天津市妇女人乳头瘤病毒感染各亚型分布的研究

黎科　李琳

天津市妇女人乳头瘤病毒感染各亚型分布的研究

黎科1李琳2

目的 调查天津市妇女宫颈人乳头瘤病毒（HPV）感染现状和基因各亚型分布情况，为研究宫颈癌疫苗和防治宫颈癌提供依据。方法 采用聚合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction，PCR）反向点杂交基因芯片技术对6 132名做宫颈癌筛查的女性宫颈脱落细胞标本进行HPV基因分型检测，分析HPV在女性人群中的感染率、基因型别和年龄分布特点。结果 6 132例标本中HPV阳性例数为1 296例，总感染率为21.14%。共检测出23种基因亚型，其中高危型18种、低危型5种。高危型HPV52及16感染率最高，分别为11.46%和10.85%，高危型出现次数的排序：52＞16＞58＞53＞51；低危型HPV6感染率最高，其次为HPV43。20～29岁及30～39岁组感染率远高于其他年龄组，差异有统计学意义。结论 天津市妇女HPV52、16型感染最常见，年轻妇女HPV感染率最高，HPV分型检测在宫颈癌的早期预防、早期诊断具有重要意义。

人乳头瘤病毒；亚型分布；筛查

1　资料与方法

1.1一般资料

对2013年1月～2014年3月在天津市金域医学检验所基因室做宫颈癌筛查的6 132例妇女进行HPV分型检测。年龄20～75岁，平均年龄42.5岁。所有筛查者均无妊娠，无子宫切除史，无妇科肿瘤史。

1.2研究方法

1.2.1HPV DNA取样 窥阴器暴露宫颈，使用专用的宫颈采样器在宫颈内口及鳞-柱交界处沿同一方向旋转5圈，然后刷头放入专用细胞保存液，最后标明筛查者信息，立即送病理科检查。

1.2.2DNA的分离提取 取保存有宫颈脱落细胞保存液1 ml，以13 000 r/rain离心10 min，弃上清液后，按照试剂盒说明（深圳亚能生物技术有限公司制备）提取DNA。取出PCR反应管，分别加入已提取的待测样本DNA 5 µl，反应总体系为25 µl。本试剂盒利用HPV基因特点设计特异引物，可以扩增出包含23种HPV基因型的目标片段，再将扩增产物与固定在膜条上的23种分型探针进行杂交，依据信号判断是否有这些HPV基因型的存在，可同时检测18种高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、82、83；5种低危亚型：6、11、42、43、81。

1.2.3结果判断标准 根据试剂盒说明书判断HPV型别，即膜条上的PC位点必须出现蓝色显色信号视为有效。每一批同时扩增阳性对照和阴性对照各一份。HPV单一感染时，在膜条上相应HPV亚型探针位点处可见一蓝紫色圆点；双重或多重感染时，在膜条上可见2个或2个以上显色圆点。

2　结果

2.1HPV各亚型感染及分布情况

筛查6 132例标本中检测出2 193株病毒，高危亚型组1 687株（76.93%），低危亚型组506株（23.07%）。高危型HPV52及16感染率最高，分别为11.46%及10.85%，高危型出现次数的排序：52＞16＞58＞53＞51＞68＞56＞59＞66＞18；低危型HPV6感染率最高，其次为HPV43。详见表1。

2.2不同年龄HPV感染情况

6 132例标本中检测出HPV阳性者为1 296例，阳性率为21.14%。随着年龄的增加，HPV感染率逐渐降低，20～29岁组及30～39岁组感染率最高，60～75岁组感染率最低。20～29岁、30～39岁与40～49岁、50～59岁及60～75岁HPV阳性率差异有统计学意义（χ2值分别为19.65、23.26、65.87、17.43、21.43、63.46，P＜0.01）；40～49岁、50～59岁与60～75岁的HPV阳性率差异有统计学意义（χ2值分别为22.17、15.90，P＜0.01）。见表2。

3　讨论

3.1HPV基因亚型分布情况分析

本研究对天津市6 132例妇女进行HPV基因亚型检测，感染率为21.14%。此研究HPV总感染率与湘潭地区21.79%接近，与沈阳地区17.0%及杭州市27.8%有一些差距[2-4]。这可能与地域差异及筛查人群年龄结构的差异有关。从亚型分布的情况看，本研究高危型感染率前5位为52、16、58、53、51型，这与湘潭、沈阳、重庆、无锡等地区有一定的差异。从全球范围看，欧洲地区的型别分布以HPV16、31、18型为主，亚洲地区以HPV 16、18、33为主，南美地区以HPV16、58、18型为主[5]，从中可以观察到HPV亚型分布具有一定的地域性及人群种族分布特点。所以进行本地区的HPV基因亚型分布情况的研究具有非常重要的意义。3.2不同年龄HPV感染及HPV致宫颈癌的分析

表1　HPV基因亚型分布情况（株）

表2 不同年龄HPV感染情况

本研究统计和分析了较大数量的妇女HPV基因亚型检测结果，显示20～39岁组感染率最高，随着年龄增长感染率下降，60～75岁组感染率最低。这与SmithJS[6]等研究结果基本一致。有相关研究表明HPV感染者主要是性生活活跃者。HPV是宫颈上皮内瘤变发病的重要因素，但大多数HPV感染是一过性的。当病毒或宿主基因突变时，可诱导HPV的基因片段整合到宫颈上皮细胞基因中，使宫颈上皮内瘤变向宫颈癌进展的生物学病因使高危型HPV持续感染[7]，因此有必要早期控制年轻妇女HPV感染后转变为宫颈癌。本研究结果表明20～39岁组感染率最高，所以要特别重视此年龄段的HPV分型检测。

3.3高危型HPV检测预防宫颈癌的重要意义

本研究表明天津市妇女高危型HPV感染的主要亚型为52、16，其次为58、53、51。这项研究对天津市防治宫颈癌，研究本地区的HPV疫苗有参考价值。本研究显示HPV感染率最高的年龄段为20～39岁，因此HPV分型检测对年轻妇女宫颈癌的早期预防、早期诊断具有重要意义。

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Study on the Genotype Distributions of Human Papillomavirus Infection in Women of Tianjin

LI Ke1LI Lin2, 1 Department of Obstetrics and Gynecology, Tianjin University Hospital, Tianjin 300072, China, 2 Department of Gene, the Center of Tianjin KingMed Diagnostics, Tianjin 300384, China

Objective To provide theoretical basis for the development of vaccine and the treatment of cervical cancer, the status of human papillomavirus (HPV) in cervical cells of Tianjin women was investigated. Methods HPV genotype in 6 132 screening women was detected by human papillomavirus polymerase chain reaction (PCR) types diagnostic kit. The infection rate, genotype and age distribution in the female were analyzed.Results The HPV infection women was 1 296 in screening 6 132 cases and the total infection rate was 21.14%. 23 genotypes were found. 18 kinds of the high risk and 5 kinds of low risk HPV genotypes were detected. The top risk genotypes were HPV52 and HPV16, and their infection rates were 11.46% and 10.85%, respectively. The infection rate of high risk HPV sorted as HPV52>16>58>53>51. The infection rate of HPV6 was highest in the low risk genotypes and was in the second rate for HPV43. The infection rate of 20~29 and 30~39 groups was much higher than that of the other groups. The difference was statistically significant. Conclusion HPV52 and HPV16 were the major subtypes in the women of Tianjin. The infection rate of young women was higher than that of the other age groups. The detection of HPV genotypes is very meaningful in early prevention and diagnosis of cervical cancer.

Human papillomavirous, Genotype distribution, Screening宫颈癌是威胁女性生命的重要疾病之一，病死率居女性恶性肿瘤的第二位，仅次于乳腺癌[1]。有报道近20年来，宫颈癌发病率有年轻化趋势。人乳头瘤病毒（human papillomavirus，HPV）已发现有120种不同的HPV亚型，其中约50余种亚型可感染生殖器官，高危亚型是女性子宫颈癌发生的直接原因。为探讨天津市妇女HPV感染及HPV亚型的分布情况，对6 132名妇女进行HPV基因分型检测，现将结果归纳分析如下。

·临床研究·

R737

B

1674-9308（2015）08-0014-02

10.3969/j.issn.1674-9308.2015.08.012

1 300072 天津大学医院妇产科；2 300384 天津金域医学检验所基因室

黎科，E-mail：liketd@tju.edu.cn