类风湿关节炎患者血清HMGB1及TGF-β1的表达及意义

何　蛟，贾治林

(1.大连医科大学附属第一医院 图书馆,辽宁 大连 116011； 2.大连医科大学附属第一医院 血液内科，辽宁 大连 116011)

类风湿关节炎患者血清HMGB1及TGF-β1的表达及意义

何蛟1，贾治林2

(1.大连医科大学附属第一医院 图书馆,辽宁 大连 116011； 2.大连医科大学附属第一医院 血液内科，辽宁 大连 116011)

目的探讨类风湿关节炎(RA)血清中的HMGB1和TGF-β1的表达及临床意义。方法112例经确诊的RA患者作为病例组，其中活动期RA患者67例，非活动期RA患者45例，选取健康体检者80人作为对照组。ELISA法测定3组血清中HMGB1及TGF-β1含量。结果活动期RA患者的血清HMGB1水平(59.40±18.74)高于非活动期患者(16.58±6.02)和对照组(13.97±2.43)，差异均有显著性意义(P<0.05)。非活动期RA患者和对照组相比，血清HMGB1水平差异无显著性意义(P>0.05)。活动期RA患者(17.13±11.26)和非活动期患者(22.42±13.70)的血清TGF-β1水平均低于对照组(28.35±8.14)，活动期RA患者血清TGF-β1水平低于非活动期患者，差异有显著性意义(P<0.05)。结论血清中HMGB1及TGF-β1含量与RA的疾病活动有关，但两者的作用机制仍需要进一步研究。

类风湿关节炎；HMGB1；TGF-β1

[引用本文]何蛟，贾治林. 类风湿关节炎患者血清HMGB1及TGF-β1的表达研究[J].大连医科大学学报，2015,37(2)：148-150.

类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)是一种以关节滑膜炎症为特点的慢性自身免疫性疾病,可导致骨的侵蚀和关节的破坏，造成关节畸形，目前临床上缺乏根治方法，预后较差[1]。新近研究显示，高迁移率族蛋白-1(high mobility group box chromosomal protein 1，HMGB1)可能在其发生发展中具有重要作用，但其在外周血中的表达存在争议[2]。而转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1，TGF-β1)在RA中具有导致RA曲型滑膜改变、加的多重作用[3]，但其究竟是以致病作用为主还是保护作用为主仍需要进一步探索。本实验采用病例对照研究设计，双抗体夹心(enzyme-linked immune-sorbent assay,ELISA)法测定RA患者及对照组血清中的HMGB1和TGF-β1，旨在探索两者在RA中的作用，为发掘RA治疗的新方法提供依据。

1　资料与方法

1.1研究对象

以2012年1月1日—2014年6月30日大连医科大学附属第一医院确诊的112例类风湿关节炎作为病例组，所有病例均采用美国风湿病学会(ACR)1987分类标准，且排除4周内使用过激素、非甾体镇痛药的患者及患有感染、肿瘤、严重心脑血管疾病及其它免疫性疾病的患者。病例组中活动期RA患者67例，其中男性19例，平均年龄(55.1±15.4)岁，女性48例，平均年龄(54.3±13.6)岁；非活动期RA患者45例，其中男性14例，平均年龄(52.9±14.3)岁，女性31例，平均年龄(55.4±14.7)岁。选取同地区性别及年龄相近的健康人80人作为对照组，对照组选取的是2013年6月—2014年3月的健康体检者，年龄性别根据文献及前期研究基础确定，其中男性25例，平均年龄(54.6±16.8)岁；女性55例，平均年龄(53.0±17.2)岁。各组之间性别及年龄差异无显著性意义。

1.2研究方法

3组受试对象均于清晨空腹采集新鲜静脉血2 mL,离心分离血清并于-20 ℃保存。

HMGB1及TGF-β1含量的测定采用均ELISA法，严格按照试剂盒提供的方法和流程操作。TMB显色，HMGB1含量的测定用酶标仪在波长450 nm处检测OD值，TGF-β1含量的测定在490 nm处检测OD值。用CurveExpert 1.4软件进行分析，计算标准曲线的直线回归方程式，将OD值带入方程式，求得血清中HMGB1及的TGF-β1实际浓度。

1.3统计学方法

2　结　果

活动期RA患者的血清HMGB1水平显著高于非活动期患者和正常对照组，差异有显著性意义(P<0.05)。非活动期RA患者和正常对照组相比，血清HMGB1水平差异无显著性意义 (P>0.05)。见表1。

活动期RA患者和非活动期患者的血清TGF-β1水平均低于正常对照组，差异有显著性意义(P<0.05)。活动期RA患者血清TGF-β1水平低于非活动期患者，差异有显著性意义(P<0.05)。见表1。

表1　3组对象血清中HMGB1和TGF-β1含量Tab 1 HMGB1 and TGF-β1 of three groups

3　讨　论

类风湿性关节炎(RA)是一种以关节滑膜炎症为特征的慢性自身免疫性疾病。RA的发病机制尚未完全明了，但普遍认为其与细胞因子网络有关，如TGF-β1、HMGB1、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)、白介素-1(interleukin-1，IL-1)等均被认为可能与引起机体炎症反应及组织损伤、调节血管内皮生长、成纤维细胞增生等有密切关系[4]。

HMGB1作为一种新型的炎性细胞因子，与脓毒症、肺炎、败血症、内毒素血症等多种炎性和自身免疫性疾病的发病有关。研究显示，HMGB1在实验性关节炎大鼠的滑膜巨噬细胞及间质内均存在异常表达[5]，在RA患者关节液中的含量也明显增高[6]，但其在外周血中的表达存在争议。Goldstein等[7]的研究显示，RA患者血清HMGB1含量明显高于正常人(71 ng/ mL vs. 18 ng/mL，P<0.001)；但也有学者持不同意见[8]。本研究结果显示活动期RA患者的血清HMGB1水平显著高于非活动期患者和正常对照组，与Goldstein等的研究一致。说明HMGB1可能与RA的发病具有重要关系，同时也提示HMGB1可用于评价RA的病情活动情况。有研究证明血清中的HMGB1可能是从细胞核内分泌而来,通过非典型的、囊介导的分泌通路,由溶血磷脂胆碱激发溶酶体的胞吐作用而产生[9]。也有研究认为其可能来自于巨噬样滑膜细胞的主动分泌或坏死、损伤的细胞[10]，但其确切来源目前仍不清楚，作用机制也仍有待于更深入研究。

TGF-β1是一种多功能的细胞因子，可调节细胞生长及分化，对RA具有双重作用。一方面其可以抑制血管内皮细胞增生、调控成纤维细胞生长和拮抗炎性细胞因子，从而维护关节软组织完整性、进行免疫抑制，对RA的治疗和恢复产生积极的作用[11]。有研究显示，全身性应用TGF-β1可能有助于预防和治疗RA，连续腹腔注射7～14 d，可起到防止胶原诱发小鼠关节炎症的作用，显著降低关节炎症的发生。将TGF-β1注射入链球菌壁导致的变态反应性关节炎鼠模型关节腔后，也可显著减轻关节肿胀,单核/巨噬细胞浸润,血管翳形成,骨和软骨破坏[12]。其抗炎症机制可能与TGF-β1作用于内皮细胞,通过抑制E-选择素表达,继而阻断白细胞向炎症部位的粘附和定位有关。另一方面，TGF-β1作为一种强力的单核细胞趋化因子，在炎症早期局部聚集，即可趋化和激活单核细胞,将T细胞吸引至炎症部位,从而加重滑膜炎症，使组织呈现免疫亢进状态，加速RA的发生和发展[13]。研究显示，局部应用TGF-β1会启动并加速炎症反应，将TGF-β1注射入健康大鼠关节腔后，可迅速引起炎症细胞侵润，导致滑膜炎，该作用与TGF-β1上调白细胞粘附分子的表达，促进其粘附和浸润有关。本研究结果显示活动期RA患者和非活动期患者的血清TGF-β1水平均低于正常对照组，且活动期RA患者血清TGF-β1水平低于非活动期患者，这与Valle等[14]的研究一致。这说明TGF-β1主要起免疫抑制作用，其水平下降导致RA患者调节免疫活动的能力下降，可考虑应用TGF-β1进行RA治疗，但其使用方式、用法用量、确切的作用机制等仍需要更多的实验证明。

总之，RA患者血清中HMGB1呈高表达，提示其与RA的发病和病情严重程度密切相关，其确切的作用机制仍有待于更深入研究。RA患者血清中TGF-β1含量较少，其主要发挥免疫抑制作用，仍需要更多的研究来证明其治疗作用。

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Expression of HMGB1 and TGF-β1 in rheumatoid arthritis

HE Jiao1,JIA Zhi-Lin2

(1.Library，theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity，Dalian116011,China；2.DepartmentofHematology，theFirstAffiliatedHospitalofDalianMedicalUniversity，Dalian116011,China)

Objective To study the expression of HMGB1 and TGF-β1 in rheumatoid arthritis. Methods Included were 112 rheumatoid arthritis patients(active RA group=67，inactive RA group=45) and 80 healthy persons (control group). Serum HMGB1 and TGF-β1 were measured by ELISA. Results The expression of HMGB1 in active RA group (59.40±18.74)was higher than inactive RA group (16.58±6.02，P<0.05)and control group(13.97±2.43,P<0.05).But no statistical significance was detected between inactive RA group and control group(P>0.05).The expression of TGF-β1 in active RA group (17.13±11.26)was lower than inactive RA group (22.42±13.70)and control group(28.35±8.14). The differences between groups had statistical significance(P<0.05).Conclusion RA is closely related to HMGB1 and TGF-β1.The mechanisms need further study.

rheumatoid arthritis； HMGB1； TGF-β1

论著10.11724/jdmu.2015.02.11

辽宁省科技计划项目(2013225002)；大连市科技计划项目(2012E15SF166)

何 蛟(1981-)，男，辽宁抚顺人，馆员。E-mail:hejiao_barton@163.com

贾治林，副主任医师。E-mail:jiazl126@163.com

R593.22

A

1671-7295(2015)02-0148-03

2014-12-26；

2015-03-23)