孔内培养上清液吸弃。若有悬浮生长的细胞，则需先离心（1 000 rpm，5 min），然后再弃去培养孔内的培养液。将150 µL DMSO加入每孔内，振荡10 min，充分溶解结晶物。然后选择490 nm波长，在酶联免疫检测仪上测定各孔的光吸收值，并记录结果。计算正丁胺对Bel-7402细胞的生长抑制率，推算12 h半致死量（IC50）。

2　结果

随着药物浓度的升高和作用时间的延长，发现当正丁胺浓度低于1 mmol/L时，人肝细胞癌Bel-7402细胞的增殖速度高于对照组，而当正丁胺浓度高于2 mmol/L时，Bel-7402细胞的增殖速度低于对照（图1）。采用MTT法测定正丁胺的体外活性时，以药物浓度为横坐标，细胞存活率为纵坐标绘制细胞生长曲线，应用两点法，推算该药物对Bel-7402细胞的IC50为12.5 mmol/L。

图1 Bel-7402细胞生长曲线

3　讨论

一般认为，控制肿瘤发生发展的关键是抑制肿瘤细胞的增殖，而目前，很多抑制肿瘤细胞增殖的高效广谱的药物化疗效果并不理想，出现很多不良反应[2]。肝癌复发转移的重要原因就是肝癌多药耐药。目前，肿瘤药物干预研究的热点之一就是如何逆转多药耐药性。人肝癌Bel-7402细胞株作为一种体外模型，多用于新型抗癌候选药物研究[3]。黄芩苷、蜂毒素、虫草素、川芎嗪、蛇葡萄素等是目前国内学者从天然药物中筛选出的对肝癌Bel-7402细胞具有显著抑制活性天然活性成分，并研究发现这些成分在肝癌的辅助治疗、逆转耐药性等方面具有较高应用价值[4]。正丁胺作为一种医药中间体，除了用于抗糖尿病药物的生产，目前也多采用用于抗癌药物的研究。在本文研究中，发现往人肝癌细胞Bel-7402培养液中加入微量正丁胺，细胞生长状态良好增殖速度较快，当正丁胺浓度高于2 mmol/L时，细胞增殖速度减缓。随着浓度升高，细胞凋亡速度加剧。当浓度达到12.5 mmol/L时，达到细胞生长12小时半致死量。但正丁胺具体对于肝癌细胞的增殖与凋亡情况，还需采用多种体外生物活性检测法进行检测，本文为后续研究提供数据参考。

[1] 晋杰，普绍平，彭娟，等. 顺式-草酸-正丁胺/环戊胺合铂(Ⅱ)

的合成、表征及抗肿瘤活性[J]. 中国医药指南，2014，12(11)：47-48.

[2] 唐浩，梁平，李荣萍，等. 脱氧氟尿昔增强顺铂对人肝癌BEL-

7402细胞株的增殖抑制作用[J]. 中华普通外科杂志，2007，22(9)：

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[3] 钟兴国，龚仁华，孙登群，等. 人肝癌多药耐药细胞系Bel-7402／DOX两种模型比较[J]. 武警医学，2014，25(7)：728-732.

[4] 木合布力·阿布力孜，王永波，高苗苗，等. 甘草次酸-顺铂复合物的制备及其对人肝癌Bel-7402细胞的抗癌活性研究[J]. 天然产物研究与开发，2014，26(8)：1193-1197.

Effects of N-Butylamine on the Proliferation of Human Bel-7402 Hepatocarcinoma Cell Line

LU Qiong1MA Ling2, 1 Department of Medical and Biological in Luohe Medical College, Luohe 462000, China; 2 Department of physiology in Luohe Medical College, Luohe 462000, China

Objective To investigate the effects of n-Butylamine in human hepatocellular carcinoma Bel-7402 cells. Methods Human hepatocellular cancer Bel-7402 cells were cultured in vitro, they were treated with diferent concentrations of n-Butylamine as trial group and without n-Butylamine as control group. Cell growth curve was done, and the cell viability was measured by MTT assay. Results Promoting Bel-7402 proliferation when the n-butylamine at lower concentrations, cell proliferation slowed down when the concentrations of n-butylamine was higher than 2mmol/L.Conclusion N-Butylamine reaches a certain concentration can inhibit the growth of tumor in vitro.

N-Butylamine, Hepatocelluar carcinoma cel1, Proliferation

·临床研究·

R91

B

1674-9308（2015）09-0202-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.09.175

1 462000 漯河医学高等专科学校医学生物教研室；2 462000漯河医学高等专科学校生理教研室